常見風濕病實驗檢查

1、3,2,1,常見風濕病實驗檢查,風濕病病因?qū)W檢查.RA HLA-DRB10405 0409風險高達58.2%.SLE HLA-DQB1(nRNP), DQa(SSA/SSB), DQW6(Sm) DQB1(TCR).AS HLA-B27.,3,2,2,,BS H

2、LA-B51.PM\DM HLA-B8,DR3,DR1. HLA-DRB1 ，ancestral haplotype祖單倍體 8.1。TNF-?-308ASSC HLA-DR1,DR5,DRQI；P1A2/FN等位基因與肺纖維化，Scl-70的陽性呈正相關(guān)。SS HLA-DR3. DRBI0602，03（與腎小管酸中毒及SSB密切相關(guān)，DQAI0504，DQBI0202。RF

3、 HLA-DR4.OA HLA-A1,B8.,3,2,3,HLA研究進展,HLA抗原基因的多態(tài)性，決定了其所表達的HLA抗原分子的多態(tài)性， 也決定了HLA系統(tǒng)免疫應(yīng)答的多樣性與復雜性。近年來HLA 基因分型迅猛發(fā)展，使得HLA 基因分型更加準確，簡便和實用。 HLA 基因分型目前大致分為： 限制性片段長度多態(tài)性方法PCR- RFLP (restriction fragment

4、 length polymophism)。PCR- SSOP 是以核酸雜交為基礎(chǔ)的分型技術(shù)。 PCR擴增特定的基因片段，與(sequence specific oligonucleotide probes)序列特異性寡核苷酸探針雜交，進行分析鑒定。 基因芯片或微陣列技術(shù) (gene chip or DNA microarray)：,3,2,4,,該技術(shù)其原理類似于反向斑點雜交。它是指大規(guī)模集成電路控制的機器人在

5、尼龍膜或硅片等固相支持物的表面有規(guī)律地合成代表不同基因的寡核苷酸探針，或液相合成探針后，通過點樣儀點樣于固相支持物的表面。這些探針與放射性標記物或熒光素標記的樣品的DNA或 cDNA互補核酸序列相結(jié)合，通過放射自顯影或熒光檢測，對雜交結(jié)果進行計算機軟件處理分析，獲得雜交信號的強度及分布模式圖，反映樣品中基因表達的情況。 PCR-SSCP(single-strand conformation polymorphism)可

6、檢測DNA 片段中不同位置的點突變，而不必象PCR- RFLP 那樣，必須選擇合適的限制酶，使其識別的位點正好位于等位基因的特異性核苷酸序列處。,3,2,5,,PCR- SSP(SEQUENCE SPECIFIC PRIMES)是近年唯一針對急診和尸體器官移植而設(shè)計的。其原理是通過序列特異性引物SSP ，特異的擴增目的DNA 片段，再通過凝膠電泳等手段，判斷被擴增序列的存在。作為第3代遺傳標記SNP單核苷酸多態(tài)位點(single

7、 nucleotide polymorphism)。已有MHC-SNP分型試劑盒面市。分子的超型及抗原結(jié)合肽超基序的發(fā)現(xiàn)，表明可從功能上對類分子進行分類使得該技術(shù)更為合理，簡明和實用，對于疾病相關(guān)性的研究和異體移植有重大意義。,3,2,6,AS的相關(guān)遺傳因素,1：HLA是一必需的致病基因，但其遺傳風險為16~50%。其亞型有23個之多，從B2701~2723。與AS相關(guān)的是2705﹑2704﹑2701等等。2：CYP2D6﹑LM

8、P7和TNF308等TNF-?的等位基因；bosak報道HLA-2﹑Bw4﹑Cw1/2﹑DR1基因頻率均高于健康人群。這提示HLA-A﹑B﹑C﹑DR和DQ區(qū)域有與AS發(fā)病的易感基因存在；HLA-B60增加了AS依賴HLA-B27發(fā)病的易感性。,3,2,7,,鏈球菌感染的檢測 1 咽拭子培養(yǎng) 20~25%SZ(鏈球菌酶)檢 2ASO>500

9、 50% 3DNA酶-B>210 85% 4ASK(抗鏈球菌激酶)>8 5AH(抗透明質(zhì)酸酶)>128 6ANDS(抗核苷酸)<275抗EBV抗體 RAPHS-2(福氏志賀菌)

10、Reiter's肺炎克雷伯菌 AS 沙門菌,螺桿菌 ReA,3,2,8,炎性實驗室指標,主要針對疾病活動性ESR:CRP:2周內(nèi)>80%, 大于4周<25%OTHER:1.白細胞及中性粒細胞. 2.糖蛋白及粘蛋白等.,,3,2,9,CRP,,,IL-1IL-6TNFa,?TGPF4,白細胞粘著游走,CRP,凝血纖溶系統(tǒng)亢進,ICAM-1VCAM-1

