血液及其成分的保存、運(yùn)輸和領(lǐng)發(fā)

1、第四章 血液及其成分的保存、 運(yùn)輸和領(lǐng)發(fā),全血在保存時(shí)會(huì)發(fā)生什么樣的變化？全血保存主要需要解決哪些問(wèn)題？,血液在貯存中的變化,,(一) 血漿的變化,三、血液在貯存中的變化,,(一) 全血的變化,血液在貯存中的變化,,血小板,白細(xì)胞,,5天之后逐漸死亡,,24h之后功能逐漸喪失,血液在貯存中的變化,,不穩(wěn)定的凝血因子,活性逐漸下降,,血液在貯存中的變化,,紅細(xì)胞,,膜蛋白、脂質(zhì)發(fā)生變化，鉀離子降低，鈉、鈣離子升高。雙凹形

2、變成球形或桑椹形，脆性增加，易發(fā)性溶血。,三、血液在貯存中的變化,,紅細(xì)胞的變化,成熟紅細(xì)胞不僅無(wú)細(xì)胞核，而且也無(wú)線粒體、核蛋白體等細(xì)胞器，不能進(jìn)行核酸和蛋白質(zhì)的生物合成，也不能進(jìn)行有氧氧化，不能利用脂肪酸。血糖是其唯一的能源。紅細(xì)胞攜帶O2, 自身不消耗O2, 其內(nèi)電解質(zhì)以鉀最多、鈉含量較少, 與血漿的鉀鈉含量相反。紅細(xì)胞內(nèi)Ca離子濃度低于血漿。,紅細(xì)胞的特點(diǎn),,主要途徑,,,,磷酸戊糖旁路,葡萄糖酵解,,,合成ATP：合成2

3、,3-DPG（ 2,3-二磷酸甘油酸）,控制靜脈側(cè)氧氣的釋放和維持Hb二價(jià)鐵，進(jìn)行氧氣的傳遞,通過(guò)磷酸戊糖通路代謝，為紅細(xì)胞提供另一種還原力，在紅細(xì)胞氧化還原系統(tǒng)中發(fā)揮重要作用，具有保護(hù)膜蛋白、血紅蛋白及酶蛋白的琉基不被氧化，還原高鐵血紅蛋白等多種功能。,,紅細(xì)胞能量代謝,成熟紅細(xì)胞的糖酵解特點(diǎn)：,紅細(xì)胞糖酵解的特點(diǎn)是在酵解過(guò)程中有相當(dāng)數(shù)量的1.3-DPG轉(zhuǎn)變成2.3-DPG，后者再脫磷酸變成3-PG，并進(jìn)一步酵解產(chǎn)生乳酸。此2.3-D

4、PG側(cè)支循環(huán)稱(chēng)2.3-DPG支路，產(chǎn)生支路的原因是紅細(xì)胞中存在DPG變位酶和2.3-DPG磷酸酶，前者活性大于后者，故可使2.3-DPG堆積起來(lái)。2.3-DPG生成的主要生理意義在于降低Hb對(duì)氧的親和力，在組織氧分壓較低的情況下，HbO2放出氧適應(yīng)組織需要。,血紅蛋白與氧親和性增加,P50是指血紅蛋白氧飽和度為50%時(shí)的血氧分壓，可以反映Hb與O2的親和力。P50增大，氧離曲線右移，表示Hb與O2的親和力小，P50減小，氧離曲線左移，

5、說(shuō)明親和力大。,2,3-DPG的生理意義,維持Na+-K- ATP酶(鈉泵)功能。通過(guò)ATP 提供能量,維持K+ 的濃度在紅細(xì)胞內(nèi)比血漿高5倍。所以, 紅細(xì)胞產(chǎn)生的ATP主要用于維持紅細(xì)胞膜Na+-K- ATP酶酶的正常功能, 以保證紅細(xì)胞的離子平衡。 在保存過(guò)程中, 紅細(xì)胞膜和膜蛋白的損傷以及葡萄糖的持續(xù)消耗引起的ATP供能減少都會(huì)影響Na+-K- ATP酶功能的正常發(fā)揮, 導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)K+ 的逸出, 從而使血漿K+ 濃度不斷升高

