不同保存條件對(duì)人脂肪干細(xì)胞條件培養(yǎng)基中PDGF-AA濃度的影響.pdf

1、前言:脂肪干細(xì)胞(adipose-derived stem cells，ADSCs)具有顯著分泌功能，其可分泌多種生物活性因子[2]，其中血小板衍化生長因子AA(Platelet-derived growth factor-AA，PDGF-AA)能夠促進(jìn)骨骼發(fā)育和骨折愈合[11]，加速傷口閉合[12]，促進(jìn)髓鞘再生[13]，在毛發(fā)生長周期中發(fā)揮重要作用[14]。不同保存條件及時(shí)間，將導(dǎo)致ADSC-CM中有效成分損失，造成實(shí)驗(yàn)的可重復(fù)性降

2、低，應(yīng)用前景受到影響。本實(shí)驗(yàn)通過對(duì)不同保存條件下條件培養(yǎng)基中PDGF-AA濃度的檢測(cè)，明確其含量變化，尋找條件培養(yǎng)基最佳保存條件以及劃定條件培養(yǎng)基有效使用時(shí)間，減少因條件培養(yǎng)基保存溫度及時(shí)間不同導(dǎo)致的有效成分含量差距過大引起的相關(guān)實(shí)驗(yàn)可重復(fù)性及可對(duì)比性下降。
　　材料和方法:1.ADSCs分離提取、原代及傳代培養(yǎng)。2.ADSCs的體外多向誘導(dǎo)分化。3.ADSC-CM提取及保存。4.實(shí)驗(yàn)分組:分為4℃保存組，-20℃保存組和-80℃

3、保存組。5.檢測(cè)各樣品有效成分濃度。6.統(tǒng)計(jì)學(xué)處理:本實(shí)驗(yàn)使用GraphPad Prism6軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。
　　結(jié)果:1.提取的原代ADSCs12h后部分貼壁生長，24h后大部分ADSCs均已貼壁，鏡下形態(tài)呈圓形，橢圓形或多邊形。第3代ADSCs呈均一的長梭形。2.ADSCs在經(jīng)過成骨誘導(dǎo)3周后經(jīng)茜素紅染色，鏡下表現(xiàn)為細(xì)小橙紅色顆粒聚集成團(tuán)，為染色的鈣化結(jié)節(jié)。ADSC在經(jīng)成脂誘導(dǎo)2周后經(jīng)油紅O染色，鏡下表現(xiàn)為細(xì)胞胞漿內(nèi)布滿大

4、小不一亮紅色顆粒，為染色的脂肪小滴。3.ADSC-CM中PDGF-AA含量變化:2周之前，4℃條件下保存的ADSC-CM中PDGF-AA含量最高，從第3周開始，-20℃及-80℃條件下保存的ADSC-CM中PDGF-AA含量開始高于4℃條件下保存的ADSC-CM中PDGF-AA含量，從第13周開始，-80℃條件下保存的ADSC-CM中PDGF-AA含量開始高于-20℃條件下保存的ADSC-CM中PDGF-AA含量。
　　結(jié)論:1.