11、E-SELECTIN,血小板凝集亢進,血小板釋放反應(yīng),,,,,,,,,感染外傷免疫異常惡性增生物,3,2,10,CRP與炎癥,CRP是重要的炎性因子,其致炎作用包括:激活補體、刺激細胞因子分泌、上調(diào)內(nèi)皮細胞黏附分子表達、抑制一氧化氮合成、增加纖溶酶原激活物抑制劑-1的水平與活性、增強巨噬細胞對低密度脂蛋白的攝取及單核細胞化學趨化性、上調(diào)血管緊張素Ⅱ-1型受體的表達等.CRP與肥胖關(guān)系密切,而且脂肪細胞也可分泌CRP.CR

12、P水平隨年齡的增高而升高,女性較高,吸煙、感染和某些藥物可使其增高;而飲酒和某些藥物可使其降低.,3,2,11,生化檢查,1.Ca, P,Fe等電解質(zhì).2.UA,磷酸鈣雙水化合物CPP等. 3.肝, 腎,血常規(guī)等功能檢查.4.CPK,LDH同功酶，肌球蛋白，肌凝蛋白重鏈，肌鈣蛋白I（TnI），等肌酶譜檢查.5.蛋白及蛋白電泳檢查.6.雌激素,泌乳素等激素檢查.7.維生素,骨鈣素,TRAP,Pyd,Dpyd等.,3,2,12

13、,雌激素和催乳素PRL,大家都知道神經(jīng)-內(nèi)分泌-免疫調(diào)節(jié)網(wǎng)絡(luò)功能失調(diào)，會影響的發(fā)生和發(fā)展。 PRL（prolatin）已被證明具有免疫調(diào)節(jié)作用，對細胞和體液免疫都有促進作用，而且免疫細胞也能產(chǎn)生PRL樣物質(zhì)，發(fā)揮自分泌和旁分泌作用。大量研究表明在SLE中PRL與可的松CS比值增高反與病情進展相關(guān)。男性患者PRL水平升高而雄激素功能低下，認為PRL可抑制睪酮的生成，在病因中起作用。但也有人認為不是通過其抑制雄激素而起作用。另外

14、用bromocriptine BRC溴隱停使PRL降低可使SLE病情改善。在RA已證明PRL是AA（adjuvant arthritis）形成的必要條件。國外報道在RA中PRL水平上升發(fā)生率為10.8%。,3,2,13,,SS，PA，Reiter等風濕病都有PRL水平升高。目前認為1.可能與可誘導核細胞產(chǎn)生IgM，IgA，IgG，ds-DNA和ANA及IgM類RF，ANA滴度增加并且PRL水平與ANA相平行。IgG類ds-DNA與抗甲

15、狀腺微粒體抗體TMA合成增加，同時伴ESR增快，淋巴細胞減少。2.PRL基因在第6號染色體短臂上，與HLA基因復合體非常近。生殖危險因子與RA病因相互作用可能是其原因。SLE女性患者HLA-DRB10301和PRL基因之間的連鎖不平衡也是原因之一。3.降低甾類物產(chǎn)生的允許作用。PRL水平升高在甾類激素分泌減少的情況下起重要作用。一方面糖皮質(zhì)激素能拮抗PRL的刺激作用，而性激素對免疫的調(diào)節(jié)作用隨性別而異。另一方面PRL可影響甾類激素的產(chǎn)生

16、，也可拮抗糖皮質(zhì)激素的抑制作用。,3,2,14,,4.PRL與細胞因子 PRL和IL-2在免疫方面起協(xié)同作用，從而促進AID的發(fā)生。同時PRL也可促進滑膜纖維母細胞的增殖，并促進IL-6，IL-8的生成。而雌激素和雌激素受體在免疫調(diào)節(jié)和對許多風濕病發(fā)病機制，自身抗體的產(chǎn)生，及對其病理進程的影響巨大。早已為眾人所熟悉。,3,2,15,滑液正常值,PH 7.3-7.43

17、 7.38WBC(/L) (13~180) 63 N 0-15 7 L 0-78 24 單核細胞 0-71 48 滑膜細胞

18、 0-12 4蛋白質(zhì)(g/L) 12-30 18 P(%) 56-63 60 A(%) 37-44 40透明質(zhì)酸鹽(g/L)

19、 3,3,2,16,滑液分析,外觀 WBC PC 粘蛋白 滑液與血清 微生物 試驗 Glu差異(ml/ml) 晶體等正常 清晰，灰黃 0~200

20、 <10% 良好 無差異 _I類(非炎性積液)清晰，稍濁 50~4000 <30% 良好 無差異 _II類(非感染

21、 偶有LE細胞輕度炎性) 清晰，稍濁 0~9000 <20% 良好 無差異 補體減少III類(非感染 重度炎性) 混濁 100~160,000 70% 不 良 10 ~30 補體減少晶體等IV類(感染 炎性) 感染

