丙戊酸鈉對小鼠銀屑病模型的影響.pdf

1、丙戊酸鈉作為廣譜抗癲癇藥物應用于臨床已多年，其藥理作用與γ-氨基丁酸有關(guān)，對各型癲癇如小發(fā)作、肌攣性癲癇、局限性發(fā)作、大發(fā)作和混合型癲癇及雙向情感障礙均有效。
　　丙戊酸也是一種組蛋白去乙?；敢种苿?，組蛋白去乙酰化酶抑制劑是近年來發(fā)現(xiàn)的一類新的抗腫瘤靶向藥物，通過抑制組蛋白去乙?；傅幕钚?，使乙?；慕M蛋白堆積從而改變?nèi)旧|(zhì)的結(jié)構(gòu)及功能，調(diào)控某些特定基因的表達，誘導腫瘤細胞生長阻滯、分化和凋亡，阻止腫瘤細胞的浸潤和轉(zhuǎn)移，抑制腫瘤

2、血管和淋巴管的生成等，從而達到治療腫瘤的目的。組蛋白去乙?；敢种苿┏丝鼓[瘤活性外，還具有免疫調(diào)節(jié)活性。研究表明組蛋白去乙?；敢种苿┩ㄟ^抑制細胞因子如腫瘤壞死因子α，白介素6及一氧化氮的合成參與多種炎癥反[1]。組蛋白去乙?；敢种苿┦且环N潛在的免疫調(diào)節(jié)劑。
　　銀屑病是一種由遺傳、免疫、感染等因素引起的慢性復發(fā)性炎癥性皮膚病，臨床上以軀干、四肢伸側(cè)的紅斑、斑塊及銀白色鱗屑為主，病理組織學改變有角質(zhì)形成細胞角化過度伴角化不全、

3、新生血管生成及炎性細胞浸潤。病因不是十分清楚，可以由不同的環(huán)境因素誘發(fā)或加劇，尤其是感染和藥物，目前仍是世界范圍內(nèi)研究的難題。越來越多的研究表明，IL-23/IL-17軸在銀屑病發(fā)病過程中起到了至關(guān)重要的作用[2，3]。除了上述的炎癥因子外，白介素1、白介素6、腫瘤壞死因子α等也參與到銀屑病的病理生理過程[4]。
　　目的：
　　本實驗探究外用丙戊酸鈉對小鼠銀屑病模型皮膚炎癥以及丙戊酸鈉對人永生化角質(zhì)形成細胞系HaCaT增殖

4、的影響。
　　材料與方法：
　　一、實驗材料
　　6～8周齡雄性SPF級BALB/c小鼠，隨機分為六組，10％丙戊酸鈉組、5％丙戊酸鈉組、2.5％丙戊酸鈉組、1.25％丙戊酸鈉組、基質(zhì)組和空白對照組，每組3只。
　　6～8周齡雄性SPF級BALB/c小鼠，隨機分為五組，即咪喹莫特(Imiquimod，IMQ)+5％丙戊酸鈉組、IMQ+2.5％丙戊酸鈉組、IMQ+基質(zhì)組、IMQ+糠酸莫米松組、基質(zhì)組，每組5只。

5、r>　　人永生化角質(zhì)形成細胞系HaCaT。
　　二、實驗方法
　　10％丙戊酸鈉組、5％丙戊酸鈉組、2.5％丙戊酸鈉組、1.25％丙戊酸鈉組分別在每組小鼠背部約2×2cm2的面積涂抹不同濃度的丙戊酸鈉軟膏100mg，基質(zhì)組給予基質(zhì)100mg，空白對照組不予處理。在實驗的第7、14天取背部皮膚組織切片進行蘇木精-伊紅(hematoxylin-eosin staining，HE)染色。
　　IMQ+5％丙戊酸鈉組、IMQ+

6、2.5％丙戊酸鈉組、IMQ+基質(zhì)組、IMQ+糠酸莫米松組、基質(zhì)組，每組均在其背部約2×2cm2的面積及右耳涂抹外用藥，除基質(zhì)組外，每組給予咪喹莫特62.5mg，IMQ+5％丙戊酸鈉組、IMQ+2.5％丙戊酸鈉組給予不同濃度的丙戊酸軟膏100mg，IMQ+基質(zhì)組給予基質(zhì)100mg，IMQ+糠酸莫米松組給予糠酸莫米松乳膏20mg，基質(zhì)組給予基質(zhì)100mg。
　　依據(jù)銀屑病面積和嚴重程度指數(shù)(Psoriasis Area and Sev

