常見風(fēng)濕病實(shí)驗(yàn)檢查

1、3,2,1,常見風(fēng)濕病實(shí)驗(yàn)檢查,風(fēng)濕病病因?qū)W檢查.RA HLA-DRB10405 0409風(fēng)險高達(dá)58.2%.SLE HLA-DQB1(nRNP), DQa(SSA/SSB), DQW6(Sm) DQB1(TCR).AS HLA-B27.,3,2,2,,BS H

2、LA-B51.PM\DM HLA-B8,DR3,DR1. HLA-DRB1 ，ancestral haplotype祖單倍體 8.1。TNF-?-308ASSC HLA-DR1,DR5,DRQI；P1A2/FN等位基因與肺纖維化，Scl-70的陽性呈正相關(guān)。SS HLA-DR3. DRBI0602，03（與腎小管酸中毒及SSB密切相關(guān)，DQAI0504，DQBI0202。RF

3、 HLA-DR4.OA HLA-A1,B8.,3,2,3,HLA研究進(jìn)展,HLA抗原基因的多態(tài)性，決定了其所表達(dá)的HLA抗原分子的多態(tài)性， 也決定了HLA系統(tǒng)免疫應(yīng)答的多樣性與復(fù)雜性。近年來HLA 基因分型迅猛發(fā)展，使得HLA 基因分型更加準(zhǔn)確，簡便和實(shí)用。 HLA 基因分型目前大致分為： 限制性片段長度多態(tài)性方法PCR- RFLP (restriction fragment

4、 length polymophism)。PCR- SSOP 是以核酸雜交為基礎(chǔ)的分型技術(shù)。 PCR擴(kuò)增特定的基因片段，與(sequence specific oligonucleotide probes)序列特異性寡核苷酸探針雜交，進(jìn)行分析鑒定。 基因芯片或微陣列技術(shù) (gene chip or DNA microarray)：,3,2,4,,該技術(shù)其原理類似于反向斑點(diǎn)雜交。它是指大規(guī)模集成電路控制的機(jī)器人在

5、尼龍膜或硅片等固相支持物的表面有規(guī)律地合成代表不同基因的寡核苷酸探針，或液相合成探針后，通過點(diǎn)樣儀點(diǎn)樣于固相支持物的表面。這些探針與放射性標(biāo)記物或熒光素標(biāo)記的樣品的DNA或 cDNA互補(bǔ)核酸序列相結(jié)合，通過放射自顯影或熒光檢測，對雜交結(jié)果進(jìn)行計(jì)算機(jī)軟件處理分析，獲得雜交信號的強(qiáng)度及分布模式圖，反映樣品中基因表達(dá)的情況。 PCR-SSCP(single-strand conformation polymorphism)可

6、檢測DNA 片段中不同位置的點(diǎn)突變，而不必象PCR- RFLP 那樣，必須選擇合適的限制酶，使其識別的位點(diǎn)正好位于等位基因的特異性核苷酸序列處。,3,2,5,,PCR- SSP(SEQUENCE SPECIFIC PRIMES)是近年唯一針對急診和尸體器官移植而設(shè)計(jì)的。其原理是通過序列特異性引物SSP ，特異的擴(kuò)增目的DNA 片段，再通過凝膠電泳等手段，判斷被擴(kuò)增序列的存在。作為第3代遺傳標(biāo)記SNP單核苷酸多態(tài)位點(diǎn)(single

7、 nucleotide polymorphism)。已有MHC-SNP分型試劑盒面市。分子的超型及抗原結(jié)合肽超基序的發(fā)現(xiàn)，表明可從功能上對類分子進(jìn)行分類使得該技術(shù)更為合理，簡明和實(shí)用，對于疾病相關(guān)性的研究和異體移植有重大意義。,3,2,6,AS的相關(guān)遺傳因素,1：HLA是一必需的致病基因，但其遺傳風(fēng)險為16~50%。其亞型有23個之多，從B2701~2723。與AS相關(guān)的是2705﹑2704﹑2701等等。2：CYP2D6﹑LM

