豬胚胎移植關鍵點討論

1、豬胚胎移植關鍵點討論豬胚胎移植關鍵點討論摘要摘要：由于豬的生長周期短，商品化程度高，傳統(tǒng)的生產(chǎn)繁殖方式已經(jīng)不能滿足需要，胚胎移植技術應運而生。本文論述了豬的胚胎移植各個關鍵控制點和目前所應用的技術，以及在生產(chǎn)實踐中的應用。關鍵詞關鍵詞胚胎移植技術冷凍1890年Heape在英國劍橋大學首次報道獲得兔子胚胎移植成功以來，胚胎移植技術已有100多年的研究歷史。20世紀30年代以來，胚胎移植的研究越來越多，對各種家畜均獲成功，主要有綿羊（193

2、4）、山羊（1949）、豬（1951）、牛（1951）、馬（1974）。1975年1月在美國科羅拉多州召開了第一屆國際胚胎移植學會成立大會，標志著胚胎移植技術進入了更高的發(fā)展階段。1976年牛的非手術移植技術推廣，1977年開始商業(yè)化應用，13個國家成立了數(shù)百家商業(yè)化胚胎移植公司。僅北美洲1978年移植后妊娠的牛近1萬例，目前僅美國每年通過胚胎移植技術而妊娠的牛達30萬[1]。而豬的胚胎移植，一方面由于豬是多胎動物，胚胎移植被陷入應用范

3、圍較窄的誤區(qū)；另一方面是由于配套的非手術取卵和移植及胚胎凍存很困難，因此至今未能像牛、羊那樣被廣泛應用。綜合國內外目前的已有技術和水平，豬胚胎移植技術的應用已處于水到渠成的階段，并且能夠給種豬的生產(chǎn)經(jīng)營者帶來可觀的經(jīng)濟效益。從妊娠的母豬子宮內取出受精卵，將其移植到發(fā)情周期相同的其它母豬體內，并使其妊娠、著床、分娩的過程就是豬的胚胎移植技術。豬的胚胎移植1951年在世界上首次獲得成功。出于豬的生殖系統(tǒng)構造復雜及豬受精卵對低溫抵抗力較弱等原

4、因，豬胚胎移植技術目前還未得到普及。但是，近年來，作為豬群凈化和繁殖改良的手段，已被世界養(yǎng)豬界所關[2]。1前期準備前期準備在初產(chǎn)母豬的正常發(fā)情周期的第15天或16天，用1000—1500IU的孕馬血清促性腺激素皮下或肌肉注射，平均可排卵2030個?；蛘咴旭R血清促性腺激素與人絨毛膜促性腺激素配合使用，即在性周期第15天注射孕馬血清促性腺激素1000IU后再注射人絨毛膜促性腺激素500IU可有效增加排卵數(shù)。經(jīng)超排處理的初產(chǎn)母豬于給予孕馬血

5、清促性腺激素后4天開始發(fā)情，比正常發(fā)情時間要早1天。初情期前的青年母豬（56）月齡同樣可以進行超數(shù)排卵處理。一般用250—2000IU的孕馬血清促性腺激素肌肉注射，48小時后再用500IU人絨毛膜促性腺激素，24小時后進行人工授精，平均22個排卵數(shù)獲得13個受精卵。青年母豬對孕馬血清促性腺激素反應有明顯的季節(jié)性差異，其它季節(jié)要使用春季用量的2倍。青年母豬的超數(shù)排卵效果比經(jīng)產(chǎn)母豬好，這可能與青年母豬的排卵數(shù)相對較少有關。在進行胚胎移植時，

6、，供體與受體母畜的生殖周期，一般應力求同期化。否則，移植的胚胎因生理環(huán)境不適而被排除掉。在進行豬胚胎移植時，受體豬較供體豬發(fā)情慢1天或2天為最好。近年來，許多人工合成內分泌激素開發(fā)成功，由單獨應用孕酮發(fā)展到孕酮與雌激素聯(lián)合應用，對豬施行超數(shù)排卵，其主要目的是確保供胚母豬能夠多排卵，產(chǎn)生更多的胚胎供移植使用【2】。2胚胎的采集胚胎的采集當確認供卵豬發(fā)情之后，使其自然交配或人工授精。從發(fā)情開始4—7天固定在手術床上。工作人員使用螺旋狀的人工

