藥物的雜質(zhì)檢查ppt課件

1、1,第三章 藥物的雜質(zhì)檢查,Contents,,,特殊雜質(zhì)檢查方法,3,,,概 述,1,,,一般雜質(zhì)檢查方法,2,,,展望,4,3,中國藥典（2010年版）二部凡例中規(guī)定：檢查項下包括安全性(safety)、有效性(efficacy)、均一性(homogenization)、純度(purity)四個方面。,第一節(jié) 概述,4,第一節(jié) 概述,一、藥物純度的概念與要求,1.純度（Purity）藥物的純凈程度。,2.雜質(zhì) (Impuriti

2、es) 藥物中存在的無治療作用或影響藥物的穩(wěn)定性和療效，甚至對人體健康有害的物質(zhì)。ChP將任何影響藥品純度的物質(zhì)均稱為雜質(zhì)。,2010版藥典，二部，附錄XIX F藥品雜質(zhì)分析指導原則(Guidelines for the Analysis of Impurities in Drugs)任何影響藥品純度的物質(zhì)均稱為雜質(zhì)。 Any substance that affects the purity of a d

3、rug is considered as an impurity ) 藥品質(zhì)量標準中的雜質(zhì)系指在按照經(jīng)國家有關(guān)藥品監(jiān)督管理部門依法審查批準的規(guī)定工藝和規(guī)定原輔料生產(chǎn)的藥品中，由其生產(chǎn)工藝或原輔料帶入的雜質(zhì)，或在貯存過程中產(chǎn)生的雜質(zhì)。不包括變更生產(chǎn)工藝或變更原輔料而產(chǎn)生的新的雜質(zhì)，也不包括摻入或污染的外來物質(zhì)。,6,雜質(zhì)控制的理念,純度控制限度控制雜質(zhì)譜控制（impurity profiles）,7,純度控制,早期的藥物質(zhì)量控制主

4、要基于容量法、分光光度法等經(jīng)典的化學分析方法, 對雜質(zhì)的控制主要是通過對藥品的純度控制間接實現(xiàn)的。BP(1980) 提出了有關(guān)物質(zhì)(related substances)的概念。,8,限度控制,BP(1988) “與已知雜質(zhì)相比, 對藥品中的未知(潛在)雜質(zhì)的控制更為重要”。BP(1998) 在附錄中首次增加了有關(guān)物質(zhì)和殘留溶劑檢查通則, 增加了雜質(zhì)控制指導原則; 同時在各論中對化學藥品的已知雜質(zhì)給出了具體的名稱、分子式和結(jié)構(gòu)式,

5、并通過“已知雜質(zhì)”、“任意單個雜質(zhì)”和“總雜質(zhì)”實現(xiàn)對化學藥品中雜質(zhì)的控制。標志著對藥品中雜質(zhì)的“限度控制”理念已經(jīng)成熟。Ch.P.2010年版,9,雜質(zhì)譜(impurity profiles)控制,藥品中的諸雜質(zhì)的種類與含量被總稱為雜質(zhì)譜理想的控制理念應(yīng)是針對藥品中的每一個雜質(zhì), 依據(jù)其生理活性逐一制定其質(zhì)控限度。,3.藥物純度與試劑純度,共同點——均規(guī)定所含雜質(zhì)的種類和限量.,不同點,①藥物純度從用藥安全、有效和對藥物穩(wěn)定性等

6、方面考慮,只有合格品和不合格品. ②試劑純度是從雜質(zhì)可能引起的化學變化對使用的影響以及試劑的使用范圍和使用目的加以規(guī)定,它不考慮雜質(zhì)對生物體的生理作用及毒副作用。,,化學試劑不能代替藥品！,11,硫酸鋇（BaSO4)　藥典規(guī)定檢查可溶性鋇鹽。,化學試劑一般分為4個等級〔基準試劑、優(yōu)級純（GR）或特種試劑(光譜純、色譜純、農(nóng)藥殘留檢測級)、分析純（AR）和化學純（CR）〕,二、雜質(zhì)的來源與種類,雜質(zhì)的來源,,生產(chǎn)過程,儲藏過程,,合

