抗體的選擇和保存指南

1、抗體選擇指南抗體選擇指南抗體保存指南抗體保存指南抗體說(shuō)明書(shū)樣本抗體說(shuō)明書(shū)樣本一抗體選擇指南抗體選擇指南:檢測(cè)任何目的靶蛋白都有不止一種抗體可供選擇，為縮小抗體的選擇范圍選中合適的抗體，需要考慮如下幾種因素：1.分析或應(yīng)用的類(lèi)型2.樣本蛋白的結(jié)構(gòu)性質(zhì)3.樣本的種屬4.抗體宿主的種類(lèi)5.抗體的標(biāo)記和檢測(cè)1分析試驗(yàn)的應(yīng)用類(lèi)型分析試驗(yàn)的應(yīng)用類(lèi)型一般抗體說(shuō)明書(shū)都列出該抗體經(jīng)試驗(yàn)驗(yàn)證過(guò)適用于何種分析類(lèi)型，如：可以應(yīng)用于WBIHCICCELASA分析

2、等，如果抗體說(shuō)明書(shū)沒(méi)有提及的應(yīng)用類(lèi)型，并不意味著該抗體不適用于此種分析應(yīng)用類(lèi)型，而僅是說(shuō)明尚未經(jīng)過(guò)此種分析試驗(yàn)驗(yàn)證，如果抗體不適用某些分析試驗(yàn)，則會(huì)在抗體說(shuō)明書(shū)上標(biāo)注出來(lái)不適于某分析試驗(yàn)。2樣本蛋白的結(jié)構(gòu)性質(zhì)樣本蛋白的結(jié)構(gòu)性質(zhì)了解樣本蛋白的結(jié)構(gòu)性質(zhì)有助于選擇最合適的抗體，至少兩方面因素需要考慮(1)..待測(cè)樣本蛋白的結(jié)構(gòu)域：抗體是由各種不同免疫原免疫宿主而制備得來(lái)，其中的免疫原包括：全長(zhǎng)蛋白、蛋白片斷、多肽、全有機(jī)體（如：細(xì)菌）或細(xì)胞，

3、抗體說(shuō)明書(shū)一般都有免疫原的描述，如果打算檢測(cè)的是蛋白片斷或一種特殊的同型物或蛋白全長(zhǎng)的某一區(qū)域，則必須選擇用含此片段域的免疫原制備出的抗體。如果打算用FACS流式檢測(cè)活細(xì)胞的表面蛋白，則需要選擇含該表面蛋白的胞外域來(lái)免疫制備的抗體。(2)樣本的提取或處理過(guò)程：某些抗體要求樣本經(jīng)過(guò)某些特殊處理，例如：許多抗體只識(shí)別還原和變性的、表位已暴露不受二級(jí)四級(jí)結(jié)構(gòu)阻礙的蛋白樣本，另一方面，某些抗體僅識(shí)別天然折疊狀態(tài)的蛋白。當(dāng)選擇免疫組化的抗體時(shí)，應(yīng)

4、注意某些抗體只識(shí)別未固定的冷凍的組織，而另一些抗體則適用于無(wú)需抗原修復(fù)解交聯(lián)步聚的甲醛固定石蠟包埋的組織，這些都會(huì)在抗體說(shuō)明書(shū)上應(yīng)用部分標(biāo)示出來(lái)3樣本的物種樣本的物種應(yīng)選擇物種相同或有交叉反應(yīng)的抗體，抗體可能與不同物種的同種靶蛋白有交叉反應(yīng)，因其氨基酸序列同源性較高，如果樣本的種類(lèi)未列入抗體說(shuō)明書(shū)上的交叉反應(yīng)種屬表中，并不意味著該抗體不適用于檢測(cè)該物種的蛋白，而只是表示該物種尚未用此抗體檢測(cè)驗(yàn)證過(guò)，應(yīng)通過(guò)序列比對(duì)的方法來(lái)預(yù)測(cè)交叉反應(yīng)，可

5、應(yīng)用Expasy和NCBIBLAST來(lái)進(jìn)行不同物種蛋白同源性比對(duì)。4一抗宿主物種的選擇一抗宿主物種的選擇一般說(shuō)來(lái)，在使用偶聯(lián)二抗結(jié)合無(wú)偶聯(lián)物的一抗時(shí)，一抗宿主動(dòng)物的物種選擇較為重要，對(duì)于免疫組化而言，盡可能選擇與樣本不同種系物種的一抗，從而避免二抗與樣本內(nèi)源性免疫球蛋白產(chǎn)生交叉反應(yīng)，例如：檢測(cè)小鼠樣本蛋白，則不應(yīng)選擇小鼠或大鼠源的一抗，最好選兔源的一抗，則二抗則可選擇偶聯(lián)了檢測(cè)分子（酶、熒光素、生物素等）的抗兔IgG。如果選擇有偶聯(lián)物的

