不同濃度羅哌卡因?qū)χ靖杉?xì)胞生長增殖與成脂分化的影響.pdf

1、1目的
　　研究表明在實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行體外培養(yǎng)時(shí)，人脂肪干細(xì)胞（adipose-derived stem cells,ADSCs）與骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞（bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs）有類似的生物學(xué)特性，即同樣具有強(qiáng)大的自體復(fù)制、跨胚層或跨系分化的能力，在長期體外培養(yǎng)過程中仍然保持多向分化的能力，同時(shí)遺傳背景穩(wěn)定，移植后排異反應(yīng)較少等優(yōu)點(diǎn)，并且脂肪干細(xì)胞具有取材方便、自體來源即可滿足需要等

2、優(yōu)點(diǎn)，已成為近年來研究的熱點(diǎn)。
　　目前臨床應(yīng)用中獲取人脂肪干細(xì)胞的方法，主要是將脂肪抽吸術(shù)后得到的脂肪混合液用Ⅰ型膠原酶消化法進(jìn)行分離、培養(yǎng)，但在吸脂術(shù)腫脹麻醉液使用過程中，麻醉藥及藥物濃度對(duì)脂肪細(xì)胞及分離培養(yǎng)得到的脂肪干細(xì)胞的生物學(xué)特性是否存在負(fù)面影響，知之甚少，國內(nèi)外也少見相關(guān)研究報(bào)道。大鼠的脂肪組織來源相對(duì)豐富，同時(shí)涉及的倫理問題及試驗(yàn)項(xiàng)目限制均較少，是良好的試驗(yàn)材料。
　　本試驗(yàn)在現(xiàn)有基本成熟的人和動(dòng)物體內(nèi)提取脂肪

3、組織并由此培養(yǎng)脂肪干細(xì)胞的操作基礎(chǔ)上，在大鼠身上提取脂肪組織進(jìn)而培養(yǎng)脂肪干細(xì)胞，并探尋不同濃度羅哌卡因?qū)Υ笫笾靖杉?xì)胞的增殖能力及成脂化的影響，對(duì)脂肪干細(xì)胞獲取過程中麻醉方案的最佳方式提供基礎(chǔ)研究依據(jù)，為臨床上高效能獲取脂肪干細(xì)胞，減少細(xì)胞損耗，提高脂肪干細(xì)胞的利用率，并利用其移植修復(fù)皮膚軟組織缺損和在整形外科其他方面的應(yīng)用提供理論依據(jù)。
　　2材料與方法
　　2.1設(shè)計(jì)：細(xì)胞學(xué)體外觀察
　　2.2材料：來源于4周齡大

4、鼠雙側(cè)腹股溝脂肪組織
　　2.3試驗(yàn)方法：脂肪干細(xì)胞的分離培養(yǎng)→麻醉腫脹液干預(yù)→CCK-8試劑盒檢測脂肪干細(xì)胞增殖能力→成脂能力檢測
　　2.4觀察指標(biāo)
　?、俅笫笾靖杉?xì)胞形態(tài)學(xué)特征
　?、谥靖杉?xì)胞的增殖能力
　?、奂?xì)胞成脂分化率
　　結(jié)果
　　原代培養(yǎng)的細(xì)胞呈較大的類球形單個(gè)核細(xì)胞，消化傳代后，細(xì)胞生長速度明顯較原代細(xì)胞增快，2~3天即可覆蓋約85％以上。CCK-8實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，25μmol/

5、L、50μmol/L、100μmol/L的羅哌卡因處理脂肪干細(xì)胞24h,48h,72h后吸光度值明顯下降，與對(duì)照組相比，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。實(shí)驗(yàn)說明羅哌卡因處理可顯著降低脂肪干細(xì)胞的增殖能力，在24h時(shí)，濃度越高，抑制干細(xì)胞增值能力越強(qiáng)，在48h和72h，濃度高低與抑制作用無明顯差別。
　　對(duì)照組脂肪干細(xì)胞成脂分化比例為（44.61±4.43）%，25μmol/L羅哌卡因處理組為（46.30±3.25）%，50μmol/L羅哌卡因處

6、理組為（49.46±2.34）%，100μmol/L羅哌卡因處理組為（50.07±5.29）%，實(shí)驗(yàn)說明低濃度羅哌卡因處理后對(duì)脂肪干細(xì)胞的成脂化能力無明顯影響，高濃度羅哌卡因處理后對(duì)脂肪干細(xì)胞的成脂化能力存在影響。當(dāng)濃度上升至一定數(shù)值時(shí)，脂肪干細(xì)胞成脂化率不隨濃度增加而改變，但仍需進(jìn)一步試驗(yàn)證實(shí)。
　　結(jié)論
　　羅哌卡因處理可顯著降低脂肪干細(xì)胞的增殖能力，在24h時(shí)，濃度越高，抑制干細(xì)胞增值能力越強(qiáng)，在48h和72h，濃度高