風(fēng)濕病的常用免疫學(xué)檢查及臨床應(yīng)用

1、風(fēng)濕病的常用免疫學(xué)檢查及臨床應(yīng)用,概 述,多數(shù)風(fēng)濕病的發(fā)病機(jī)制都與免疫失調(diào)有關(guān)， 因此檢測(cè)自身抗體（抗細(xì)胞內(nèi)、細(xì)胞表面和細(xì)胞外抗原的免疫球蛋白。）、補(bǔ)體、 淋巴細(xì)胞及其它免疫學(xué)成份有助于許多疾病的診斷、治療和療效判斷。對(duì)檢驗(yàn)結(jié)果的判斷必須密切結(jié)合臨床，并進(jìn)行綜合分析。,抗核抗體(ANA）,是指抗細(xì)胞核成分的抗體，換言之是指一組對(duì)細(xì)胞核內(nèi) DNA 、RNA、蛋白質(zhì)、或這些物質(zhì)的分子復(fù)合物的自身抗體。,一、核的組成及其抗原性,細(xì)胞核

2、是由核膜、核仁、染色質(zhì)和核液組成。核膜為雙層脂質(zhì)結(jié)構(gòu)， 膜孔和內(nèi)層的蛋白具有抗原性，間接免疫熒光 檢查出現(xiàn)周邊核染色。核仁抗原包括核糖體蛋白、U3及Th小RNA s， PM-Scl抗原和核仁的Ku蛋白及增殖細(xì)胞核抗原（PCNA）。染色質(zhì)是由DNA和組蛋白組成，它排列的基本結(jié)構(gòu)亞單位為核小體數(shù)百種非組蛋白， 它們具有結(jié)構(gòu)維持、基因表達(dá)及酶的作用，都是免疫反應(yīng)潛在的目標(biāo)，,二、檢測(cè)方法,對(duì)流免疫電泳（ＣＩＥ）間接免疫熒光（ＩＦ）

3、放射免疫（ＲＩＡ）免疫印跡（ＩＢＴ）酶聯(lián)免疫吸咐試驗(yàn)（ＥＬＩＳＡ）,三、抗核抗體的種類及臨床意義,1954年Hargrave發(fā)現(xiàn)SLE 病人血液中的LE細(xì)胞, 它是抗核抗體譜檢查的起源, 它所針對(duì)的核抗原是DNA-主蛋白(DNP)，目前已采用了簡(jiǎn)易和迅速的抗DNP抗體測(cè)定取代LE 細(xì)胞的檢查。它的陽(yáng)性率在未治SLE中50-85％（＋），RA 10 ％（＋），PSS、PM/DM 及藥物過(guò)敏等均有（＋）。,（一）分型,H．均質(zhì)型：與

4、組蛋白和抗DNA抗體有關(guān)，見(jiàn)于SLE, 藥物性狼瘡S．斑點(diǎn)型： 與抗ENA抗體有關(guān)，見(jiàn)于CTDP．周邊型 與抗DNA抗體有關(guān)，見(jiàn)于SLEC．著絲點(diǎn)型 與DNA蛋白結(jié)合體有關(guān)，為CREST 綜合征的標(biāo)記性抗體 N．核仁型 與抗4-6sRNA有關(guān)，見(jiàn)于PSS 不同的底物ANA的陽(yáng)性率不同。,國(guó)際以Hep-2作為基質(zhì),━━━━━━━━━━━━━━

5、 SLE PSS ━━━━━━━━━━━━━━ HEP-2 95％ 70％ 鼠肝 85％ 50％ ━━━━━━━━━━━━━━,（二）分類,1、ds-DNA檢測(cè)━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━ Farr（RIA） 結(jié)合力＞20％（＋）

6、＞30％ SLE TE（馬疫錐蟲(chóng)） 1：5（＋） 1：10 SLE ━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━,抗ds-DNA抗體是SLE的重要抗體。 40-60％的SLE抗ds-DNA 抗體陽(yáng)性,特別是活動(dòng)性SLE和狼瘡腎， 其它風(fēng)濕性疾病則陽(yáng)性率很低。,2、抗Histon抗體,不同疾病中的陽(yáng)性率（ELISA）藥物性狼瘡 約為95％

