胚胎移植 2

1、第二章,胚胎移植技術(shù),1、胚胎移植概述,定義：Embryo Transfer（ET）是將體內(nèi)、外生產(chǎn)的哺乳動物早期胚胎移植到同種的生理狀態(tài)相同的雌性動物生殖道內(nèi)，使之繼續(xù)發(fā)育成正常個體的生物技術(shù)，即通常所說的“借腹懷胎”。DonorRecipientMultiple ovulation and embryo transfer， MOET,1.1 胚胎移植的歷史,,實驗研究階段,實際應(yīng)用階段,產(chǎn)業(yè)化開發(fā)階段,移植體外受精的胚胎得到后

2、代的野生動物種類,將胚胎移植給親緣種獲得后代的野生動物種類,試管嬰兒(assisted reproductive techniques, art),1.2 胚胎移植技術(shù)的利用,提高良種母畜繁殖力簡化良種引進方法降低種質(zhì)資源保存費用加速育種進程……,1.3 胚胎移植的生理基礎(chǔ)及原則,1.3.1生理學基礎(chǔ)母畜發(fā)情后生殖器官的孕向發(fā)育早期胚胎的游離狀態(tài)子宮對早期胚胎的免疫耐受性胚胎遺傳物質(zhì)的穩(wěn)定性,,,Blastocystw

3、ith blastocoele cavity,Morula solid ball of cells,,Zygote,,1.3.2 胚胎移植的基本原則,1.胚胎移植前后所處的環(huán)境的同一性（1）供體和受體在分類學上屬于同一物種（2）胚胎發(fā)育階段與受體發(fā)情時間上的一致性（3）胚胎發(fā)育階段與受體生殖道解剖位置的一致性,2.胚胎質(zhì)量3.經(jīng)濟效益和科學價值,1.3.2 胚胎移植的基本原則,,,E,G,1.4 胚胎移植應(yīng)具備的條件,1.實驗

4、室條件2.技術(shù)條件3.胚胎來源：in vivo, in vitro,,,1.5胚胎移植存在的主要問題,胚胎來源技術(shù)人員匱乏胚胎冷凍問題諸多胚胎移植費用高羊、豬等動物手術(shù)操作限制受體重復(fù)使用,2.胚胎移植技術(shù)程序及操作,供體和受體的選擇超數(shù)排卵處理供體母畜的配種胚胎的收集胚胎的檢查胚胎的保存與培養(yǎng)胚胎的移植供體和受體的術(shù)后觀察,×,,,,,,,,,,,,,,,,,,,ET,胚胎收集質(zhì)量檢查,受體母牛,

5、同期發(fā)情,,,,,胚胎移植程序示意圖,體外受精-胚胎移植（IVF-ET）技術(shù)流程圖,2.1供體和受體的選擇,供體應(yīng)具有遺傳優(yōu)勢，良好的育種價值；供體應(yīng)具有良好的繁殖能力；供體應(yīng)營養(yǎng)良好，體質(zhì)健壯，健康無疾?。皇荏w具有良好的繁殖機能，體質(zhì)健康；供受體發(fā)情時間應(yīng)接近或一致（24小時之內(nèi)）。,2.2 供體的超數(shù)排卵處理,意義：讓每個供體提供更多的胚胎處理時間： 牛day 9-13; 綿羊：day12-13; 山羊：day1

6、7影響超排效果的因素 1、個體差異：品種、年齡、胎次、重復(fù)超排 2、環(huán)境條件：季節(jié)、營養(yǎng)、畜舍環(huán)境衛(wèi)生 3、超排方法：激素類別、廠家批次、,,牛超數(shù)排卵示意圖（FSH法）,,,總劑量：8-10mg；325-400IU,PMSG法,孕馬血清促性腺激素(PMSG)處理法在情期的11～12d，一次肌注PMSG2500～3000IU，48h后宮注PGF2α2.4mg發(fā)情后約18h肌注等量的抗PMSG。,2.3 發(fā)情觀

7、察和配種,多數(shù)個體在結(jié)束處理后12～48h發(fā)情發(fā)情鑒定：每日2-3次，觀察+試情；發(fā)情開始后8-12小時首次輸精；間隔12小時再輸精1次；每次輸精有效精子數(shù)：2400萬；,2.4 胚胎的采集,采集時間的確定：發(fā)育時程采集方法： 手術(shù)法采集：適應(yīng)范圍廣 非手術(shù)法采集：牛、馬,2.5 胚胎的檢查和鑒定,胚胎檢查方法 含胚胎的沖胚液的處理； 胚胎的查找與收集；胚胎的分級A級：發(fā)育階段與胚齡

8、一致；胚胎形態(tài)完整，輪廓清晰，呈球形，分裂球 大小均勻，結(jié)構(gòu)緊湊，色調(diào)和透明度適中，無游離的細胞和液泡B級：發(fā)育階段與胚齡基本一致；胚胎形態(tài)完整，輪廓清晰，分裂球大小基本一致，可見到少量游離的細胞和液泡C級：輪廓不清晰，色調(diào)發(fā)暗，結(jié)構(gòu)較松散，游離的細胞或液泡較多D級：胚胎細胞無組織結(jié)構(gòu)，碎片占主要成分；,二細胞至四細胞胚胎,,胚胎的早期發(fā)育過程,,2.6 供體牛、受體牛的同期發(fā)情,對群體母畜采取措施，使之發(fā)情相對集中在一定時間范

9、圍的技術(shù)，也稱發(fā)情同期化。1、自然同期發(fā)情 根據(jù)受體牛的發(fā)情觀察，與供體牛發(fā)情前后相差一天內(nèi)的牛，可作為受體。2、人工處理的同期發(fā)情 原理：人為延長黃體期； 方法：孕激素法；前列腺素法；,同期發(fā)情超排同時處理舉例,1、手術(shù)法移植 移植入輸卵管 移植入子宮角2、非手術(shù)法移植,2.7 胚胎移植入受體,手術(shù)法移植,手術(shù)法是指將動物保定、全身麻醉或局部麻醉后，清理手術(shù)部位，在背部或腹中線開口，將輸卵管或子宮拉出體外

10、，移植胚胎。 如果進行輸卵管移植，把吸好胚胎的移植管由輸卵管傘口插入管內(nèi)，盡量插得深一些，然后把胚胎吹入輸卵管內(nèi)。移植時，應(yīng)盡量少帶入液體。 如果進行子宮移植，在離子宮角與輸卵管接合部約5cm處，先用鈍頭針扎一小孔，隨即抽出，把移植管順此孔插入子宮腔，吹入胚胎。復(fù)位輸卵管或子宮、縫合。 手術(shù)法一般是移植卵裂早期的胚胎。,,,,,胚胎裝管示意圖,,,非手術(shù)法移植,健康觀察妊娠檢查供體的發(fā)情觀察與利用,2.8 供、受體的術(shù)后護理與觀察