不同配比凍存液對(duì)人脂肪細(xì)胞活性影響的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、研究背景:
　　由于自體脂肪組織的生物相容性優(yōu)于人工生物制品及異體材料,且無(wú)免疫排斥現(xiàn)象,成本相對(duì)低廉，目前已成為理想的軟組織填充材料，得到了廣泛臨床應(yīng)用。然而移植脂肪高吸收率、低存活率的問(wèn)題一直困擾著整形外科醫(yī)師，若想達(dá)到長(zhǎng)期滿意效果，常需進(jìn)行二次手術(shù)移植。國(guó)內(nèi)外學(xué)者一直在試圖尋找更好的方法以提高脂肪移植成活率、盡量減少吸脂手術(shù)次數(shù)：如一次吸脂后將移植后多余的脂肪顆粒體外凍存，二次移植時(shí)復(fù)溫后再注射；在移植組織中添加PRP、SV

2、F等不同成分；選擇合適的純化方式及抽吸管徑、負(fù)壓等等。各類研究都在進(jìn)行，關(guān)于吸脂尚無(wú)一套統(tǒng)一的操作規(guī)范，本研究選擇脂肪組織移植供區(qū)、脂肪組織凍存液配比兩個(gè)因素對(duì)脂肪組織活性的影響進(jìn)行實(shí)驗(yàn)研究。
　　目的：
　　探索不同配比凍存液對(duì)不同部位凍存脂肪組織活性的影響，以優(yōu)化脂肪組織凍存液比例并為臨床脂肪移植供區(qū)選擇提供理論依據(jù)。
　　方法：
　　1.常規(guī)收集45例吸脂患者大腿內(nèi)、外側(cè)及腹部的顆粒脂肪。將每例標(biāo)本平均分為

3、兩份分別存入A、B兩種比例的凍存液中，于–80℃的深低溫冰箱中凍存6個(gè)月。其中A組凍存液配比為：60%小牛血清、15%二甲基亞砜（DMSO）、25%高糖培養(yǎng)基(DMEM)。B組為：30%小牛血清、15%二甲基亞砜、55%高糖培養(yǎng)基。
　　2.6個(gè)月后將標(biāo)本復(fù)蘇，用HE染色觀察組織形態(tài)，計(jì)算完整細(xì)胞比率；臺(tái)盼藍(lán)染色計(jì)算死亡細(xì)胞比例；肌酸激酶實(shí)驗(yàn)測(cè)定標(biāo)本的細(xì)胞破壞率；免疫組化CD105檢測(cè)脂肪干細(xì)胞形態(tài)及數(shù)量。
　　3.不同凍存

4、液儲(chǔ)存的脂肪顆粒復(fù)溫后，每個(gè)注射點(diǎn)取0.2ml顆粒脂肪移植于裸鼠背部皮下，術(shù)后4周處死裸鼠，取出移植脂肪組織，進(jìn)行稱重、測(cè)量體積、HE染色，透射電鏡觀察細(xì)胞形態(tài)。
　　結(jié)果：
　　HE染色：大腿內(nèi)側(cè)A組脂肪細(xì)胞完整率為78.3±2.03%，B組為66.4±3.23%；大腿外側(cè)A組脂肪細(xì)胞完整率為70.5±4.53%，B組為55.4±6.03%；腹部A組脂肪細(xì)胞完整率為65.1±4.63%，B組為51.9±5.08%。每個(gè)部位

5、的A、B兩組之間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），每組凍存液中大腿內(nèi)側(cè)與其余兩個(gè)部位間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。臺(tái)盼藍(lán)染色示A組凍存液條件下的脂肪細(xì)胞拒染率較B組高，同一組內(nèi)大腿內(nèi)側(cè)脂肪細(xì)胞拒染率較高，肌酸激酶結(jié)果與臺(tái)盼藍(lán)一致，以A組（60%小牛血清、15%DMSO、25%DMEM）長(zhǎng)期凍存的脂肪活性較高。來(lái)源于大腿外側(cè)、大腿內(nèi)側(cè)及腹部的脂肪標(biāo)本中，其中大腿內(nèi)側(cè)的活性較高，有利于脂肪移植的成活。
　　結(jié)論：
　　A組凍存液長(zhǎng)期凍存脂