22、 高度混濁 150~250,000 90% 不 良 90 細菌培養(yǎng)陽性結(jié)核 混濁 2500~100,000 60% 不良 70 結(jié)核培養(yǎng)陽性,3,2,17,滑液表現(xiàn),I II III

23、 IVOA RA 細菌性 創(chuàng)傷肢端肥大癥 AS 結(jié)核性 骨折骨壞死 PA 淋球菌 血友病Paget病 SS

24、 神經(jīng)病性患節(jié)炎SLE PM/DMNPA BDSSC WGWilson RF淀粉樣變 REA結(jié)節(jié)性紅斑 IBD軟骨病

25、 白血病激素治療 一部分細菌性,3,2,18,分子生物技術(shù),1.目的DNA的來源 從組織或細胞中提取. 通過載體獲得DNA片段. 以為mRNA模板利用逆轉(zhuǎn)錄酶合成互補DNA(cDNA). DNA合成:通過ligation,PCR,probe來完成.2.重組DNA技術(shù):分子構(gòu)建,細胞轉(zhuǎn)移,宿主細胞鑒定.3.核酸測定和應(yīng)用DNA/RNA印跡,PCR,原位/斑點雜

26、交.DNA序列測定.,3,2,19,ANAs,ANA是指抗細胞內(nèi)DNA,RNA,AHA,no-AHA,phospholipid……蛋白質(zhì)分子及其復合物成分的抗體.Miescher于1957年發(fā)現(xiàn)。1957年Ceppelini發(fā)現(xiàn)DNA :ssDNA,dsDNA.AHA:H1,H2A,H2B,H3,H4.ENA:Sm,Nrnp,rRNP,SSA/SSB,ScL-70,Jo-1,PM-1,PCNA,RA33,centromere….

27、.,3,2,20,DNA研究,DNA大分子可以存在于循環(huán)中或黏附于多種器官的微血管結(jié)構(gòu)，這些循環(huán)或器官原位抗原型DNA均可以與循環(huán)抗dsDNA自體抗體發(fā)生反應(yīng)，形成抗原抗體免疫復合物，激活炎癥系統(tǒng)，如補體途徑。在器官引起 免疫復合物介導的疾病，引起關(guān)節(jié)炎，血管炎，腎炎等臨床表現(xiàn)。dsDNA抗體水平于疾病活動性，特別與LN有密切關(guān)系。也可作為臨床復發(fā)的指標。 SLE中的抗DNA抗體是異基因的。血清的抗體和單克隆抗DNA抗體可識別

28、不同分子的核酸表位，如磷脂，蛋白，多糖和細胞結(jié)構(gòu)。這說明DNA本身不可能做為免疫原來誘導DNA抗體產(chǎn)生。同時這種抗體的多反應(yīng)性可能與個體Ig的不同區(qū)域的多結(jié)合位點或不同抗原的相同表位有關(guān)。,3,2,21,,抗DNA抗體的產(chǎn)生與NO有關(guān)，活性氧可在細胞分裂中期導致淋巴細胞染色體損害和斷裂，使淋巴細胞功能失?；虻蛲?，釋放大量核抗原產(chǎn)生自身抗體。 NO在SLE中參與產(chǎn)生自身抗體，NO抑制粒細胞活性，誘導其凋亡，抑制吞噬細胞釋放促炎介質(zhì)，抑制T

29、細胞增殖和IL-2釋放，阻止T輔助細胞分化Th1細胞，導致細胞免疫功能低下，大量自身抗體產(chǎn)生。在凋亡期間完整的核抗原的大量釋放可以提供細胞外足夠的核抗原來促進免疫反應(yīng)，誘導抗體的產(chǎn)生。,3,2,22,DNA免疫,哺乳動物具有免疫學特性溫和，結(jié)構(gòu)簡單的特點，單純的DNA分子不能有效誘導免疫反應(yīng)，抗哺乳動物的DNA抗體產(chǎn)生與抗原的交叉反應(yīng)或多克隆B細胞的活化有關(guān)。而細菌DNA由于免疫原性強，結(jié)構(gòu)復雜，能有效地誘導機體對宿主自體細胞以外的DN