8、P7和TNF308等TNF-?的等位基因；bosak報道HLA-2﹑Bw4﹑Cw1/2﹑DR1基因頻率均高于健康人群。這提示HLA-A﹑B﹑C﹑DR和DQ區(qū)域有與AS發(fā)病的易感基因存在；HLA-B60增加了AS依賴HLA-B27發(fā)病的易感性。,3,2,7,,鏈球菌感染的檢測 1 咽拭子培養(yǎng) 20~25%SZ(鏈球菌酶)檢 2ASO>500

9、 50% 3DNA酶-B>210 85% 4ASK(抗鏈球菌激酶)>8 5AH(抗透明質(zhì)酸酶)>128 6ANDS(抗核苷酸)<275抗EBV抗體 RAPHS-2(福氏志賀菌)

10、Reiter's肺炎克雷伯菌 AS 沙門菌,螺桿菌 ReA,3,2,8,炎性實(shí)驗(yàn)室指標(biāo),主要針對疾病活動性ESR:CRP:2周內(nèi)>80%, 大于4周<25%OTHER:1.白細(xì)胞及中性粒細(xì)胞. 2.糖蛋白及粘蛋白等.,,3,2,9,CRP,,,IL-1IL-6TNFa,?TGPF4,白細(xì)胞粘著游走,CRP,凝血纖溶系統(tǒng)亢進(jìn),ICAM-1VCAM-1

11、E-SELECTIN,血小板凝集亢進(jìn),血小板釋放反應(yīng),,,,,,,,,感染外傷免疫異常惡性增生物,3,2,10,CRP與炎癥,CRP是重要的炎性因子,其致炎作用包括:激活補(bǔ)體、刺激細(xì)胞因子分泌、上調(diào)內(nèi)皮細(xì)胞黏附分子表達(dá)、抑制一氧化氮合成、增加纖溶酶原激活物抑制劑-1的水平與活性、增強(qiáng)巨噬細(xì)胞對低密度脂蛋白的攝取及單核細(xì)胞化學(xué)趨化性、上調(diào)血管緊張素Ⅱ-1型受體的表達(dá)等.CRP與肥胖關(guān)系密切,而且脂肪細(xì)胞也可分泌CRP.CR

12、P水平隨年齡的增高而升高,女性較高,吸煙、感染和某些藥物可使其增高;而飲酒和某些藥物可使其降低.,3,2,11,生化檢查,1.Ca, P,Fe等電解質(zhì).2.UA,磷酸鈣雙水化合物CPP等. 3.肝, 腎,血常規(guī)等功能檢查.4.CPK,LDH同功酶，肌球蛋白，肌凝蛋白重鏈，肌鈣蛋白I（TnI），等肌酶譜檢查.5.蛋白及蛋白電泳檢查.6.雌激素,泌乳素等激素檢查.7.維生素,骨鈣素,TRAP,Pyd,Dpyd等.,3,2,12

13、,雌激素和催乳素PRL,大家都知道神經(jīng)-內(nèi)分泌-免疫調(diào)節(jié)網(wǎng)絡(luò)功能失調(diào)，會影響的發(fā)生和發(fā)展。 PRL（prolatin）已被證明具有免疫調(diào)節(jié)作用，對細(xì)胞和體液免疫都有促進(jìn)作用，而且免疫細(xì)胞也能產(chǎn)生PRL樣物質(zhì)，發(fā)揮自分泌和旁分泌作用。大量研究表明在SLE中PRL與可的松CS比值增高反與病情進(jìn)展相關(guān)。男性患者PRL水平升高而雄激素功能低下，認(rèn)為PRL可抑制睪酮的生成，在病因中起作用。但也有人認(rèn)為不是通過其抑制雄激素而起作用。另外

14、用bromocriptine BRC溴隱停使PRL降低可使SLE病情改善。在RA已證明PRL是AA（adjuvant arthritis）形成的必要條件。國外報道在RA中PRL水平上升發(fā)生率為10.8%。,3,2,13,,SS，PA，Reiter等風(fēng)濕病都有PRL水平升高。目前認(rèn)為1.可能與可誘導(dǎo)核細(xì)胞產(chǎn)生IgM，IgA，IgG，ds-DNA和ANA及IgM類RF，ANA滴度增加并且PRL水平與ANA相平行。IgG類ds-DNA與抗甲