6、。,紅細(xì)胞ATP的功能（紅細(xì)胞內(nèi)糖代謝的意義）,2、維持紅細(xì)胞膜上鈣泵一的正常運(yùn)轉(zhuǎn)，將紅細(xì)胞內(nèi)的Ca2+泵入血漿以維持紅細(xì)胞內(nèi)的低鈣狀態(tài)。正常情況下，紅細(xì)胞內(nèi)的Ca2+濃度很低（20umol/L)。，而血漿Ca2+的濃度為2-3mmol/L。血漿內(nèi)鈣離子會(huì)被動(dòng)擴(kuò)散進(jìn)入紅細(xì)胞。缺乏ATP時(shí)，鈣泵不能正常運(yùn)行，鈣將聚集并沉積于紅細(xì)胞膜上，使膜失去柔韌性而趨于僵硬，使紅細(xì)胞易被破壞,紅細(xì)胞ATP的功能（紅細(xì)胞內(nèi)糖代謝的意義）,維持紅細(xì)胞膜上脂

7、質(zhì)與血漿脂蛋白中的脂質(zhì)進(jìn)行交換。紅細(xì)胞膜的脂質(zhì)處于不斷更新中，此過(guò)程需消耗ATP。缺乏ATP時(shí)，脂質(zhì)更新受阻，紅細(xì)胞可塑性降低，易于破壞少量用于谷胱甘肽的生物合成。用于葡萄糖的活化，啟動(dòng)糖酵解過(guò)程。,紅細(xì)胞ATP的功能（紅細(xì)胞內(nèi)糖代謝的意義）,紅細(xì)胞內(nèi)的谷胱甘肽代謝,紅細(xì)胞內(nèi)谷胱甘肽含量很高(2mmol/L)，而且?guī)缀跞沁€原型的，主要生理功能是對(duì)抗氧化劑對(duì)巰基的氧化。,,,,對(duì)于需要短時(shí)間內(nèi)糾正載氧能力的患者和特別經(jīng)受不住組織缺氧

8、的患者輸入2,3-DPG水平低的血是無(wú)益的，應(yīng)該給這些患者輸注保存期不超過(guò)7~10天的血液。,二、血液保存需要解決的問(wèn)題,需解決的問(wèn)題,血液凝固,紅細(xì)胞溶血放氧能力下降,,,抗凝劑,,紅細(xì)胞營(yíng)養(yǎng)代謝抗溶血?jiǎng)└纳品叛醣４嫒萜?,紅細(xì)胞保存液考慮的幾個(gè)方面,保護(hù)細(xì)胞的能量產(chǎn)生機(jī)構(gòu)，使其維持正常結(jié)構(gòu)和功能盡量減慢細(xì)胞代謝速度，減少能量消耗并供應(yīng)能量物質(zhì)。其他：抗氧化劑的作用？改善保存容器？,,常用血液保存液的成分： 1、抗凝劑,,

9、血液抗凝劑是防止血液凝固和紅細(xì)胞被破壞的化學(xué)物質(zhì),常用的抗凝劑有哪些？,血液保存液的成分,(一) 血液抗凝劑,,枸櫞酸鈉,肝素,EDTA·2Na,原理,Ca,Thrombin,Ca,應(yīng)用,實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)血液標(biāo)本的抗凝及外科體外循環(huán)手術(shù)的抗凝,實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)血液標(biāo)本的抗凝,全血及血液成分保存的抗凝劑,,葡萄糖的在血液中濃度應(yīng)為0.5%~l%，以0.5%為宜,葡萄糖用于維持紅細(xì)胞代謝，延長(zhǎng)紅細(xì)胞的保存時(shí)間,血液保存液的成分：2、提供紅細(xì)

10、胞的能量代謝葡萄糖,,,腺嘌呤,提高ATP水平和活性的另一辦法就是在保存液中加入少量腺嘌呤,腺嘌呤,,,磷酸腺苷（AMP）,,磷酸化,ATP,,血液保存液的成分：2、提供紅細(xì)胞的能量代謝,血液保存液的成分：,3、抗溶血?jiǎng)?,目前國(guó)際上使用較多的是甘露醇，它的用量很小，一般在1％以下。,血液保存液的成分：,4、改善紅細(xì)胞的放氧能力,,ACD或CPD血液保存到l周和2周后，其紅細(xì)胞放氧能力均降到50%，對(duì)于即刻需要糾正缺氧的患者，輸注保

