蘋果SSR反應(yīng)體系的建立及品種資源遺傳多樣性分析.pdf

1、蘋果是世界上栽培最廣泛的果樹(shù)之一，由于蘋果具有童期長(zhǎng)、生長(zhǎng)周期長(zhǎng)、植株大和自交不親和等特點(diǎn)，用傳統(tǒng)的方法進(jìn)行蘋果品種鑒定費(fèi)時(shí)費(fèi)力且費(fèi)用較高。近年來(lái)，隨著分子生物學(xué)的興起，特別是DNA分子標(biāo)記技術(shù)在蘋果上的發(fā)展和應(yīng)用，使蘋果品種快速鑒定成為可能，其中SSR分子標(biāo)記技術(shù)以其豐富的多態(tài)性、共顯性遺傳、重復(fù)性好和操作簡(jiǎn)便等優(yōu)點(diǎn)日益受到人們的重視。本研究在建立和優(yōu)化蘋果SSR反應(yīng)體系的基礎(chǔ)上，應(yīng)用SSR分子標(biāo)記技術(shù)對(duì)42份蘋果品種的遺傳多樣性進(jìn)行

2、了研究，在分子水平上為蘋果種質(zhì)資源鑒定和品種親緣關(guān)系分析提供了依據(jù)，并對(duì)SSR分子標(biāo)記技術(shù)應(yīng)用于蘋果品種鑒定和品種權(quán)保護(hù)的可行性進(jìn)行了評(píng)價(jià)。主要研究結(jié)果如下： (1)對(duì)蘋果品種SSR的反應(yīng)體系進(jìn)行了優(yōu)化，確定了最適反應(yīng)體系：在20μL反應(yīng)體系中，Mg2+、引物、和dNTP的最適濃度分別為2.5mmol·L-1、0.8μmol·L-1、0.10mmol·L-1；反應(yīng)體系中TaqDNA聚合酶宜加入1U，模板DNA應(yīng)加入15～30ng

3、。PCR反應(yīng)熱循環(huán)程序：94℃預(yù)變性4min；94℃變性1min、48.5～52℃退火1min、72℃延伸1min，30個(gè)循環(huán)；最后72℃延伸5min。經(jīng)多次擴(kuò)增試驗(yàn)證明，該體系重復(fù)性和穩(wěn)定性良好。 (2)本研究用12對(duì)引物組合對(duì)42份蘋果品種進(jìn)行了PCR擴(kuò)增，共擴(kuò)增出165條DNA譜帶，其中多態(tài)性帶90條，占擴(kuò)增總帶數(shù)的54.88﹪，不同引物擴(kuò)增的帶數(shù)分布在5～24條之間，平均13.6條。根據(jù)SSR譜帶數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)結(jié)果，應(yīng)用NTS

4、YS軟件進(jìn)行遺傳相似系數(shù)計(jì)算，42份蘋果品種的相似系數(shù)的變化范圍在0.713～1.000之間，說(shuō)明供試蘋果種質(zhì)資源間的遺傳變異不大，遺傳多樣性偏低。利用UPGMA法構(gòu)建聚類樹(shù)狀圖，結(jié)果發(fā)現(xiàn)：在遺傳距離為0.800的閾值下SSR標(biāo)記能很好的區(qū)分除富士系之外的全部供試品種(系)，將蘋果品種劃分為四個(gè)類群，絕大部分系譜相同或相似的品種聚在了一起?？梢?jiàn)，SSR分子標(biāo)記技術(shù)能夠?qū)⑼ㄟ^(guò)常規(guī)雜交育種手段選育的品種區(qū)分開(kāi)，而且能較好地揭示品種間的親緣關(guān)