環(huán)境激素五氯酚(PCP)的熒光定量PCR檢測研究.pdf

1、五氯酚C6HCl5O(PCP)是一種酚類化合物，可干擾動物體正常的內(nèi)分泌功能，是環(huán)境內(nèi)分泌干擾物質(zhì)中具有代表性的物質(zhì)，其化學(xué)性質(zhì)比較穩(wěn)定，易富集于沉積物中，不易降解，在環(huán)境中的殘留量相對較高，因此當(dāng)它作為土壤殺蟲劑曾在世界范圍內(nèi)廣泛應(yīng)用時，也就造成了嚴(yán)重的環(huán)境問題。目前國內(nèi)外學(xué)者對五氯酚的監(jiān)測方法進(jìn)行了研究，但利用環(huán)境激素五氯酚的受體，結(jié)合熒光定量PCR技術(shù)，對其進(jìn)行分析和監(jiān)測尚未見國內(nèi)外報(bào)道。本實(shí)驗(yàn)就此做了初步研究。主要研究成果如下：

2、
　　 1．將購于市場的金魚暴露于一定濃度的五氯酚中馴養(yǎng)一個月后，取其受體用于實(shí)驗(yàn)，通過電泳發(fā)現(xiàn)，其的熒光強(qiáng)度強(qiáng)于未暴露的一組金魚。這證明了外界環(huán)境激素五氯酚存在的情況下，可以刺激金魚產(chǎn)生更多的相應(yīng)的受體。
　　 2．實(shí)驗(yàn)中采用了羥基磷灰石微量法對配體受體結(jié)合后的情況進(jìn)行了分析，結(jié)果表明，此方法除去了雜質(zhì)蛋白，純化效果顯著，從而可減少PCR實(shí)驗(yàn)中的非特異性擴(kuò)增。
　　 3．本研究中分別進(jìn)行了常規(guī)PCR實(shí)驗(yàn)與SYB

3、R Green I熒光定量PCR實(shí)驗(yàn)。前者作為定性分析，后者作為定量分析。實(shí)驗(yàn)中得了到五氯酚濃度與Ct值的關(guān)系式：y=-0.448x+9.032。分析結(jié)果可知，五氯酚濃度為10-13-10-9mol/L時，線性關(guān)系顯著(R2=0.9975)。而當(dāng)進(jìn)一步降低五氯酚濃度時，檢測結(jié)果為陰性，從而確定本實(shí)驗(yàn)中熒光定量PCR法對五氯酚的最低檢測限為10-13mol/L;重復(fù)性實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，熒光定量PCR法的重復(fù)性好。
　　 4．實(shí)驗(yàn)還將熒

4、光定量PCR方法與高效液相色譜法做了比較，當(dāng)五氯酚的濃度為10-9mol/L時，高效液相色譜法已檢測不出五氯酚，從而進(jìn)一步證實(shí)熒光定量PCR測定五氯酚的檢測限低。
　　 5．本實(shí)驗(yàn)最后還將熒光定量PCR方法應(yīng)用到水中及白蛤中五氯酚含量的檢測，確定了受測樣品中五氯酚的含量，研究表明，結(jié)果是可信的。
　　 綜上，本實(shí)驗(yàn)成功建立了五氯酚的SYBR Green I熒光定量PCR監(jiān)測方法，檢測限低，重現(xiàn)性較好且簡單易行，可以將作為