11、存時(shí)間長(zhǎng)的血液是不適宜的。,血液保存液的成分：,4、 改善紅細(xì)胞的放氧能力,,影響因素：CO2分壓、O2分壓、pH和2,3-DPG含量及其生成有關(guān)酶系有關(guān),,一、全血在(4±2)℃時(shí)的保存,4、 改善紅細(xì)胞的放氧能力,,解決的方法：1、保存液中加NaHCO3，所產(chǎn)生的C02，可由內(nèi)在的Ca(OH)2來(lái)消除，避免pH降低，有利于2,3-DPG的合成2、加磷酸二羥丙酮，可以增加2,3-DPG含量。3、加丙酮酸鹽、通過(guò)輔酶Ⅰ系

12、統(tǒng)增加1,3-二磷酸甘油酸（1, 3- DPG），然后變成2,3-DPG。4、加維生素C，增加還原力，進(jìn)而維持有關(guān)酶的活性。,全血在(4±2)℃時(shí)的保存,保存溫度,,紅細(xì)胞代謝緩慢，乳酸生成速度下降，pH下降速度也變緩慢。,維持紅細(xì)胞正常代謝，血袋要排放整齊，避免重疊堆積。,溫度對(duì)紅細(xì)胞保存的影響,6 ℃以上時(shí), 無(wú)法保證血液成分的活性和有效性。高于10 ℃紅細(xì)胞破壞增加, 10 ℃以上超過(guò)30 min游離血紅蛋白的含量逐

13、漸增加,pH下降,血鉀濃度也逐漸上升。保存溫度低于下限2℃時(shí), 紅細(xì)胞可能溶解破裂,輸給患者可能造成輸血不良反應(yīng)。儲(chǔ)存溫度≦6 ℃可最大限度地抑制血液中的細(xì)菌生長(zhǎng)。在不正確的條件下儲(chǔ)存30 min 以上的血液有發(fā)生細(xì)菌污染和( 或) 細(xì)胞功能喪失的可能,一、全血在(4±2)℃時(shí)的保存,保存容器,,聚乙烯烴袋,聚氯乙烯（PVC)袋,,全血、紅細(xì)胞等的保存,血小板的保存,,,,血液保存液,,ACD保養(yǎng)液（枸櫞酸鹽-葡萄糖-

14、枸櫞酸）pH5.03 21天,CPD保養(yǎng)液（枸櫞酸鹽-葡萄糖-枸櫞酸-磷酸鹽） pH5.63 21天,CPDA保養(yǎng)液(枸櫞酸鹽-葡萄糖-枸櫞酸-磷酸鹽-腺嘌呤)pH5.63 35天,加入磷酸鹽,加入腺嘌呤,,,二、血液保存液,,三、血液在貯存中的變化,,(二) 貯存期（shelf life）,全血，聚氯乙烯塑料袋，4℃條件下貯存：ACD或CPD保存液：貯存期為21天CPDA-1保存液：貯存期為35天,一、濃縮紅

15、細(xì)胞保存,,4℃保存保存液是全血保存液從采血日起，與相應(yīng)的保存液的儲(chǔ)存期一致,二、添加劑紅細(xì)胞保存,,濃縮紅細(xì)胞,剩余營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)少黏稠貯存中易發(fā)生溶血,二、添加劑紅細(xì)胞保存,,1、濃縮紅細(xì)胞加羥乙基淀粉（分子量3萬(wàn)）溶液在(4±2)℃貯存可保存14天。2、濃縮紅細(xì)胞加磷酸腺嘌呤及慶大霉素的新維代漿血，在(4±2)℃可保存35天。,(一) 含膠體的紅細(xì)胞懸液（膠體代漿血）,二、添加劑紅細(xì)胞保存,,(二) 晶體鹽

