不同濃度利福噴丁對兔脂肪干細(xì)胞增殖活性的影響.pdf

1、目的：探討在體外條件下不同濃度的利福噴丁溶液對兔脂肪干細(xì)胞增殖活性的影響。
　　方法：本試驗(yàn)取健康新西蘭大白兔(雌雄不限)，體重2.5-3.0kg，由新疆醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動物中心提供。用3％戊巴比妥鈉(1 ml/kg)或速眠新(0.3 ml/kg)麻醉后，8％硫化鈉水溶液術(shù)區(qū)脫毛備皮，消毒，取肩胛間區(qū)皮下脂肪，無菌切取皮下脂肪。放入裝有10ml PBS的培養(yǎng)皿中，帶回實(shí)驗(yàn)室。用I型膠原酶將細(xì)胞消化后，接種在DMEM生長液中進(jìn)行培養(yǎng)。在

2、倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞生長態(tài)勢以及形狀。待細(xì)胞增殖到一定程度時(shí)進(jìn)行傳代，取第三代細(xì)胞接種后加入成骨誘導(dǎo)劑誘導(dǎo)成骨，于成骨誘導(dǎo)第17天鏡下觀察有鈣結(jié)節(jié)形成，茜素紅染色結(jié)果陽性，證實(shí)所取細(xì)胞為兔脂肪干細(xì)胞，然后再取第三代兔脂肪干細(xì)胞分別設(shè)3組不同利福噴丁濃度(根據(jù)每組利福噴丁濃度不同，分為10μg/ml組、20μg/ml組、40μg/ml組)及空白對照組進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)，采用CCK-8比色法進(jìn)行增殖分化活性比較。用堿性磷酸酶及礦化結(jié)節(jié)染色鑒定成骨

3、細(xì)胞分化能力。
　　結(jié)果：堿性磷酸酶及礦化結(jié)節(jié)染色均為陽性。與空白對照組相比：利福噴丁溶液濃度為10μg/ml、20μg/ml、40μg/ml時(shí)細(xì)胞增殖活性在統(tǒng)計(jì)學(xué)上無差異(P＞0.05)；在顯微鏡下可觀察到利福噴丁溶液濃度為40μg/ml時(shí)兔脂肪干細(xì)胞形態(tài)發(fā)生明顯變化。
　　結(jié)論：從兔脂肪組織中分離、培養(yǎng)出的脂肪干細(xì)胞(ADSCs)在具有在體外誘導(dǎo)成為成骨細(xì)胞(OB)的分化潛能。利福噴丁溶液濃度為10μg/ml、20μg/