15、狀腺微粒體抗體TMA合成增加，同時伴ESR增快，淋巴細(xì)胞減少。2.PRL基因在第6號染色體短臂上，與HLA基因復(fù)合體非常近。生殖危險因子與RA病因相互作用可能是其原因。SLE女性患者HLA-DRB10301和PRL基因之間的連鎖不平衡也是原因之一。3.降低甾類物產(chǎn)生的允許作用。PRL水平升高在甾類激素分泌減少的情況下起重要作用。一方面糖皮質(zhì)激素能拮抗PRL的刺激作用，而性激素對免疫的調(diào)節(jié)作用隨性別而異。另一方面PRL可影響甾類激素的產(chǎn)生

16、，也可拮抗糖皮質(zhì)激素的抑制作用。,3,2,14,,4.PRL與細(xì)胞因子 PRL和IL-2在免疫方面起協(xié)同作用，從而促進(jìn)AID的發(fā)生。同時PRL也可促進(jìn)滑膜纖維母細(xì)胞的增殖，并促進(jìn)IL-6，IL-8的生成。而雌激素和雌激素受體在免疫調(diào)節(jié)和對許多風(fēng)濕病發(fā)病機(jī)制，自身抗體的產(chǎn)生，及對其病理進(jìn)程的影響巨大。早已為眾人所熟悉。,3,2,15,滑液正常值,PH 7.3-7.43

17、 7.38WBC(/L) (13~180) 63 N 0-15 7 L 0-78 24 單核細(xì)胞 0-71 48 滑膜細(xì)胞

18、 0-12 4蛋白質(zhì)(g/L) 12-30 18 P(%) 56-63 60 A(%) 37-44 40透明質(zhì)酸鹽(g/L)

19、 3,3,2,16,滑液分析,外觀 WBC PC 粘蛋白 滑液與血清 微生物 試驗(yàn) Glu差異(ml/ml) 晶體等正常 清晰，灰黃 0~200

20、 <10% 良好 無差異 _I類(非炎性積液)清晰，稍濁 50~4000 <30% 良好 無差異 _II類(非感染

21、 偶有LE細(xì)胞輕度炎性) 清晰，稍濁 0~9000 <20% 良好 無差異 補(bǔ)體減少III類(非感染 重度炎性) 混濁 100~160,000 70% 不 良 10 ~30 補(bǔ)體減少晶體等IV類(感染 炎性) 感染

22、 高度混濁 150~250,000 90% 不 良 90 細(xì)菌培養(yǎng)陽性結(jié)核 混濁 2500~100,000 60% 不良 70 結(jié)核培養(yǎng)陽性,3,2,17,滑液表現(xiàn),I II III

23、 IVOA RA 細(xì)菌性 創(chuàng)傷肢端肥大癥 AS 結(jié)核性 骨折骨壞死 PA 淋球菌 血友病Paget病 SS

24、 神經(jīng)病性患節(jié)炎SLE PM/DMNPA BDSSC WGWilson RF淀粉樣變 REA結(jié)節(jié)性紅斑 IBD軟骨病

25、 白血病激素治療 一部分細(xì)菌性,3,2,18,分子生物技術(shù),1.目的DNA的來源 從組織或細(xì)胞中提取. 通過載體獲得DNA片段. 以為mRNA模板利用逆轉(zhuǎn)錄酶合成互補(bǔ)DNA(cDNA). DNA合成:通過ligation,PCR,probe來完成.2.重組DNA技術(shù):分子構(gòu)建,細(xì)胞轉(zhuǎn)移,宿主細(xì)胞鑒定.3.核酸測定和應(yīng)用DNA/RNA印跡,PCR,原位/斑點(diǎn)雜

26、交.DNA序列測定.,3,2,19,ANAs,ANA是指抗細(xì)胞內(nèi)DNA,RNA,AHA,no-AHA,phospholipid……蛋白質(zhì)分子及其復(fù)合物成分的抗體.Miescher于1957年發(fā)現(xiàn)。1957年Ceppelini發(fā)現(xiàn)DNA :ssDNA,dsDNA.AHA:H1,H2A,H2B,H3,H4.ENA:Sm,Nrnp,rRNP,SSA/SSB,ScL-70,Jo-1,PM-1,PCNA,RA33,centromere….