7、erity Index，PASI)評分標準，給予小鼠皮損處紅斑、鱗屑程度0～4的評分及測量右耳厚度，將紅斑、鱗屑評分相加得到總積分。PASI評分標準如下:0，無;1，輕度;2，中度;3，重度;4，極重度。對各組小鼠積分取平均值后繪圖，觀察各組小鼠皮損的變化情況。在實驗的第2、4、6、8、10天取背部皮膚進行HE染色，鏡下觀察各組小鼠皮膚組織病理變化。
　　將HaCaT細胞以5×104個/ml的濃度接種于96孔板，每孔0.1ml，每

8、個濃度設(shè)6個平行復孔，待細胞完全貼壁后，加入事先配制好的含有不同濃度丙戊酸鈉的培養(yǎng)基。在37℃，5％CO2的恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24小時后每孔滴加20μl MTS，繼續(xù)培養(yǎng)4小時后于490nm酶標儀下讀取數(shù)值。重復試驗3次。
　　三、統(tǒng)計分析
　　應用SPSS20.0軟件進行數(shù)據(jù)處理。采用完全隨機設(shè)計的方差分析，兩組之間采用LSD-t檢驗或SNK法。p＜0.05認為有統(tǒng)計學差異。
　　結(jié)果：
　　10％丙戊酸鈉組及5

9、％丙戊酸鈉組的正常小鼠背部皮膚在第5天開始出現(xiàn)皺褶和少許鱗屑，在實驗的觀察終點，背部皮膚皺褶和鱗屑并不明顯，無明顯紅斑。2.5％丙戊酸鈉組、1.25％丙戊酸鈉組、基質(zhì)組及空白組無明顯變化。HE染色顯示，10％丙戊酸鈉組及5％丙戊酸鈉組表皮增厚，角化過度，真皮可見一定量的中性粒細胞浸潤，2.5％和1.25％丙戊酸鈉組表皮略增厚，無可見的中性粒細胞浸潤?；|(zhì)組與空白對照組無異常改變。
　　外用丙戊酸鈉軟膏的銀屑病模型小鼠背部皮膚在實驗

10、第2天開始出現(xiàn)紅斑和鱗屑，并且隨著天數(shù)的增加，綜合評分逐漸增高，在第8天達到高峰，第8天以后開始下降。外用丙戊酸鈉軟膏的銀屑病模型小鼠綜合評分高于外用基質(zhì)的銀屑病模型小鼠，外用基質(zhì)的銀屑病模型小鼠在第3天開始出現(xiàn)紅斑，隨著時間的推移，紅斑和鱗屑程度加重，在第8天達到高峰，第8天以后，紅斑和鱗屑程度逐漸減輕。與其他實驗觀察到的咪喹莫特造模變化趨勢相似。外用糠酸莫米松的銀屑病模型小鼠的綜合評分在第4天才開始增加，同樣也是在第8天達到高峰，隨

11、后開始下降，但炎癥程度低于以上三組?；|(zhì)組小鼠皮膚無肉眼可見的改變。
　　外用丙戊酸鈉軟膏的銀屑病模型小鼠耳朵厚度逐漸增高。外用5％丙戊酸鈉軟膏的銀屑病模型小鼠與外用2.5％丙戊酸鈉軟膏的銀屑病模型小鼠耳朵增厚程度相近，且兩者均高于外用基質(zhì)的銀屑病模型小鼠，外用基質(zhì)的銀屑病模型小鼠在第2天開始增厚，在第10天達到最高，外用糠酸莫米松的銀屑病模型小鼠在第6天才開始出現(xiàn)耳朵厚度的增加，且增厚程度變化不明顯，與基質(zhì)組接近。
　　與

12、對照組相比，濃度為0.1～500μM的丙戊酸鈉對人永生化角質(zhì)形成細胞系HaCaT的增殖具有促進作用，并且隨著濃度繼續(xù)升高，促進作用逐漸減低，2000μM丙戊酸鈉人永生化角質(zhì)形成細胞系HaCaT的增殖不具有促進作用，與對照組無差異。
　　結(jié)論：
　　1、丙戊酸鈉軟膏能夠引起正常小鼠皮膚炎癥。
　　2、丙戊酸鈉軟膏加重咪喹莫特所致的銀屑病模型小鼠皮膚炎癥。
　　3、一定濃度范圍的丙戊酸鈉促進入永生化角質(zhì)形成細胞系Ha