6、一抗則不適用上述情況，除免疫組化外的其它對(duì)不含內(nèi)源性免疫球蛋白樣本的檢測(cè)方法，則抗體宿主物種的影響不大，如對(duì)不含IgG的細(xì)胞裂解物樣本的westernblotting檢測(cè)，盡管如此，含有血清的組織裂解物和組織培生物素化的抗體通常用于加強(qiáng)親和素生物素酶或熒光素復(fù)合物（ABC試劑或親和素或鏈霉親和素連接酶或熒光素的信號(hào)）抗體保存指南抗體保存指南抗體保存得當(dāng)與否，直接決定了抗體的活性和使用效果！如果抗體保存得當(dāng)，大部分抗體活性都可以維持?jǐn)?shù)月甚

7、至數(shù)年。本指南以abcam抗體保存方法為主，同樣也可以應(yīng)用到其他絕大部分公司的抗體產(chǎn)品！請(qǐng)謹(jǐn)記！無(wú)論何時(shí)請(qǐng)按照說(shuō)明書(shū)推薦的保存條件正確保存抗體！請(qǐng)按照說(shuō)明書(shū)推薦的保存條件正確保存抗體！1.收到抗體后請(qǐng)務(wù)必在請(qǐng)務(wù)必在12000rpm離心離心2030s后再打開(kāi)管蓋進(jìn)行分裝和保存！質(zhì)優(yōu)的抗體使用非常特殊的儲(chǔ)存管，只有在12000rpm離心2030s才能將附著在管壁或蓋內(nèi)的抗體全部離心下來(lái)。即使是在10000rpm離心也會(huì)導(dǎo)致離心不完全，導(dǎo)致出

8、現(xiàn)抗體的量不足的現(xiàn)象！?對(duì)于大部分抗體，比較合適的保存方式是分裝后保存在分裝后保存在20度80度對(duì)絕大多數(shù)抗體來(lái)說(shuō)，保存在20度是完全足夠了。沒(méi)有任何證據(jù)顯示保存在80度會(huì)有更多的好處，?分裝可以最大程度的降低反復(fù)凍融對(duì)抗體活性的損害，同時(shí)也降低了由于多次從同一管中吸取抗體造成的污染可能性。分裝的量以一次實(shí)驗(yàn)用完為好，最少不能少于10ul每份。因?yàn)榉盅b體積越小，抗體的濃度越可能會(huì)受到蒸發(fā)以及管壁吸附的影響復(fù)融后的分裝抗體如果一次用不完，

9、將剩余母液保存在4度，避免再凍起來(lái)！抗體工作液應(yīng)該當(dāng)天配制當(dāng)天用完，在4度盡量不要超過(guò)1天。絕對(duì)避免將抗體保存在自動(dòng)除霜冰箱中。盡量將抗體保存在冰箱里層，而不是門(mén)上3.大部分抗體收到后4度短暫保存12周對(duì)抗體活性是沒(méi)有影響的。如果抗體很快（12周）會(huì)使用，推薦在4度保存，這是為了避免反復(fù)凍融對(duì)抗體活性的損害。如果要長(zhǎng)期保存則最好是在20度80度。最關(guān)鍵的一點(diǎn)是要根據(jù)說(shuō)明書(shū)推薦的方式來(lái)正確的保存抗體！但是，腹水形式的產(chǎn)品請(qǐng)?jiān)谑盏胶罅⒓磧銎?/p>

10、來(lái)！因?yàn)樵擃?lèi)產(chǎn)品含有大量的蛋白酶，長(zhǎng)期在4度保存會(huì)導(dǎo)致抗體的降解！4.大部分抗體的運(yùn)輸條件：一般的運(yùn)輸過(guò)程需要12周的時(shí)間，所以是在4度的條件下來(lái)完成的。4度運(yùn)輸最主要的目的是為了避免反復(fù)凍融對(duì)抗體活性的損害（如果使用干冰運(yùn)輸，那么收到時(shí)抗體是凍起來(lái)的，為了分裝就需要解凍。這就多了一次凍融的過(guò)程）。所以運(yùn)輸過(guò)程中絕對(duì)避免干冰運(yùn)輸！特殊抗體的保存條件：特殊抗體的保存條件：6.酶聯(lián)抗體酶聯(lián)抗體：永遠(yuǎn)保存在4度，避免凍起來(lái)。否則會(huì)導(dǎo)致酶活性的

11、下降或者喪失7.偶聯(lián)抗體偶聯(lián)抗體：所有偶聯(lián)抗體都是在棕色管中或使用錫箔紙避光保存。尤其是熒光抗體，對(duì)光極為敏感，因此在所有的實(shí)驗(yàn)階段也是要避光操作的！8.IgG3的同型對(duì)照的同型對(duì)照：永遠(yuǎn)保存在4度，避免凍起來(lái)。因?yàn)槿绻霈F(xiàn)凍融過(guò)程，該抗體非常容易形成多聚體無(wú)論是保存還是運(yùn)輸，絕對(duì)避免反復(fù)凍融！無(wú)論是保存還是運(yùn)輸，絕對(duì)避免反復(fù)凍融！反復(fù)凍融會(huì)導(dǎo)致抗體變性，導(dǎo)致多聚體形成，從而降低抗體的結(jié)合能力！抗體保存其它相關(guān)信息：抗體保存其它相關(guān)信息