細胞凍存的常規(guī)程序為

1、細胞凍存的常規(guī)程序為：1、配置含10%15%（常見為10%）的DMSO或甘油，含10%20%血清的凍存培養(yǎng)液；一般來講血清含量可以在10%90%之間調(diào)整，凍存液中加入血清一方面可以為細胞提供營養(yǎng)，另一方面可以在細胞凍存過程中提供非滲透性保護物質(zhì)，如蔗糖，白蛋白等從而更好地保護細胞。有人親測10%血清凍存細胞，結(jié)果證明是可以的，但高血清比例的凍存液更有助于提高細胞活力，此外嬌貴的細胞可以適當(dāng)提高凍存液中血清的比例以保證獲得更高的存活率及活

2、力。我們用的凍存液配方含10%的DMSO，40%的血清及50%的完全培養(yǎng)基，復(fù)蘇細胞后細胞狀態(tài)良好。，其他狀態(tài)的細胞也可凍存，但是復(fù)蘇時存活率會大大降低。3、用配好的凍存液重懸細胞，并調(diào)節(jié)細胞密度至5106ml1107，轉(zhuǎn)移至凍存管中；具體凍存密度因細胞不同而異，高密度或者低密度對細胞成活率都有一定的影響。此階段細胞最好放于冰上或4℃，盡量減少細胞的常溫代謝活動。4、細胞凍存：常見的方法主要有兩大類，一類為傳統(tǒng)方法，另一類為程序降溫；4

3、.1、傳統(tǒng)方法：凍存管置于4℃10min→20℃30min→80℃1618小時（或過夜）→轉(zhuǎn)移至液氮長期儲存。細胞置于4℃及20℃的時間不必太長，且從4℃轉(zhuǎn)移至20℃時，最好顛倒混勻下細胞，防止細胞大量沉降堆積至管底，影響細胞復(fù)蘇。4.2、程序降溫：將細胞轉(zhuǎn)移至細胞漸凍盒后放于80℃冰箱過夜或置于漸凍儀中以12℃min的降溫速率將至100℃后，再將細胞轉(zhuǎn)移至液氮長期保存；此過程的核心就是：緩降。因此，有人在凍存管外面包裹一團拳頭大小的棉

4、花，將細胞轉(zhuǎn)移至80℃冰箱過夜后，次日直接轉(zhuǎn)移到液氮，這種簡易的做法也是可行的。還有將80℃冰箱過夜后，又增加了一步將細胞懸掛于液氮液面上一段時間，再轉(zhuǎn)移至液氮，這種做法也可以一定程度上提高細胞的存活率。細胞復(fù)蘇的常規(guī)程序為：1、快速解凍，液氮中取出凍存細胞后，迅速放入37℃水浴中，輕輕搖動細胞，待其全部融化；為使凍存管快速解凍，此過程中水浴溫度可以也調(diào)整至40℃，邊晃動邊觀察，待凍存管中殘留有小塊冰時，停止即可，此時凍存管中細胞仍維持