16、紅細(xì)胞懸液（晶體鹽代漿血）,目前還不能斷定高水平的ATP是否為氯化氨的作用, 有關(guān)理論也有待于進(jìn)一步研究。但作者深信新溶液的保存作用, 且有可能是氨的存在是基于這種溶液的非滲透性低滲的原因并得以維持ATP􀀁 的含量和延長(zhǎng)紅細(xì)胞的貯存期。,二、添加劑紅細(xì)胞保存,,(三) 紅細(xì)胞復(fù)蘇液,復(fù)蘇液（丙酮酸鹽、肌苷、葡萄糖、磷酸鹽、腺嘌呤及NaCl ）,,加入濃縮紅細(xì)胞,37℃保溫1小時(shí),紅細(xì)胞復(fù)蘇： ATP和2,3-DPG恢復(fù)

17、到正常水平,,,,輸注前要去除復(fù)蘇液,鑒定血液應(yīng)在充分的自然光線或日光燈下進(jìn)行（必要時(shí)可用放大鏡檢查）,,一、正常血的肉眼觀察,血液流入袋內(nèi)多呈暗紅色，有時(shí)呈鮮紅色,,血漿呈草黃色或淡黃色者為多見(jiàn),分層,紅細(xì)胞層呈暗紅色,,,白膜層,,,,,分層界面清晰,一、正常血的肉眼觀察,血漿層內(nèi)不應(yīng)有肉眼可見(jiàn)的血塊、絮狀物或漂浮物。有時(shí)出現(xiàn)不同程度的均勻乳黃色或乳白色脂肪顆粒樣漂浮物，在37℃加溫時(shí)易溶解呈透明狀若細(xì)菌污染則加熱后不透明。,,

18、一、正常血的肉眼觀察,白膜層(buffy coat)，荷葉狀、放射波浪狀、雪花狀、龜裂狀等,,一、正常血的肉眼觀察,紅細(xì)胞層暗紅色不含肉眼可見(jiàn)的血凝塊或其他異常物質(zhì)。如果有氣泡：1周后逐漸消失 正常在保存中如氣泡日漸增多，則有污染產(chǎn)氣桿菌的可能。,,,一、正常血的肉眼觀察,血液發(fā)出前，要仔細(xì)檢查，觀察是否有紅細(xì)胞微小凝塊，即冷凝集現(xiàn)象。冷凝集的血輸用前加溫，一般37℃ 5~10分鐘經(jīng)保溫的血液

19、若有溶血發(fā)生則應(yīng)放棄。,,二、異常血的肉眼觀察,一般庫(kù)存血紅細(xì)胞為暗紅色，如果顏色變成暗紫色（高錳酸鉀溶液顏色），則常常是細(xì)菌污染造成紅細(xì)胞溶血的結(jié)果。這種血不能輸用，必須進(jìn)行細(xì)菌培養(yǎng)。,(一) 血液顏色變化,,二、異常血的肉眼觀察,溶血：發(fā)生溶血的初期，血漿層底部首先變?yōu)榧t色或白細(xì)胞層出現(xiàn)玫瑰色的小環(huán)，這些現(xiàn)象是溶血初期的特征。溶血加重后，紅色血漿部分則越來(lái)越多，并向上部擴(kuò)展，最后全部血漿變?yōu)榧t色。,(二) 血漿層與紅細(xì)胞層分界

20、不清,,二、異常血的肉眼觀察,抗凝不佳：形成肉眼見(jiàn)到的小凝塊，嚴(yán)重時(shí)可形成整個(gè)大塊血凝塊往往沉降在血細(xì)胞層內(nèi)，可使整齊的表面變成凹凸不平。,(三) 大量血塊存在,,二、異常血的肉眼觀察,庫(kù)存血亦可能發(fā)生大小不等的纖維蛋白絮狀凝塊，漂浮于血漿層表面或懸浮在血漿層中。多量、大塊的血凝塊或纖維蛋白塊的存在，均表明血液質(zhì)量不佳，不僅輸血困難，也可能發(fā)生輸血反應(yīng)。原來(lái)血液沒(méi)有凝塊，保存后產(chǎn)生了血凝塊，則應(yīng)懷疑可能是細(xì)菌污染所致。,(三)