7、 SLE 50－70％ PM/DM 13％RA 23％ 服INH 53％SS 30％ 服他巴唑 20％PSS 27％ 服苯妥因鈉 18％,3、抗ENA抗體,常見(jiàn)七種常見(jiàn)的ENA抗體α-SM（病人名）α-J0-1（病人名John）α-RNP（nRNA）α-PM-

8、1（polymyositis）α-SS-A（病名） α-Scl-70（sclerederma）α-SS-B（病名）,抗Sm抗體,僅在SLE中出現(xiàn)的陽(yáng)性率為25％左右，它是SLE的標(biāo)記性抗體， 它對(duì)早期，不典型SLE及治療緩解后SLE的回顧性診斷有很大幫助,抗nRNP抗體,在多種風(fēng)濕病中出現(xiàn)，常與雙手腫脹，雷諾氏現(xiàn)象，指端硬化相關(guān)。當(dāng)抗nRNP 陽(yáng)性而同時(shí)抗dsDNA陰性，則腎病發(fā)生率較低。在METD中幾乎100 ％陽(yáng)性,抗SS-A

9、/Ro抗體,在原發(fā)SS中70-80％（＋），SLE 40％（＋），RA 20％（＋）。以鼠肝為底物的ANA檢測(cè)中，抗SS-A抗體常呈陰性反應(yīng)， 用免疫印跡法檢測(cè)時(shí)它可與60KD 和52KD 兩條蛋白多肽反應(yīng)，作者及一些文獻(xiàn)都認(rèn)為60KD的多肽在SLE中較SS更多見(jiàn)。進(jìn)一步的研究表明抗SS-A抗體與新生兒狼瘡，先天性房室傳導(dǎo)阻滯，光敏感相關(guān)。,抗SS-B/La抗體,在原發(fā)SS中50-60％（＋），SLE 10％（＋）故有人稱抗SS-B抗

10、體是SS的標(biāo)記性抗體。,抗RIB抗體（ribosome RNP),在SLE中24％（＋），且常常在活動(dòng)期SLE中存在，但不隨病情的緩解而消失， 可持續(xù)1~2年?？筊IP抗體與LN和NP較密切, 有報(bào)導(dǎo)說(shuō)與在RIP陽(yáng)性的SLE中37%發(fā)生NP，而RIP陰性的SLE中僅次16%發(fā)生NP，兩者有顯著差異,抗PCNA(proliferating cell nuclear antigen)抗體,針對(duì)的是36Kd的DNA 聚合酶副蛋白，在SLE中2

11、-10％（＋), 而在其它結(jié)締組織病中陰性。,抗Pm-1抗體,在PM/DM 中8-15％(+) , 在PSS中3％(+)。在PM與PSS重疊且伴有腎炎的病人中，陽(yáng)性率可高達(dá)80%,抗Jo-1抗體,在PM中25-30％（＋) ，合并肺間質(zhì)病變時(shí)其陽(yáng)性率可高達(dá)60%，被視為PM的標(biāo)記性抗體。如患者有發(fā)熱，對(duì)稱性關(guān)節(jié)炎，“工藝手”，雷諾氏現(xiàn)象及肌炎并肺間質(zhì)病變，抗Jo-1抗體常陽(yáng)性，此時(shí)稱之為抗Jo-1抗體綜合癥,抗Scl-70抗體,在PS

12、S中30~40％（＋) ，是PSS 的標(biāo)記抗體。有報(bào)道抗Scl-70抗體陽(yáng)性的PSS患者肺纖維化的發(fā)生率是抗Scl-70抗體陰性患者的10倍。,抗Ku抗體,在SLE, MCTD, PSS中30-50％（＋），DM中僅5％（＋）。,抗Ki抗體和抗Mi-2,抗Ki抗體在SLE中8-20％（＋）, 其價(jià)值不明。在其它風(fēng)濕病中僅很低的陽(yáng)性率。抗Mi-2抗體在PM中5％（＋）,抗 RA33抗體,在RA中36%（+），尤其是早期RA血清中。有人隨