7、授精管插入子宮體，然后使用特殊設計的不銹鋼子宮頸開塞器，撐開子宮頸口，以內置的柔性細管(長170cm，外徑3.5mm，內徑2mm)將胚胎轉移人子宮角。試驗分為2組進行。第l組將胚胎植入子宮角中部，輸入含有10～20mL培養(yǎng)液。另l組使用常規(guī)的人工授精方法，給予小劑量鎮(zhèn)靜劑或不使用鎮(zhèn)靜劑。二組都使用導管與三通管相連，進入子宮后用10一20mL培養(yǎng)液，再用15mL空氣排空導管內的液體，也有使用少量液體多次沖洗，總量50mL，最后用l0mL空

8、氣排空液體。對經(jīng)產(chǎn)母豬使用鎮(zhèn)靜劑，應用柔性導管通過子宮頸插入導管，在子宮角中部植入胚胎。此法獲得受體母豬的妊娠率為33％。經(jīng)過多次改良，最近(2004)取得了平均妊娠率為59％。多數(shù)報告妊娠率在19％一64％，窩產(chǎn)仔3.1—10.9頭。雖然各研究者使用的方法不同，但應用鎮(zhèn)靜劑的受體母豬平均妊娠率達60％。使用特殊設計的導管，比其它方法能使胚胎植入到子宮角，窩產(chǎn)仔6—11頭。植入胚胎時，輸入少量的胚胎培養(yǎng)液，應用柔性導管是非常重要的。因為

9、母豬在妊娠早期，子宮液分泌很少。輸入液體量大時，植入的胚胎會隨液體流入子宮頸管，造成胚胎的損失或死亡。在農(nóng)場的條件下和豬的人工授精一樣，使用簡單的設備和花最少的時間，實施非手術法是可行的。因此使用腹腔鏡法而不使用手術實行胚胎移植也是一種可行的方法，但仍需要設備。據(jù)介紹，在非麻醉的條件下使用柔性導管通過子宮頸，對經(jīng)產(chǎn)母豬移植非常容易，但對青年母豬由于子宮頸狹窄和閉鎖，比較困難。但是所有的方法，特別是非手術法更需要訓練有素的人員。2.32.

10、3內窺鏡法內窺鏡法內窺鏡法是一種精細的外科手術，切口很小，只需在腹部切開1cm左右的2～3個小口，將腹腔鏡插入，進行收集和植入胚胎。這種方法仍需要麻醉和類似于常規(guī)手術的程序。腹腔鏡法移植平均妊娠率為14％一46％，窩產(chǎn)仔8頭左右。據(jù)Bmssow等的報告，最近妊娠率已提高到90％。這種損傷性很小的方法，已在國外個別農(nóng)場中應用。3胚胎移植胚胎移植含有胚胎的沖洗液于立體顯微鏡下找出胚胎。經(jīng)檢查形態(tài)學正常的胚胎可用于移植，移植胚胎時，只需將胚胎

11、植入一側子宮即可，因為豬胚胎在子宮內會遷移，最后在兩側子宮均勻分布（Dziuk等1964）一般植入受精卵的數(shù)目以1020個為宜。外科術式移植胚胎，可采用腹中線切口法，也可用我國民間閹割豬手術法，后者效果較好，且不需縫合切【3】。移植胚胎的部位取決于胚胎發(fā)育階段。子宮植胚時，可直接在輸卵管峽部距子宮頂端附近穿刺，然后將吸管緩慢插入子宮腔。輸卵管植胚時，從輸卵管傘部插進胚胎吸管約5cm。37日齡豬胚胎移植到同期化受體內，平均受孕率達85%，

12、移植胚存活率高達70%。目前還無數(shù)據(jù)說明，影響非手術移植的因素和如影響的。日齡和胚胎發(fā)育的階段，同期化率和胚胎收集的方等，這些都需要通過實驗測定。另外青年母豬和經(jīng)產(chǎn)豬的供體與受體同期化的方法，胚胎發(fā)育階段，沖洗培養(yǎng)胚胎液的成分、時間和溫度等都需要深入研究。有報告指出，胚胎的培養(yǎng)在3d以上時，將造成質量降和妊娠率降低。Kemp等(2000)報告，試驗組胚胎存3d后，移植母豬的妊娠率只有9％一53％，而對照用鮮胚移植的妊娠率為70％～80％