7、成過程中，原料不純或反應(yīng)不完全，中間體、副產(chǎn)物在精制中未除盡制劑過程試劑、溶劑、還原劑殘留異構(gòu)體、多晶體使用的金屬器皿、裝置、工具引入的金屬雜質(zhì),在溫度、濕度、日光、空氣等外界條件影響下，或因微生物的作用，引起藥物發(fā)生水解、氧化、分解、異構(gòu)化、晶型轉(zhuǎn)變、聚合、潮解和發(fā)霉等變化,14,一般雜質(zhì)（general impurities)指在自然界中分布較廣泛，在多種藥物的生產(chǎn)和貯藏過程中容易引入的雜質(zhì)，如酸、堿、水分、氯化物、硫酸鹽

8、、砷鹽、重金屬等。特殊雜質(zhì)（special impurities）指在特定藥物的生產(chǎn)和貯藏過程中引入的雜質(zhì)，這類雜質(zhì)隨藥物的不同而不同。,15,異煙肼(isoniazid)的合成路線,4-甲基吡啶蒸氣、水蒸氣在釩觸媒存在下與空氣中的氧氣作用，氧化為異煙酸；再與水合肼反應(yīng)，即得。若最后一步反應(yīng)不完全，產(chǎn)品中可混有游離肼。,,三、雜質(zhì)的限量(Limit Test),藥物中所含雜質(zhì)的最大允許量。通常用百分之幾或百萬分之幾 (parts

9、per million, ppm ),注意平行原則,,注意單位統(tǒng)一！,示例一 茶苯海明中氯化物檢查,取本品0.30g 置200 ml量瓶中，加水50ml、氨試液3ml和10%硝酸銨溶液6ml，置水浴上加熱5min，加硝酸銀試液25ml，搖勻，再置水浴上加熱15min，并時時振搖，放冷，加水稀釋至刻度，搖勻，放置15min，濾過，取續(xù)濾液25ml置納氏比色管中，加稀硝酸10ml，加水稀釋至50ml，搖勻，在暗處放置5min，與標準氯化鈉溶

10、液(10μg Cl-/ml)1.5 ml制成的對照液比較，求氯化物的限量。,,,,C=10 μg/ml,V=1.5 ml,S=?,答案：L（%）=0.04%,示例二 腎上腺素中酮體的檢查,取本品0.2g,置100ml量瓶中，加鹽酸溶液(9-2000)溶解并稀釋至刻度，搖勻，在310nm處測定吸光度不得超過0.05，酮體的百分吸收系數(shù)為435，求酮體的限量。,V=100 ml,C=A/E=0.05/435=1.15×10-4 g

11、/100ml,S=0.2 g,答案：L（%）=0.0575%,示例三 磷酸可待因中嗎啡的檢查,取本品0.10 g,加鹽酸溶液(9-1000)使溶解成5ml，加亞硝酸鈉試液2ml，放置15min，加氨試液3ml，所顯顏色與嗎啡試液[取無水嗎啡2.0mg，加鹽酸溶液(9-1000)使溶解成100ml] 5.0ml用同一方法制成的對照液比較，不得更深。問限量是多少？,示例四 苯巴比妥鈉中重金屬的檢查,取本品2.0g,加水32ml，溶解后緩緩加