21、大量血塊存在,,二、異常血的肉眼觀察,乳糜：血漿內(nèi)含過(guò)多脂肪。庫(kù)存血如發(fā)生血漿明膠化現(xiàn)象，可能細(xì)菌污染，不能發(fā)出使用。,(四) 血漿層呈乳糜或明膠化,,,血液的冷凍保存研究開(kāi)始于20世紀(jì)40年代1949年P(guān)olge和Smith等人發(fā)現(xiàn)甘油對(duì)牛精子的冷凍保存有保護(hù)作用，從中得到啟示第二年，Smith應(yīng)用甘油作保護(hù)劑冷凍紅細(xì)胞獲得成功其后，血液冷凍保存的研究迅速發(fā)展，但是由于沒(méi)能解決去除防凍保護(hù)劑的問(wèn)題，臨床尚未能得到廣泛應(yīng)

22、用。,,,,1956年，Tullis應(yīng)用Cohn分離器將防凍劑甘油去除，從而使冷凍紅細(xì)胞成功地應(yīng)用于臨床。,1963年，Huggins發(fā)現(xiàn)紅細(xì)胞在糖溶液中有可逆性的聚集反應(yīng)，利用此反應(yīng)原理，可用糖液洗滌法去除防凍保護(hù)劑—甘油。,,Meryman等人利用不同濃度梯度的氯化鈉洗滌紅細(xì)胞去除防凍劑,,一、血細(xì)胞的低溫?fù)p傷機(jī)制,,低溫?fù)p傷機(jī)制,why？,一、血細(xì)胞的低溫?fù)p傷機(jī)制,,相變溫度區(qū)間：細(xì)胞在冷凍或復(fù)溶過(guò)程中，發(fā)生液相和固相轉(zhuǎn)變的溫度

23、區(qū)間在相變過(guò)程中，通常伴隨吸熱或者放熱反應(yīng)，以及體積的改變,一、血細(xì)胞的低溫?fù)p傷機(jī)制,,降溫過(guò)程的低溫?fù)p傷：來(lái)自于降溫、復(fù)溫過(guò)程中必須經(jīng)過(guò)的一個(gè)溫度區(qū)間，即－15℃ 至－60℃ 之間。該溫度區(qū)間對(duì)細(xì)胞具有殺傷性。,一、血細(xì)胞的低溫?fù)p傷機(jī)制,,(一) 鹽變性學(xué)說(shuō),慢速冷凍細(xì)胞損傷的主要原因：Lovelock等人提出，細(xì)胞外水結(jié)冰時(shí)，細(xì)胞收縮、脫水使細(xì)胞內(nèi)外產(chǎn)生的高濃度電解質(zhì)，作用于細(xì)胞膜，引起脂蛋白復(fù)合物的變性和部分類(lèi)脂質(zhì)的

24、丟失，增加了細(xì)胞對(duì)陽(yáng)離子的通透性，并使細(xì)胞膜上形成一些小孔，冰融化時(shí)水進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)引起滲透休克,一、血細(xì)胞的低溫?fù)p傷機(jī)制,,(二) 冰晶的機(jī)械作用,快速冷凍時(shí)細(xì)胞損傷的主要原因：在快速冷凍時(shí)，細(xì)胞內(nèi)形成許多冰晶，冰晶作用于細(xì)胞膜，并使細(xì)胞膜上產(chǎn)生小孔，使得細(xì)胞膜不可逆地喪失其半透性,一、血細(xì)胞的低溫?fù)p傷機(jī)制,,(二) 冰晶的機(jī)械作用,降溫過(guò)快或過(guò)慢，都會(huì)殺死細(xì)胞在慢的降溫速率下，細(xì)胞的低溫?fù)p傷源于“鹽變性”在高降溫速率下，細(xì)胞的

25、低溫?fù)p傷源于“胞內(nèi)冰”細(xì)胞冰凍保存的最佳降溫速率，應(yīng)該是慢到足以防止“胞內(nèi)冰”，同時(shí)又快到使“鹽變性”最小不同的細(xì)胞，由于細(xì)胞膜的生物特性不同，對(duì)最佳降溫速率的要求也不同。,一、血細(xì)胞的低溫?fù)p傷機(jī)制,,(三) 化學(xué)損傷,Levitt提出：冷凍時(shí)，在細(xì)胞脫水和溶質(zhì)濃縮過(guò)程中，蛋白質(zhì)組分異?？拷罱K使蛋白質(zhì)分子中巰基(SH)和二硫鍵(SS)發(fā)生相互不可逆的反應(yīng)，形成新的化學(xué)鍵，導(dǎo)致蛋白質(zhì)變性而引起細(xì)胞死亡。,一、血細(xì)胞的低溫?fù)p傷機(jī)制,