27、.,3,2,20,DNA研究,DNA大分子可以存在于循環(huán)中或黏附于多種器官的微血管結(jié)構(gòu)，這些循環(huán)或器官原位抗原型DNA均可以與循環(huán)抗dsDNA自體抗體發(fā)生反應(yīng)，形成抗原抗體免疫復(fù)合物，激活炎癥系統(tǒng)，如補(bǔ)體途徑。在器官引起 免疫復(fù)合物介導(dǎo)的疾病，引起關(guān)節(jié)炎，血管炎，腎炎等臨床表現(xiàn)。dsDNA抗體水平于疾病活動性，特別與LN有密切關(guān)系。也可作為臨床復(fù)發(fā)的指標(biāo)。 SLE中的抗DNA抗體是異基因的。血清的抗體和單克隆抗DNA抗體可識別

28、不同分子的核酸表位，如磷脂，蛋白，多糖和細(xì)胞結(jié)構(gòu)。這說明DNA本身不可能做為免疫原來誘導(dǎo)DNA抗體產(chǎn)生。同時這種抗體的多反應(yīng)性可能與個體Ig的不同區(qū)域的多結(jié)合位點(diǎn)或不同抗原的相同表位有關(guān)。,3,2,21,,抗DNA抗體的產(chǎn)生與NO有關(guān)，活性氧可在細(xì)胞分裂中期導(dǎo)致淋巴細(xì)胞染色體損害和斷裂，使淋巴細(xì)胞功能失?；虻蛲觯尫糯罅亢丝乖a(chǎn)生自身抗體。 NO在SLE中參與產(chǎn)生自身抗體，NO抑制粒細(xì)胞活性，誘導(dǎo)其凋亡，抑制吞噬細(xì)胞釋放促炎介質(zhì)，抑制T

29、細(xì)胞增殖和IL-2釋放，阻止T輔助細(xì)胞分化Th1細(xì)胞，導(dǎo)致細(xì)胞免疫功能低下，大量自身抗體產(chǎn)生。在凋亡期間完整的核抗原的大量釋放可以提供細(xì)胞外足夠的核抗原來促進(jìn)免疫反應(yīng)，誘導(dǎo)抗體的產(chǎn)生。,3,2,22,DNA免疫,哺乳動物具有免疫學(xué)特性溫和，結(jié)構(gòu)簡單的特點(diǎn)，單純的DNA分子不能有效誘導(dǎo)免疫反應(yīng)，抗哺乳動物的DNA抗體產(chǎn)生與抗原的交叉反應(yīng)或多克隆B細(xì)胞的活化有關(guān)。而細(xì)菌DNA由于免疫原性強(qiáng)，結(jié)構(gòu)復(fù)雜，能有效地誘導(dǎo)機(jī)體對宿主自體細(xì)胞以外的DN

30、A序列區(qū)域直接產(chǎn)生免疫應(yīng)答。SLE病人抗DNA抗體主要是Ig1和Ig3而且需要T細(xì)胞參與，且與所有DNA的保守序列結(jié)合。這與健康人的抗DNA抗體（Ig2）不同.通過基因重組技術(shù)，將編碼有特定蛋白抗原的裸露的質(zhì)粒DNA注入體內(nèi)，表達(dá)出抗原蛋白，誘導(dǎo)其抗體的表達(dá)及T細(xì)胞依賴的細(xì)胞裂解等一系列特異性免疫應(yīng)答。DNA免疫不僅可以誘導(dǎo)體液免疫還可誘生特異性的以CTL為代表的細(xì)胞免疫應(yīng)答。,3,2,23,OTHER ANTIBODY,RA

31、: Sa99%, AKA（抗角質(zhì)蛋白抗體）95%-100%, APF（抗核周因子）40%-50%, AFA（抗聚角蛋白微絲蛋白抗體）為的共同抗原決定族。 RF(IgG,IgM,IgA)80%, RA3389.8%. CCP（抗環(huán)瓜氨酸肽抗體）46.6%（96.6%），其中IgG型為53%，IgM型為58%。A-p68A（為糖蛋白成分GRP，也稱免疫球蛋白結(jié)合蛋白Bip binding