12、入1mol/L鹽酸溶液8ml，充分振搖，靜置數(shù)分鐘，濾過，取濾液20ml，加酚酞指示液1滴與氨試液恰顯粉紅色，加醋酸鹽緩沖液(pH3.5)2ml與水適量成25ml，依法檢查，含重金屬不得超過10ppm。試計算應(yīng)取得標準鉛溶液(每1ml相當于10μg Pb)的體積。,22,第二節(jié) 雜質(zhì)的檢查方法,雜質(zhì)的檢查方法,化學方法,色譜方法,光譜方法,其他方法,顯色反應(yīng)檢查法、沉淀反應(yīng)檢查法生成氣體的檢查法、滴定法,薄層色譜法、HPLC法GC法

13、、毛細管電泳法,UV法、IR、原子吸收分光光度法,熱分析法、酸堿度檢查法物理性狀檢查法,,23,氯化物檢查法硫酸鹽檢查法鐵鹽檢查法重金屬檢查法砷鹽檢查法干燥失重測定法水分測定法,第三節(jié) 藥物中一般雜質(zhì)的檢查,熾灼殘渣檢查法易炭化物檢查法殘留溶劑測定法溶液顏色檢查法溶液澄清度檢查法,一、氯化物檢查法(limit test for chlorides),供試品,,稀HNO310ml,H2O,,AgNO31ml,標準溶液

14、,稀HNO310ml,,H2O,,AgNO31ml,,暗處放置5min(避免AgCl分解),NaCl,25,To each of the Nessler cylinder described above add 1.0 ml of silver nitrate TS, dilute with water to 50 ml and mix well. Allow to stand in the dark for 5 minutes, c

15、ompare the opalescence produced by viewing down the vertical axis of the cylinders against a black background. 加入硝酸目的 可避免弱酸銀鹽如碳酸銀、磷酸銀以及氧化銀沉淀的形成而干擾檢查，同時還可加速氯化銀沉淀的生成外產(chǎn)生較好的乳濁。酸度以50ml供試溶液中含稀硝酸10ml為宜。為了避免光線使單質(zhì)銀析出，在觀察前應(yīng)在暗處放

16、置5分鐘。,二、硫酸鹽檢查法(limit test for sulfates),K2SO4,(1) 靈敏度。 (2) 反應(yīng)需在鹽酸酸性條件下進行。 (3) 試劑：氯化鋇；標準：硫酸鉀溶液。(4) 比濁：同置于黑色背景上，自上向下觀察。,測定條件,27,三、鐵鹽檢查法(limit test for iron),1.硫氰酸鐵法 (Ch.P 和USP采用),硫酸鐵銨,硫氰酸銨,紅色,供試品,顯色，立即與同法制成的對照溶液比較,29,加鹽

17、酸的目的　在鹽酸酸性條件下反應(yīng)，可防止Fe3+的水解。加過硫酸銨的作用　加入氧化劑過硫酸銨氧化供試品中Fe2+成Fe3+，同時可防止由于光線使硫氰酸鐵還原或分解褪色。,,2.巰基醋酸法 (BP采用),,紅色,四、重金屬檢查法(limit test for heavy metals),附錄 Ⅷ H 重金屬檢查法本法所指的重金屬系指在規(guī)定實驗條件下能與硫代乙酰胺或硫化鈉作用顯色的金屬雜質(zhì)。如鉛(Pb)、銀(Ag)、汞(Hg)、銅(Cu)

18、、鎘(Cd)、錫(Sn)、銻(Sb)、鉍(Bi)、鈷(Co)、鋅(Zn)、鉬(Mo)等。在藥品生產(chǎn)過程中遇到鉛的機會較多，鉛在體內(nèi)又易積蓄中毒，故檢查時以鉛為代表。,32,第一法 硫代乙酰胺法(thioacetamide),,條件： 介質(zhì)：醋酸鹽緩沖液 (pH 3.5) 2ml 試劑：硫代乙酰胺(CH3CSNH2) 2ml 雜質(zhì)對照液：Pb(NO3)2 (10µg/ml) 靈敏度范圍： 10~20 ?g /