13、訪了 抗 RA33抗體陽(yáng)性又未能確診的關(guān)節(jié)炎，結(jié)果大部分病人在8~24個(gè)月后均發(fā)生典型的RA。另需注意的是u1RNP可能與RA33有交叉反應(yīng)，且抗 RA33抗體的消長(zhǎng)與病情和用藥無(wú)關(guān)。 （1989年Hassfeld首次報(bào)道）,總之檢測(cè)抗核抗體的意義就在于幫助一些疾病的診斷（有些抗 核抗體有較高診斷特異性），觀察治療反應(yīng)，判斷疾病的活動(dòng)性。（不同抗體不同對(duì)待，如RNP,Sm就與活動(dòng)性無(wú)關(guān)）。,疾病與抗核抗體關(guān)系,A－dsDNA

14、 SLE A-sm SLE A-scl-70 PSS A-Centromere CREST A-Jo-1 PM A-Pm-1 PM/DM A-SSB SS A-SSA

15、 SS. SLE A-RNP MCTD. CTD A-P蛋白 SLE,抗磷脂抗體（APL),抗磷脂抗體包括狼瘡抗凝因子和一組抗負(fù)電磷脂抗體目前應(yīng)用最多的是抗心磷脂抗體(AcL)，它有IgG、IgM和IgA 三種成份，IgG更具特異性，而IgA最不具特異。Acl與HLADR、DQ及C4有關(guān)。在SLE患者的AcL陽(yáng)性率是33－44％（ELISA法），在合

16、并有網(wǎng)狀青紫或中樞神經(jīng)病變的SLE其陽(yáng)性率達(dá)80％ 或90％，在其它風(fēng)濕病，如 PSS、RA、SS和MCTD中陽(yáng)性率分別是23％、15％、10％和14％。AcL 與反復(fù)動(dòng)脈、靜脈血栓、習(xí)慣性流產(chǎn)、血小板減少以及神經(jīng)系統(tǒng)癥狀密切相關(guān)，是診斷抗磷脂抗體綜合征（APS）不可缺少的指標(biāo)。（1957年Conley 首次報(bào)道）,抗內(nèi)皮細(xì)胞抗體（AECA）,是一種針對(duì)內(nèi)皮細(xì)胞膜蛋白的抗體。在SLE中的陽(yáng)性率約14-85％， 也可出現(xiàn)于RA、MCTD

17、、SS以及一些血管炎疾病如Wegener's肉芽腫、 多 動(dòng)脈炎、Behcet's病以及kawasaki疾病中。IgG、IgM亞類的AECA 與疾 病活動(dòng)性顯著相關(guān)，AECA與血管損傷密切相關(guān)，尤其是腎臟累及時(shí)。當(dāng)血管炎發(fā)作緩解，則AECA滴度下降。,抗中性粒細(xì)胞漿抗體(ANCA),是一種與中性粒細(xì)胞或單核細(xì)胞胞漿中的溶酶體酶起反應(yīng)的抗體。ANCA 可分為胞漿型ANCA(cANCA)和核周型ANCA(pANCA)，其滴度

18、常與病情活動(dòng)相關(guān)cANCA抗原主要為顆粒中的蛋白酶－３（PR 3 -protlinase），pANCA抗原主要為髓過(guò)氧化酶（Hyploperoxidase,MPO)。８０％韋格氏肉芽腫病人血清中有cANCA，特異性為90％。 少數(shù)巨細(xì)胞動(dòng)脈炎、大動(dòng)脈炎、過(guò)敏性紫癜、白細(xì)胞破碎性皮膚性血管炎和白塞病等cANCA也可陽(yáng)性。pANCA不如cANCA具有診斷特異性，在鏡下多動(dòng)脈炎、Churg-sttrauss及其它自身免疫性疾?。ㄓ不阅懝苎?、

19、潰瘍性，結(jié)腸炎、肝炎、狼瘡、類風(fēng)關(guān)、干燥等）中均能出現(xiàn)。ANCA可能參與血管炎的發(fā)病。,類風(fēng)濕因子(RF),RF是抗人或動(dòng)物IgG分子FC片段的抗體，它不僅能與變性的IgG 反應(yīng)， 也能與自身的或異體的IgG反應(yīng)， 還能與其它抗原如核蛋白發(fā)生交叉反應(yīng)。按照抗免疫球蛋白類型分為IgM-RF，IgG-RF和IgA-RF三種，后種分子不易于其它非相關(guān)抗原反應(yīng)，故特異性較強(qiáng)，具有更高的診斷價(jià)值。,如今最常用于檢測(cè)RF的方法仍是乳膠凝集法(Ig

