藻酸鈉對小鼠卵巢凍存的影響.pdf

1、目的：探索藻酸鈉作為冷凍保護(hù)劑對小鼠卵巢冷凍保存的影響。
　　方法：取4-5周齡CD1雌性小鼠雙側(cè)卵巢并于PBS中切割為1×1×1mm3大小，隨機(jī)分為六組：空白對照組A組（DMSO+EG）；實(shí)驗(yàn)組B組（DMSO+EG+0.05％藻酸鈉）；實(shí)驗(yàn)組C組（DMSO+EG+0.1%藻酸鈉）；實(shí)驗(yàn)組D組（DMSO+EG+0.15%藻酸鈉）；實(shí)驗(yàn)組E組（DMSO+EG+0.2%藻酸鈉）；新鮮對照組F組。卵巢組織于室溫條件下，在冷凍液1中滲透平

2、衡15分鐘，于冷凍液2中滲透平衡5分鐘。用鑷子抓取組織塊，貼附于20ml注射器針頭上，直接投入50ml裝有液氮的離心管中，置于液氮中冷凍保存7天。再從液氮中取出注射器針頭，直接投入預(yù)熱為37℃1mol/L蔗糖的復(fù)蘇液中復(fù)蘇2分鐘，依次置于蔗糖濃度為0.5、0.25、0.125mol/L的復(fù)蘇液中各復(fù)蘇5分鐘，結(jié)束后置于PBS中洗3次，每次5分鐘。取出組織塊，用10%中性甲醛固定，蘇木素-伊紅染色計數(shù)卵泡存活率；TUNEL染色計數(shù)卵泡凋亡

3、率。采用SPSS17.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析，各級卵母細(xì)胞的存活率用方差分析對比，P＜0.05為差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。
　　結(jié)果：HE染色：各組間存活卵泡數(shù)比較，新鮮對照組的存活率最高，為76.17%；空白對照組和各實(shí)驗(yàn)組對比，隨著添加藻酸鈉濃度的增加，卵泡存活率呈現(xiàn)先上升后下降的趨勢，存活率分別為56.22%、46.28%、65.10%、67.29%、41.15%，添加濃度為0.15%-0.1%的藻酸鈉可提高卵泡的存活率。TUNEL

4、染色：與HE染色結(jié)果相對應(yīng)，新鮮對照組的卵泡凋亡率最低，為26.32%，空白對照組和各實(shí)驗(yàn)組相比，隨著添加藻酸鈉濃度的增加，卵泡凋亡率呈現(xiàn)先下降后上升的趨勢，凋亡率分別為48.48%、54.39%、38.36%、33.87%、58.93%，藻酸鈉濃度的增加可適度降低卵泡凋亡率，但存在濃度閾值，藻酸鈉濃度超過0.1%-0.15%后，卵泡凋亡率顯著性增高。
　　結(jié)論：DMSO+EG+0.05%-0.1%藻酸鈉作為冷凍保護(hù)劑凍存卵巢組織