19、 27ml,黃色至棕黑色混懸液,同置白紙，由上向下透視,第二法 熾灼后的硫代乙酰胺法,第三法 硫化鈉法,五、砷鹽檢查法(limit test for arsenic),砷鹽是有毒的物質(zhì)，多由藥物生產(chǎn)過程所使用的無機試劑引入。砒霜(As2O3) 對照品雄黃（As4S4）、雌黃（As2S3）,,ChP采用古蔡氏法和二乙基二硫代氨基甲酸銀法檢查藥物中微量的砷鹽。,,,？,Ag2S（黑）,,古法驗砷,現(xiàn)代方法,白田道夫法,古蔡氏法,Ag

20、-DDC法,38,五、砷鹽檢查法,(一)古蔡氏法 (Gutzeit),8cm,,,有孔玻璃旋塞,導氣管,AsH3發(fā)生瓶,,,,,溴化汞試紙,,醋酸鉛棉花(60mg),,HCl Zn 粒碘化鉀試液酸性氯化亞錫試液,生成砷斑,吸收硫化氫氣體,a. KI的作用 還原劑：As5+→As3+,,,反應(yīng)速度慢,,反應(yīng)速度快,b.酸性SnCl2的作用,還原劑,① As5+→As3+,②將KI氧化生成的I2→I-,穩(wěn)定的絡(luò)離子,進而促進As

21、H3不斷生成,③與Zn粒表面形成Zn-Sn齊,,SnCl2,起去極化作用,使氫氣均勻而連續(xù)地發(fā)生,白田道夫法—含銻藥物,,棕褐色膠態(tài)砷,加入少量HgCl2,靈敏度可提高至2?g/10ml。,注意事項,砷斑不穩(wěn)定，應(yīng)干燥、避光、立即比較。 有機結(jié)合態(tài)的砷應(yīng)破壞后檢查（加酸或堿），但溫度應(yīng)低于600?C。 供試品若為鐵鹽，能消耗碘化鉀和氯化亞錫，可加酸性氯化亞錫，使高鐵離子還原后檢查。供試品（硫化物、亞硫酸鹽、硫代硫酸鹽）若在酸性條件

22、下生成硫化氫或二氧化硫，與溴化汞試紙作用生成黑色硫化汞和金屬汞，可先用硝酸處理，使其氧化為硫酸鹽。銻鹽含量較多時，可改用白田道夫（Bettendorff）法檢查砷,(二)二乙基二硫代氨基甲酸銀法 [Ag(DDC)法],,紅色膠態(tài)銀,,,目視比色法,510nm 測定A值,,,線性范圍：1～10 μg/40ml含銻藥物不干擾測定用于砷鹽的限量檢查和微量砷鹽的含量測定,(三)次磷酸法,用于硫化物、亞硫酸鹽以及含銻藥物的砷鹽檢查，不產(chǎn)生干

23、擾。靈敏度較古蔡法低。,47,六、干燥失重測定法 (Determination of Loss on Drying),干燥失重：藥品在規(guī)定的條件下，經(jīng)干燥后所減失的量。用于檢查藥物中的水分及其他揮發(fā)性物質(zhì)。恒重：供試品連續(xù)兩次干燥或熾灼后稱重的差異在0.3mg以下。（干燥至恒重的第二次及以后每次稱重都應(yīng)在規(guī)定的條件下繼續(xù)干燥1h后進行）常壓恒溫干燥法 減壓干燥器恒溫減壓干燥器,48,七、水分測定法(Dete

24、rmination of Water),第一法（費休氏法） A. 容量滴定法 B. 庫侖滴定法 以卡爾-費休氏法（Karl-Fischer）反應(yīng)為基礎(chǔ)，應(yīng)用永停滴定法測定水份。滴定劑碘不是從滴定管加入，而是由含有碘離子的陽極電解液電解產(chǎn)生。　　第二法（甲苯法）,49,八、熾灼殘渣檢查法 (Determination of Residue on ignition)系指有機藥物經(jīng)炭化或揮發(fā)性無機藥物加熱分解后，高溫熾灼