26、,(四) 細(xì)胞的融化反應(yīng),細(xì)胞復(fù)融過(guò)程中的損傷：融化反應(yīng)尚不明確,一、血細(xì)胞的低溫?fù)p傷機(jī)制,,(四) 細(xì)胞的融化反應(yīng),經(jīng)驗(yàn)總結(jié)：慢速冷凍的標(biāo)本應(yīng)慢速融化快速冷凍的標(biāo)本則應(yīng)采用快速融化的方法,二、冷凍保護(hù)劑,,冷凍保護(hù)劑可根據(jù)它們能否穿透細(xì)胞膜分為兩種,,細(xì)胞外保護(hù)劑,,加入保護(hù)劑后，可降低溶液的冰點(diǎn)，并增加未凍水量,小分子,大分子,,能自由地通過(guò)細(xì)胞膜,不能穿透細(xì)胞,,二、冷凍保護(hù)劑,,二、冷凍保護(hù)劑,,(二) 冷凍保護(hù)劑的種類(lèi)

27、,細(xì)胞內(nèi)保護(hù)劑：甘油、DMSO、葡萄糖、乙二醇、丙三醇、甲醇、乙醇、乙酸胺、甲酞胺等。細(xì)胞外保護(hù)劑：乳糖、麥芽糖、木糖、聚乙烯吡咯烷酮(PVP)、右旋糖酐、白蛋白、羥乙基淀粉（HES）、聚乙二醇（PEG）、甘露醇等。,三、低溫血液保存與玻璃化,,玻璃化就是生物材料在由液態(tài)向固態(tài)轉(zhuǎn)化過(guò)程中沒(méi)有相變熱產(chǎn)生，也就是沒(méi)有晶體生成。有人認(rèn)為冷卻速率達(dá)到10℃/秒，顆粒小于5~l0nm就不會(huì)使生物材料受到冷凍損傷，這就叫玻璃化。,三、低溫血

28、液保存與玻璃化,,添加冷凍保護(hù)劑或快速冷凍生物材料的目的就是使生物材料中的水處于容易達(dá)到玻璃化的狀態(tài)。,四、紅細(xì)胞甘油化、冷凍、融化和去甘油的方法,,解凍：慢速融化去除甘油試劑可用糖液聚集法或不同濃度梯度氯化鈉洗滌法,解凍：快速融化去除甘油試劑可用不同濃度梯度氯化鈉溶液，由高滲逐漸過(guò)渡到等滲分次洗滌,,五、冷凍紅細(xì)胞的制備方法,,在我國(guó)普遍使用,高濃度甘油慢速冷凍,五、冷凍紅細(xì)胞的制備方法,,高濃度甘油慢速冷凍,鹽液離心洗滌法,糖液

29、聚集洗滌法,按解凍后洗脫甘油的方法：,方法：先采用高張溶液使融化的高滲紅細(xì)胞滲透壓達(dá)到平衡，接著用逐漸減低的高張溶液進(jìn)行分次洗滌，最后用含有葡萄糖的等滲NaCl懸浮,五、冷凍紅細(xì)胞的制備方法,,等張溶液是指不引起紅細(xì)胞膜變形的溶液，這個(gè)概念是從生理角度考慮的。 有些溶質(zhì)的等滲濃度與等張濃度相同或相近，如0.9%的氯化鈉溶液，既是等滲溶液又是等張溶液。,五、冷凍紅細(xì)胞的制備方法,,有些溶質(zhì)如鹽酸普魯卡因、甘油、尿素等，等滲溶液不等于等

30、張溶液。例如2.6%的甘油溶液與0.9%的氯化鈉溶液具有相同的滲透壓，但是2.6%的甘油100%溶血，所以是不等張的。高張溶液會(huì)使紅細(xì)胞脫水皺縮，低張溶液會(huì)使紅細(xì)胞吸水膨脹。,五、冷凍紅細(xì)胞的制備方法,,先采用高張溶液使融化的高滲紅細(xì)胞滲透壓達(dá)到平衡，接著用逐漸減低的高張溶液進(jìn)行分次洗滌，最后用含有葡萄糖的等滲NaCl懸浮,,內(nèi),外,高滲,,水,,高張,水,,五、冷凍紅細(xì)胞的制備方法,,(一) 慢速冷凍糖液聚集洗滌制備法,1、糖