32、 protein；實(shí)際上是一種內(nèi)質(zhì)網(wǎng)分子伴侶。）67.8%;91.3。常見于RF陰性患者并出現(xiàn)于RA早期。SLE: ds-DNA40-90%, AHA3080% , Sm35% , Nrnp20-35% , SSA25-40%, SSB10-15%, hsp40-50%, APL20-50%.anti-neuronal antibodies，anti-N（ 血清中62.0%

33、。腦脊液中47.4%）,3,2,24,,抗細(xì)胞膜DNA自身抗體（autoantibidies to membrane associated DNA，抗 mDNA。）90.0%（98.8%）；AuA（以Ds-DNA和AHA為靶抗原）；抗端?？贵w（抗原為真核細(xì)胞末端DNA中高度重復(fù)的TTAGGG/CCCTAA序列）60%（91%）。C1qAb（42. 86%；有腎損害為8 8. 33%）。CRPAb與SLE的SLEDAI﹑總IgG/

34、dsDNA滴度呈正相關(guān)。PM/DM: Jo-1 18-20%, pl-7<3,SRP4%, Mi-28%, 56000 85-90%.,3,2,25,,SSc:Scl-70 5707%, ACA19.4%. ，抗RNA聚合酶RNAPs I II III，AECA（抗內(nèi)皮細(xì)胞抗體）IgG型為40%，抗原纖維抗體是重癥的一個指標(biāo)，抗丙酮酸脫氫酶的Ela亞單位的抗體是發(fā)生膽汁性肝硬化的血清指標(biāo)

35、。PM-Scl。SS: SSA45-68%, SSB20-33.6%, 抗甲狀腺細(xì)胞抗體50%, 抗唾腺管細(xì)胞抗體10-70%, 抗胰管細(xì)胞抗體6-33%, 抗胃黏膜細(xì)胞抗體5-15%,抗線粒體抗體20%.,3,2,26,,MCTD: ANA100%, nRNP100%.RF: PCA87%, IgM/IgG抗多糖抗體87%. ANCAA

36、NCA(anti neutrophil cytoplasmic antibodies) 是1982年由Davies等人發(fā)現(xiàn)的。是針對中性粒細(xì)胞主要顆粒成分及單核細(xì)胞溶酶體的其主要抗原成分有蛋白酶3（PR3），髓過氧化物酶（MPO）組蛋白酶(CG)，乳鐵蛋白(LF)，殺菌/通透性增加蛋白(BIP)，人白細(xì)胞彈力蛋白酶(HLE)，溶酶體膜糖蛋白等。,3,2,27,,其檢查方法用間接免疫熒光(IIF)和抗原特異性酶聯(lián)免疫吸附(ELISA)

37、。分為C-ANC（Atypical）即彌漫的胞漿熒光無中心小葉間增強(qiáng)現(xiàn)象， C-ANCA典型的顆粒狀胞漿熒光伴中心小葉間增強(qiáng)現(xiàn)象,P-ANCA核周熒光伴和不伴核延伸，包括粒細(xì)胞特異性抗核抗體(GSANA)； AtypicalANCA其他形式的免疫熒光模式。ANA，ACA等抗體常常產(chǎn)生P-ANCA樣的免疫熒光模式。,3,2,28,,ANCA的致病機(jī)制：1.直接激活中性粒細(xì)胞2.激活單核細(xì)胞3.直接損傷內(nèi)皮細(xì)胞4.激活T淋巴細(xì)胞

38、5.a-AT（a-胰蛋白酶）是PR3蛋白酶的抑制劑，AT基因在小血管炎中成多態(tài)性。Vasculitides: ANCAChurg-Strauss 64-75%Microscopic polyangiitis 75%WG 90-97%GCA (APL)

39、 >30%Takayasu artertis (抗主動脈抗體)>1:32BD APL ANCA+,3,2,29,血管炎的抗體,1 ANCA：2 AECA（anti-endothelial cell antibodies，AECA）: BD 40%; TA37%;MPA36%;PA44%;C-S33%;GCA50%;OTHER62%