25、所產(chǎn)生的非揮發(fā)性無機雜質(zhì)的硫酸鹽。,九、殘留溶劑測定法 (Determination of organic Solvent Residue),殘留溶劑：在合成原料藥，輔料或制劑生產(chǎn)的過程中使用的，但在工藝中未能完全除去的有機溶劑。,中國藥典采用GC法測定溶劑殘留,色譜系統(tǒng)與系統(tǒng)適用性試驗(System Suitability Tests; SSTs)以直徑為0.25-0.18mm的二乙烯苯-乙基乙烯苯型高分子多孔

26、小球作為固定相，柱溫為80-170℃；并符合下列條件： ⑴用待測物的色譜峰計算的N應(yīng)大于1000； ⑵內(nèi)標物與待測物的兩個色譜峰的R≥1.5； ⑶每個標準溶液進樣5次，所得待測物與內(nèi)標物峰面積之比的RSD≤5%； 若以外標法測定，所得待測物峰面積的RSD≤10%,進行有機溶劑限度測定時，根據(jù)殘留溶劑的限度規(guī)定來確定對照品溶液的濃度；進行定量測定時，應(yīng)根據(jù)供試品中實際殘留溶劑的實際殘留量確定對照品溶液的濃度。對照

27、品溶液的色譜峰面積與供試品溶液中對應(yīng)的殘留溶劑的色譜峰面積以不超過2倍為宜。,53,頂空技術(shù)（headspace technology）,頂空分析是一種樣品預(yù)處理技術(shù),它是通過樣品基質(zhì)上方的氣體成分來測定這些組分在原樣品中的含量。具有簡便、快捷、靈敏度高等優(yōu)點。,54,Agilent G1888 頂空進樣器,56,靜態(tài)頂空,1.注射器 2.密封隔墊 3.螺帽 4.容器 5.樣品6.恒溫浴 7.溫度計,57,動態(tài)頂空（吹掃-捕集）

28、,第四節(jié) 特殊雜質(zhì)的檢查方法,59,一、色譜分析法(一)TLC法,比移值,一般要求：顆粒直徑10~40µm薄層涂布：無粘合劑 含粘合劑：常加入10~15% 煅石膏 (CaSO4·2H2O,180℃烘4h)或0.5~0.7%羧甲基纖維素鈉水溶液,① 雜質(zhì)對照品法 適用于已知雜質(zhì)并能夠得到雜質(zhì)對照品的情況② 供試品溶液的自身稀釋法對照法 適用于雜質(zhì)的結(jié)構(gòu)不能確定或無雜質(zhì)對照品的情況

29、?！?本法雖不及①法理想，但其優(yōu)點是不需要制備雜質(zhì)的對照品，還可配成幾種限量的對照溶液，比較簡單易行，所以應(yīng)用較多。　 采用本法時應(yīng)注意供試品與所檢雜質(zhì)對顯色劑所顯的顏色應(yīng)相同，顯色靈敏度也應(yīng)相同或相近。,測定法,61,供試品10µl N-甲基哌嗪10µl 50mg/ml 50µg/ml,枸櫞酸乙胺嗪,,,I2蒸氣顯色,對照品法,62,1.

30、樣品高濃度　2. 樣品低濃度（對照溶液）,自身對照法,63,③ 雜質(zhì)對照品法與供試品溶液自身稀釋法對照法并用　 有對照品用①，無對照品或未知雜質(zhì)用②法④ 對照藥物法 無合適的雜質(zhì)對照品，或者是供試品顯示的雜質(zhì)斑點顏色和主成分顏色有差異，難以判斷限量。,64,對照藥物法,1.樣品高濃度　2.樣品低濃度　3. 對照藥物（濃度同1）,(二)HPLC法,內(nèi)標法：用于有雜質(zhì)對照品時能夠測定雜質(zhì)的校正因子雜質(zhì)的。含量測定?？杀苊庖驑悠非疤?/p>