20、M型)，RA 患者中陽(yáng)性率 可達(dá)80％，如乳膠法RF陰性，臨床高疑RA，可用ELISA測(cè)IgG和IgA型RF。 一般抗體滴度越高，關(guān)節(jié)外的表現(xiàn)越重，疾病越活動(dòng)，預(yù)后越差。在5％的正常老人，其它風(fēng)濕病、細(xì)菌性心內(nèi)膜炎、結(jié)核、肝炎、肺纖維化等多種疾病中都可出現(xiàn)不同比例、低滴度的RF陽(yáng)性（除干燥綜合征癥為高 滴度）。此外RF檢測(cè)是劃分血清陰性關(guān)節(jié)炎是重要標(biāo)準(zhǔn)。,淋巴細(xì)胞分型(lymphocyte typy),淋巴細(xì)胞由T、B二類組成，它們是免

21、疫反應(yīng)中的重要物質(zhì)基礎(chǔ)。在免疫系統(tǒng)中，B淋巴細(xì)胞執(zhí)行特異體液免疫功能，T淋巴細(xì)胞則執(zhí)行特異 細(xì)胞免疫和免疫調(diào)節(jié)功能。因此這二類細(xì)胞的數(shù)目及功能異常均可導(dǎo)致免疫學(xué)異常。,淋巴細(xì)胞表面表達(dá)多種蛋白分子，有些只暫時(shí)出現(xiàn)在細(xì)胞發(fā)育的某一階段，有些表達(dá)于全部細(xì)胞表面，有些分子只表達(dá)于特定功能亞群的T或B細(xì)胞表面，故稱之為分化抗原。 這些分子均可被相應(yīng)單克隆抗體識(shí)別，從而將T、B淋巴細(xì)胞分成許多成熟度和活性不同的亞型。,部分分化抗原命名的T、B細(xì)胞

22、,分化抗原 分子量 分布及特點(diǎn) 意 義CD1 21/48 不成熟T細(xì)胞 血液病↑CD3 20/20/25 成熟T細(xì)胞 自身免疫病、SLE、RA↑CD4 55 輔助T細(xì)胞 免疫活躍↑、免疫缺陷↓CD8

23、 30/45 殺傷/抑制T細(xì)胞 SLE↓CD25 50-55 IL-2受體α鏈 自身免疫病↑CD45RO 80 記憶T細(xì)胞 同上，尤其是RACD19 95 早期B細(xì)胞 急性淋巴細(xì)胞白血病↑CD21 1

24、40 略成熟B細(xì)胞 自身免疫病↑CD22 135 成熟B細(xì)胞,與T 同上 細(xì)胞有協(xié)同作用,細(xì)胞因子(cytokine),細(xì)胞因子是活細(xì)胞分泌的具有生物活性的多肽/蛋白產(chǎn)物，是免疫調(diào)節(jié)中不可缺少的物質(zhì)，同時(shí)也參與炎癥反應(yīng)。根據(jù)來(lái)源分成淋巴因子 和單核因子兩

25、類，其中以T細(xì)胞產(chǎn)生最多，研究結(jié)果最明確， 生物學(xué)意義最明顯。如IL1-15、IF2，單核因子主要指IL1、IL6及TNF。共同 的特性是：多效性、多源性、快速反應(yīng)性及致熱原性。,細(xì)胞因子與意義,細(xì)胞因子 來(lái)源 意 義IL-1 單核、膠質(zhì)、T細(xì)胞、內(nèi)皮 誘導(dǎo)IL-2、活化淋巴細(xì)胞、

26、 致炎、抗癌 IL-2 THS細(xì)胞、胸腺細(xì)胞 促進(jìn)細(xì)胞因子、IgG分泌、活

27、 化NK和巨噬細(xì)胞、剌激T、B 細(xì)胞增殖

28、 IL-6 單核、內(nèi)皮細(xì)胞、瘤細(xì)胞 誘導(dǎo)B細(xì)胞增殖、致炎、抗癌TNF 單核、內(nèi)皮 抗腫瘤、致炎 IF(αβγ) 白細(xì)胞、成纖維細(xì)胞、 抗病毒、抗癌及免疫調(diào)節(jié) T細(xì)胞