31、液聚集洗滌法去甘油原理,在pH5.2~6.1的范圍內(nèi)，血漿中的丙種球蛋白與紅細(xì)胞膜的脂蛋白之間可形成一種可逆性的復(fù)合物,五、冷凍紅細(xì)胞的制備方法,,(一) 慢速冷凍糖液聚集洗滌制備法,1、糖液聚集洗滌法去甘油原理,當(dāng)加入非電解質(zhì)溶液時(shí)，如果糖、葡萄糖、蔗糖等，由于離子強(qiáng)度減小，與脂蛋白結(jié)合的球蛋白之間又可結(jié)合，使紅細(xì)胞聚集成團(tuán)塊沉下來(lái)，除去甘油上清液,,五、冷凍紅細(xì)胞的制備方法,,(一) 慢速冷凍糖液聚集洗滌制備法,1、糖液聚集洗滌法去

32、甘油原理,當(dāng)加入電解質(zhì)如生理鹽水或升高pH值，可使球蛋白之間的結(jié)合斷開(kāi)，也可使丙種球蛋白與紅細(xì)胞膜脂蛋白之間的結(jié)合斷開(kāi)，使紅細(xì)胞重新懸浮,加等體積甘油化試劑,五、冷凍紅細(xì)胞的制備方法,,(一) 慢速冷凍糖液聚集洗滌制備法,2、制備方法（國(guó)內(nèi)改進(jìn)）,ACD或CPD全血(200 ml),,濃縮紅細(xì)胞(90~120 ml),離心移出血漿,,甘油化紅細(xì)胞(室溫平衡半小時(shí)),,甘油化：分漿后所得的濃縮紅細(xì)胞轉(zhuǎn)移到專(zhuān)用洗滌塑料袋中，袋內(nèi)裝有一由塑

33、料管密封的電磁攪拌器。在電磁攪拌器的攪拌下緩緩加入等體積的甘油試劑。,,37~40℃水浴中融化,,冷凍紅細(xì)胞,,解凍紅細(xì)胞,置-80℃冰箱或干冰中貯存,,去甘油紅細(xì)胞,,加入等體積50%的葡萄糖溶液后，分別再用10%蔗糖溶液500 mL洗脫3次。分別去除上清,,臨床輸用,測(cè)上清血紅蛋白合格后,,懸浮紅細(xì)胞,,加100 mL 0.9%NaCl洗滌，離心去上清，再加100 mL 0.9%NaCl重新懸浮紅細(xì)胞,,五、冷凍紅細(xì)胞的制備方法,

34、,(一) 慢速冷凍糖液聚集洗滌制備法,洗脫甘油：,國(guó)外均采用5%果糖進(jìn)行洗脫甘油，因果糖價(jià)格昂貴，我國(guó)用蔗糖代替果糖比較經(jīng)濟(jì)。,五、冷凍紅細(xì)胞的制備方法,,(二) 慢速冷凍鹽液洗滌制備法,使用不同濃度梯度的NaCl溶液先由高滲逐漸過(guò)度到等滲，可用大容量離心機(jī)反復(fù)離心或用連續(xù)離心機(jī)分離、洗脫掉冷凍紅細(xì)胞的防凍劑，達(dá)到去甘油的目的。此方法比糖液洗滌法經(jīng)濟(jì)，紅細(xì)胞回收率高，并且質(zhì)量好,五、冷凍紅細(xì)胞的制備方法,,(二) 慢速冷凍鹽液洗滌制

35、備法,1、制備方法,加入160 mL 57.1％甘油化試劑,ACD或CPD全血(200 ml),,濃縮紅細(xì)胞(90~120 ml),離心移出血漿,,甘油化紅細(xì)胞,,37~40℃水浴中解凍,,冷凍紅細(xì)胞,,解凍紅細(xì)胞,室溫平衡半小時(shí)，置－80℃冰箱或干冰中貯存,,去甘油紅細(xì)胞,,加入40 mL 9%NaCl，再加0.9％NaCl 250ml，離心去上清，再加0.9% NaCl 400~500 mL離心去上清，再用0.9% NaCl洗滌一次

