金釵石斛遺傳多樣性研究的隨機(jī)擴(kuò)增多態(tài)dnapcr反應(yīng)體系的建立與優(yōu)化

1、1金釵石斛遺傳多樣性研究的隨機(jī)擴(kuò)增多態(tài)DNAPCR反應(yīng)體系的建立與優(yōu)化作者：王燕燕徐紅魏丹紅王崢濤【摘要】目的對影響金釵石斛隨機(jī)擴(kuò)增多態(tài)DNA（RAPD）PCR擴(kuò)增效果的一些因素進(jìn)行優(yōu)化，為進(jìn)一步研究其遺傳多樣性奠定基礎(chǔ)。方法對金釵石斛RAPD分析中一些重要影響因素進(jìn)行比較系統(tǒng)的構(gòu)建和優(yōu)化，建立金釵石斛RAPD穩(wěn)定可靠的反應(yīng)體系。結(jié)果金釵石斛較適宜的RAPDPCR反應(yīng)條件為：10μlPCR反應(yīng)體系中，5～20ng模板DNA，3.0mmo

2、lL1Mg2，0.34mmolL1dNTPs，0.6UTaqDNA聚合酶，1.5μmolL1引物，較適宜的退火溫度為36℃。結(jié)論所建立的金釵石斛RAPD反應(yīng)體系具有標(biāo)記位點(diǎn)清晰、反應(yīng)系統(tǒng)穩(wěn)定、檢測多態(tài)性能力較強(qiáng)等特點(diǎn)，可用于金釵石斛的遺傳多樣性研究。以該優(yōu)化的RAPD條件進(jìn)行重復(fù)性實(shí)驗(yàn)，其實(shí)驗(yàn)結(jié)果重復(fù)性良好?！娟P(guān)鍵詞】金釵石斛；隨機(jī)擴(kuò)增多態(tài)DNA反應(yīng)體系；優(yōu)化Abstract：ObjectiveToestablishoptimizeRA

3、PDPCRsystemofD.nobileLindl.MethodsThereliableRAPDPCRsystemfthegeicdiversitystudyofD.nobileLindl.establishedbysystematicallytestingoptimizingtheimptantconcentrationsofthefacts.ResultsTheconditionsthatwere3栽培、化學(xué)成分、藥理、毒理等方

4、面進(jìn)行了較為廣泛的研究［1～3］，而有關(guān)遺傳多樣性方面研究甚少。隨機(jī)擴(kuò)增多態(tài)DNA（RomAmplifiedPolymphicDNARAPD)技術(shù)是由Williams等于1990年創(chuàng)立的一種DNA分子標(biāo)記方法，它可直接反映染色體組DNA多態(tài)性，能從遺傳本質(zhì)上揭示品種間多態(tài)性及親緣關(guān)系，不受環(huán)境限制，具有操作簡單快捷、成本低、通用性好、靈敏度高且不需預(yù)先了解基因組的相關(guān)分子生物學(xué)信息等優(yōu)點(diǎn)［45］，被廣泛應(yīng)用于種質(zhì)資源分析、生物種群劃分、

5、遺傳相關(guān)分析、遺傳圖譜構(gòu)建、基因定位等方面［6］。本實(shí)驗(yàn)就模板濃度、Mg2濃度、dNTP濃度、Taq酶濃度、引物濃度、退火溫度等影響RAPD反應(yīng)的諸因素進(jìn)行了構(gòu)建和優(yōu)化，建立多態(tài)性強(qiáng)、穩(wěn)定性好的金釵石斛RAPD反應(yīng)體系，為進(jìn)一步研究金釵石斛的遺傳多樣性、開發(fā)利用這一珍稀藥用資源提供技術(shù)支持。1材料與儀器1.1材料金釵石斛，新鮮材料于2005年采自云南文山縣，現(xiàn)保存于上海中醫(yī)藥大學(xué)中藥研究所，材料經(jīng)上海中醫(yī)藥大學(xué)中藥研究所徐紅博士鑒定原植