氨基酸的薄層層析

1、實(shí)驗4氨基酸的薄層層析一、一、實(shí)驗實(shí)驗原理原理薄層層析是一種將固定相在固體上鋪成薄層進(jìn)行層析的方法。由于該方法具有操作簡便、層析展開時間短、靈敏度高、結(jié)果可視化等優(yōu)點(diǎn)，已被廣泛應(yīng)用于生物化學(xué)、醫(yī)藥衛(wèi)生、化學(xué)工業(yè)、農(nóng)業(yè)生產(chǎn)和食品等領(lǐng)域，對天然化合物的分離和鑒定也已廣泛應(yīng)用。薄層層析時一般將固體吸附劑涂布在平板上形成薄層作為固定相。當(dāng)液相（展開溶劑）在固定相上流動時，由于吸附劑對不同氨基酸的吸附力不一樣，不同氨基酸在展開溶劑中的溶解度不一樣

2、，點(diǎn)在薄板上的混合氨基酸樣品隨著展開劑的移動速率也不同，因而可以彼此分開。即通過吸附解吸再吸附再解吸的反復(fù)進(jìn)行，而將樣品各組分分離開。本實(shí)驗應(yīng)用硅膠作為固相支持物，用羧甲基纖維素鈉作為粘合劑，以正丁醇、冰醋酸及水的混合液為展開劑，測定混合氨基酸中各分離斑點(diǎn)的Rf值（Rf值詳見第一篇第三章第五節(jié)），以分離和鑒別混合氨基酸的成分。氨基酸的顯色反應(yīng)：茚三酮水化后生成水化茚三酮，它與氨基酸發(fā)生羧基反應(yīng)生成還原茚三酮、氨基醛，與此同時，還原茚三酮

3、又與氨基茚三酮縮合生成藍(lán)色化合物而使氨基酸斑點(diǎn)顯色。二、二、實(shí)驗實(shí)驗材料材料（一）（一）樣品1氨基酸標(biāo)準(zhǔn)溶液：（1）0.01molL丙氨酸：稱取丙氨酸8.9mg溶于90%異丙醇溶液至10ml。（2）0.01molL精氨酸：稱取精氨酸17.4mg溶于90%異丙醇溶液至10ml。（3）0.01molL甘氨酸：稱取甘氨酸7.5mg溶于90%異丙醇溶液至10ml。2混合氨基酸溶液：將0.01molL丙氨酸、精氨酸、甘氨酸按等體積制成混合溶液。（

4、二）（二）試劑試劑1硅膠G(C.P.)涂層裂開。0.5h，自然涼干。（4）活化：70℃c烘干60分鐘。a.用冷風(fēng)吹干，避免破壞氨基酸。最好從玻板背面吹。b.重復(fù)點(diǎn)樣時必須等第一點(diǎn)樣品干后再點(diǎn)第二點(diǎn)。2點(diǎn)樣↓（1）標(biāo)記：用鉛筆距底邊2cm水平線上均勻確定4個點(diǎn)并做好標(biāo)記。每個樣品間相距1cm。（2）點(diǎn)樣：用毛細(xì)管分別吸取丙氨酸、精氨酸、甘氨酸及混合氨基酸溶液，輕輕接觸薄層表面點(diǎn)樣。加樣原點(diǎn)擴(kuò)散直徑不超過2mm。點(diǎn)樣后用電吹風(fēng)a輕輕吹干，必