36、,,臨床輸用,測(cè)上清血紅蛋白合格后,,懸浮紅細(xì)胞,,加100 mL 0.9% NaCl,,五、冷凍紅細(xì)胞的制備方法,,(三) 快速冷凍紅細(xì)胞制備方法,1、制備方法,加入等體積甘油化試劑,ACD或CPD全血(200 ml),,濃縮紅細(xì)胞(90~120 ml),離心移出血漿,,甘油化紅細(xì)胞,,45℃水浴中3分鐘內(nèi)完全融化,,冷凍紅細(xì)胞,,解凍紅細(xì)胞,－196℃冰凍，液氮蒸汽中貯存,,一次洗滌紅細(xì)胞,,利用細(xì)胞分離器或標(biāo)準(zhǔn)離心機(jī)分次洗滌，加含

37、有16％甘露醇的生理鹽水300～350 mL離心去上清,,懸浮紅細(xì)胞,加等體積的0.9％NaCl或含有0.2％葡萄糖的生理鹽水懸浮,,去甘油紅細(xì)胞,,加0.9％NaCl或0.2％葡萄糖的生理鹽水1000~2000 mL離心去上清,,五、冷凍紅細(xì)胞的制備方法,,(三) 快速冷凍紅細(xì)胞制備方法,2、甘油試劑配方,甘油 (w/v) 28 %甘露醇 (w/v)

38、 3 %氯化鈉 (w/v) 0.65％,六、冷凍紅細(xì)胞的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn),,(一) 紅細(xì)胞回收率在80%以上(二) 輸入人體24小時(shí)后紅細(xì)胞存活率在70%以上(三) 洗滌后紅細(xì)胞懸浮液上清血紅蛋白不超過(guò)1 g/L(四) 懸浮紅細(xì)胞甘油含量在1 g/L以下(五) 懸浮紅細(xì)胞體外溶血試驗(yàn)上清液血紅蛋白增加不超過(guò)50%(六) ATP、2,3-DPG和紅細(xì)胞脆性接近正常。(七) 血液細(xì)菌培養(yǎng)應(yīng)

39、無(wú)細(xì)菌生長(zhǎng)。,七、冷凍血的特點(diǎn)和臨床應(yīng)用,,(一) 優(yōu)點(diǎn),保存期可長(zhǎng)達(dá)10年。能部分調(diào)節(jié)血液供求不平衡現(xiàn)象，特別為需稀有血型輸 血的患者提供了方便，爭(zhēng)取到了搶救時(shí)間。平時(shí)貯備，一旦需要可立即解凍洗滌，滿足患者需要。對(duì)于自身輸血者，可用此方法預(yù)先獻(xiàn)血冷凍貯存，需要時(shí)解凍洗滌輸用。,七、冷凍血的特點(diǎn)和臨床應(yīng)用,,(一) 優(yōu)點(diǎn),經(jīng)過(guò)洗滌的紅細(xì)胞，由于去除了絕大部分白細(xì)胞、血小板和血漿蛋白，減少了輸血副反應(yīng)。,七、冷凍血的特點(diǎn)和臨床應(yīng)

40、用,,(一) 優(yōu)點(diǎn),冷凍血由于去除了細(xì)胞代謝產(chǎn)物、抗凝劑及可能的肝炎病毒，即使大量輸注也可避免酸中毒、高鉀血癥以及減少肝炎的傳播。由于去除了抗A抗B抗體，O型血真正成為萬(wàn)能供血者。,七、冷凍血的特點(diǎn)和臨床應(yīng)用,,(一) 優(yōu)點(diǎn),冷凍血的2,3-DPG含量與冷凍前區(qū)別不大，接近正常。輸入人體后，氧的釋放能力比常規(guī)方法保存血要好，可以立即糾正缺氧，這對(duì)于胸外科手術(shù)和新生兒換血有利。,七、冷凍血的特點(diǎn)和臨床應(yīng)用,,(二) 缺點(diǎn),工藝較為