30、A序列區(qū)域直接產(chǎn)生免疫應(yīng)答。SLE病人抗DNA抗體主要是Ig1和Ig3而且需要T細胞參與，且與所有DNA的保守序列結(jié)合。這與健康人的抗DNA抗體（Ig2）不同.通過基因重組技術(shù)，將編碼有特定蛋白抗原的裸露的質(zhì)粒DNA注入體內(nèi)，表達出抗原蛋白，誘導其抗體的表達及T細胞依賴的細胞裂解等一系列特異性免疫應(yīng)答。DNA免疫不僅可以誘導體液免疫還可誘生特異性的以CTL為代表的細胞免疫應(yīng)答。,3,2,23,OTHER ANTIBODY,RA

31、: Sa99%, AKA（抗角質(zhì)蛋白抗體）95%-100%, APF（抗核周因子）40%-50%, AFA（抗聚角蛋白微絲蛋白抗體）為的共同抗原決定族。 RF(IgG,IgM,IgA)80%, RA3389.8%. CCP（抗環(huán)瓜氨酸肽抗體）46.6%（96.6%），其中IgG型為53%，IgM型為58%。A-p68A（為糖蛋白成分GRP，也稱免疫球蛋白結(jié)合蛋白Bip binding

32、 protein；實際上是一種內(nèi)質(zhì)網(wǎng)分子伴侶。）67.8%;91.3。常見于RF陰性患者并出現(xiàn)于RA早期。SLE: ds-DNA40-90%, AHA3080% , Sm35% , Nrnp20-35% , SSA25-40%, SSB10-15%, hsp40-50%, APL20-50%.anti-neuronal antibodies，anti-N（ 血清中62.0%

33、。腦脊液中47.4%）,3,2,24,,抗細胞膜DNA自身抗體（autoantibidies to membrane associated DNA，抗 mDNA。）90.0%（98.8%）；AuA（以Ds-DNA和AHA為靶抗原）；抗端?？贵w（抗原為真核細胞末端DNA中高度重復的TTAGGG/CCCTAA序列）60%（91%）。C1qAb（42. 86%；有腎損害為8 8. 33%）。CRPAb與SLE的SLEDAI﹑總IgG/

34、dsDNA滴度呈正相關(guān)。PM/DM: Jo-1 18-20%, pl-7<3,SRP4%, Mi-28%, 56000 85-90%.,3,2,25,,SSc:Scl-70 5707%, ACA19.4%. ，抗RNA聚合酶RNAPs I II III，AECA（抗內(nèi)皮細胞抗體）IgG型為40%，抗原纖維抗體是重癥的一個指標，抗丙酮酸脫氫酶的Ela亞單位的抗體是發(fā)生膽汁性肝硬化的血清指標

35、。PM-Scl。SS: SSA45-68%, SSB20-33.6%, 抗甲狀腺細胞抗體50%, 抗唾腺管細胞抗體10-70%, 抗胰管細胞抗體6-33%, 抗胃黏膜細胞抗體5-15%,抗線粒體抗體20%.,3,2,26,,MCTD: ANA100%, nRNP100%.RF: PCA87%, IgM/IgG抗多糖抗體87%. ANCAA

36、NCA(anti neutrophil cytoplasmic antibodies) 是1982年由Davies等人發(fā)現(xiàn)的。是針對中性粒細胞主要顆粒成分及單核細胞溶酶體的其主要抗原成分有蛋白酶3（PR3），髓過氧化物酶（MPO）組蛋白酶(CG)，乳鐵蛋白(LF)，殺菌/通透性增加蛋白(BIP)，人白細胞彈力蛋白酶(HLE)，溶酶體膜糖蛋白等。,3,2,27,,其檢查方法用間接免疫熒光(IIF)和抗原特異性酶聯(lián)免疫吸附(ELISA)

37、。分為C-ANC（Atypical）即彌漫的胞漿熒光無中心小葉間增強現(xiàn)象， C-ANCA典型的顆粒狀胞漿熒光伴中心小葉間增強現(xiàn)象,P-ANCA核周熒光伴和不伴核延伸，包括粒細胞特異性抗核抗體(GSANA)； AtypicalANCA其他形式的免疫熒光模式。ANA，ACA等抗體常常產(chǎn)生P-ANCA樣的免疫熒光模式。,3,2,28,,ANCA的致病機制：1.直接激活中性粒細胞2.激活單核細胞3.直接損傷內(nèi)皮細胞4.激活T淋巴細胞

38、5.a-AT（a-胰蛋白酶）是PR3蛋白酶的抑制劑，AT基因在小血管炎中成多態(tài)性。Vasculitides: ANCAChurg-Strauss 64-75%Microscopic polyangiitis 75%WG 90-97%GCA (APL)

39、 >30%Takayasu artertis (抗主動脈抗體)>1:32BD APL ANCA+,3,2,29,血管炎的抗體,1 ANCA：2 AECA（anti-endothelial cell antibodies，AECA）: BD 40%; TA37%;MPA36%;PA44%;C-S33%;GCA50%;OTHER62%