微生物常規(guī)鑒定技術(shù)

1、1微生物常規(guī)鑒定技術(shù)微生物常規(guī)鑒定技術(shù)一.形態(tài)結(jié)構(gòu)和培養(yǎng)特性觀察形態(tài)結(jié)構(gòu)和培養(yǎng)特性觀察1.微生物的形態(tài)結(jié)構(gòu)觀察主要是通過(guò)染色，在顯微鏡下對(duì)其形狀、大小、排列方式、細(xì)胞結(jié)構(gòu)（包括細(xì)胞壁、細(xì)胞膜、細(xì)胞核、鞭毛、芽孢等）及染色特性進(jìn)行觀察，直觀地了解細(xì)菌在形態(tài)結(jié)構(gòu)上特性，根據(jù)不同微生物在形態(tài)結(jié)構(gòu)上的不同達(dá)到區(qū)別、鑒定微生物的目的。2.細(xì)菌細(xì)胞在固體培養(yǎng)基表面形成的細(xì)胞群體叫菌落（colony）。不同微生物在某種培養(yǎng)基中生長(zhǎng)繁殖，所形成的菌落特

2、征有很大差異，而同一種的細(xì)菌在一定條件下，培養(yǎng)特征卻有一定穩(wěn)定性。，以此可以對(duì)不同微生物加以區(qū)別鑒定。因此，微生物培養(yǎng)特性的觀察也是微生物檢驗(yàn)鑒別中的一項(xiàng)重要內(nèi)容。2.1細(xì)菌的培養(yǎng)特征包括以下內(nèi)容：在固體培養(yǎng)基上，觀察菌落大小、形態(tài)、顏色（色素是水溶性還是脂溶性）、光澤度、透明度、質(zhì)地、隆起形狀、邊緣特征及遷移性等。在液體培養(yǎng)中的表面生長(zhǎng)情況（菌膜、環(huán)）混濁度及沉淀等。半固體培養(yǎng)基穿刺接種觀察運(yùn)動(dòng)、擴(kuò)散情況。2.2霉菌酵母菌的培養(yǎng)特征：

3、大多數(shù)酵母菌沒有絲狀體，在固體培養(yǎng)基上形成的菌落和細(xì)菌的很相似，只是比細(xì)菌菌落大且厚。液體培養(yǎng)也和細(xì)菌相似，有均勻生長(zhǎng)、沉淀或在液面形成菌膜。霉菌有分支的絲狀體，菌絲粗長(zhǎng)，在條件適宜的培養(yǎng)基里，菌絲無(wú)限伸長(zhǎng)沿培養(yǎng)基表面蔓延。霉菌的基內(nèi)菌絲、氣生菌絲和孢子絲都常帶有不同顏色，因而菌落邊緣和中心，正面和背面顏色常常不同，如青霉菌：孢子青綠色，氣生菌絲無(wú)色，基內(nèi)菌絲褐色。霉菌在固體培養(yǎng)表面形成絮狀、絨毛狀和蜘蛛網(wǎng)狀菌落。3不要到達(dá)底部，留底部

4、作變色對(duì)照。培養(yǎng)2，4和24h分別觀察結(jié)果，如陰性應(yīng)繼續(xù)培養(yǎng)至4天，作最終判定，變?yōu)榉奂t色為陽(yáng)性。2.氧化酶（Oxidase）試驗(yàn)氧化酶亦即細(xì)胞色素氧化酶，為細(xì)胞色素呼吸酶系統(tǒng)的終末呼吸酶，氧化酶先使細(xì)胞色素C氧化，然后此氧化型細(xì)胞色素C再使對(duì)苯二胺氧化，產(chǎn)生顏色反應(yīng)。試驗(yàn)方法：在瓊脂斜面培養(yǎng)物上或血瓊脂平板菌落上滴加試劑1~2滴，陽(yáng)性者Kovacs氏試劑呈粉紅色~深紫色，Ewing氏改進(jìn)試劑呈藍(lán)色。陰性者無(wú)顏色改變。應(yīng)在數(shù)分鐘內(nèi)判定試

5、驗(yàn)結(jié)果。注意事項(xiàng)：鹽酸二甲基對(duì)苯撐二胺溶液容易氧化，溶液應(yīng)裝在棕色瓶中，并在冰箱內(nèi)保存，如溶液變?yōu)榧t褐色，即不宜使用。鐵、鎳鉻絲等金屬可催化二甲基對(duì)苯撐二胺呈紅色反應(yīng)，若用它來(lái)挑取菌苔，會(huì)出現(xiàn)假陽(yáng)性，故必須用白金絲或玻璃棒（或牙簽）來(lái)挑取菌苔。在濾紙上滴加試劑，以剛剛打濕濾紙為宜，如濾紙過(guò)濕，會(huì)防礙空氣與菌苔接觸，從而延長(zhǎng)了反應(yīng)時(shí)間，造成假陰性。3.3.過(guò)氧化氫酶的測(cè)定過(guò)氧化氫酶的測(cè)定過(guò)氧化氫酶又稱接觸酶，能催化過(guò)氧化氫分解水和氧。試劑

6、：3－10％過(guò)氧化氫（H2O2）菌種培養(yǎng)：將測(cè)試菌種接種于合適的培養(yǎng)基斜面上，適溫培養(yǎng)18－24h。試驗(yàn)方法：取一干凈的載波片，在上面滴1滴3－10％的H2O2，挑取1環(huán)培養(yǎng)18－24h的菌苔，在H2O2溶液中涂抹，若有氣泡（氧氣）出現(xiàn)，則為過(guò)氧化氫酶陽(yáng)性，無(wú)氣泡者為陰性。也可將過(guò)氧化氫溶液直接加入斜面上，觀察氣泡的產(chǎn)生。注意事項(xiàng)：過(guò)氧化氫酶是1種以正鐵血紅素作為輔基的酶，所以測(cè)試菌所生長(zhǎng)的培養(yǎng)基不可含有血紅素或紅血球。4、甲基紅（、甲