31、理及進樣體積誤差對測定結(jié)果的影響。 外標法(External standard method )：用于有雜質(zhì)對照品或雜質(zhì)對照品易制備的情況。加校正因子的主成分自身對照法：用于有雜質(zhì)對照品時，雜質(zhì)的含量測定。不加校正因子的主成分自身對照法 ：用于沒有雜質(zhì)對照品的情況。峰面積歸一化法：粗略測量供試品中雜質(zhì)的含量。,67,內(nèi)標法（internal standard method ）,內(nèi)標法：使用內(nèi)標法可以抵消儀器穩(wěn)定性差，進樣量不夠準

32、確等原因帶來的定量分析誤差。如果在樣品預(yù)處理前加入內(nèi)標物，則可抵消方法全過程引起的誤差。校正因子（Correction factor ）：等量的不同物質(zhì)在相同的實驗條件下在同一檢測器上的響應(yīng)值經(jīng)常不同，為了校正這種響應(yīng)的差別，引入了校正因子的概念。,68,AS：內(nèi)標物質(zhì)的峰面積CS：內(nèi)標物質(zhì)的濃度 AR：雜質(zhì)對照品的峰面積CR：雜質(zhì)對照品的濃度CX：供試品中雜質(zhì)的濃度,,,220 260

33、 300 nm,腎上腺酮及腎上腺素的紫外吸收曲線,,,,λmax310nm,二、光譜分析法,,,雜質(zhì)與一定試劑產(chǎn)生沉淀雜質(zhì)與一定試劑產(chǎn)生顏色反應(yīng)雜質(zhì)與一定試劑反應(yīng)產(chǎn)生氣體,三、化學分析法,呋塞米中芳香第一胺的檢查,呋塞米,2-氨基-4-氯-5-氨磺酸基苯甲酸,,重氮化-耦合反應(yīng)顯色,氯硝柳胺中5-氯水楊酸的檢查,氯硝柳胺,5-氯水楊酸,,三氯化鐵顯色,四、物理分析法,嗅味及揮發(fā)性的差異 顏色的差異

34、溶解行為的差異 旋光性質(zhì)的差異 吸附或分配性質(zhì)的差異 對光選擇吸收性質(zhì)的差異,旋光性質(zhì)的差異,Ch.P規(guī)定黃體酮在乙醇中的比旋度為： ＋186°～198°,75,藥典2010年版,一部　附錄Ⅸ A. 雜質(zhì)檢查法 藥材中混存的雜質(zhì)系指下列各類物質(zhì)： 1. 來源與規(guī)定相同，但其性狀或部位與規(guī)定不符；

35、 2. 來源與規(guī)定不同的有機質(zhì)； 3. 無機雜質(zhì)，如砂石、泥塊、塵土等。 檢查方法 1. 取規(guī)定量的供試品，攤開，用肉眼或放大鏡（5～10倍）觀察，將雜質(zhì)揀出；如其中有可以篩分的雜質(zhì)，則通過適當?shù)暮Y，將雜質(zhì)分出。

36、 　　2. 將各類雜質(zhì)分別稱重，計算其在供試品中的含量（%）。,思考題,熟悉雜質(zhì)的來源和分類、藥物純度與試劑純度的區(qū)別。掌握中國藥典（2010年版）二部凡例中規(guī)定：檢查項下包括哪四方面內(nèi)容。了解雜質(zhì)控制的三個理念。掌握雜質(zhì)、一般雜質(zhì)、特殊雜質(zhì)、重金屬、熾灼殘渣、干燥失重、恒重的定義。掌握雜質(zhì)限量的計算方法。掌握氯化物、硫酸鹽、鐵鹽、重金屬、砷鹽檢查法、水分測定法的基本原理。掌握TLC法和HPLC法進行