藥品質(zhì)量管理儀器分析

1、藥品質(zhì)量檢測技術(shù),儀器分析,,,教學(xué)目標(biāo) 1.掌握紫外分光光度法及可見分光光度法的 基本原理 2.掌握色譜法基本理論 3.了解分光光度法和色譜法在工業(yè)生產(chǎn)和科學(xué)研究 中的應(yīng)用 知識(shí)要點(diǎn) 1.吸收光譜與物質(zhì)結(jié)構(gòu)的關(guān)系和光吸收基本定律 2.色譜法基本理論 技能要點(diǎn) 1.紫外-可見分光光度計(jì)的應(yīng)用 2.GC、HPLC、TLC的基本應(yīng)用,學(xué)習(xí)目標(biāo),第一

2、節(jié) 分光光度法,一、概述二、紫外-可見分光光度法三、紅外分光光度法,一、概述,分光光度法： 測定被測物質(zhì)在特定波長處或一定波長范圍內(nèi)對光的吸收度，對物質(zhì)進(jìn)行定性、定量分析的方法稱為分光光度法。主要包括:,紫外分光光度（電子光譜）法：吸收光波長范圍200～400nm，可用于物質(zhì)的定性和定量分析。 可見分光光度（電子光譜）法：吸收光波長范圍400～760nm，主要用于有色物質(zhì)的定性和定量分析。二者合稱為紫外-可見分光光度法即

3、UV-ViS,,,紅外分光光度法（IR，分子振-轉(zhuǎn)光譜）：利用紅外吸收光譜對物質(zhì)進(jìn)行分析的方 法，吸收光波長范圍2.5—1000?m，主要用于已知結(jié)構(gòu)的有機(jī)化合物鑒別（定性）,,二、紫外-可見分光光度法,光的基本特性物質(zhì)對光的選擇性吸收吸收定律紫外吸收光譜的應(yīng)用紫外-可見分光光度計(jì),光的基本特性,光是一種電磁波，具有波粒二象性。光的波動(dòng)性可用波長?、頻率?、光速c、波數(shù)（cm-1）等參數(shù)來描述： ? ? =

4、c ； 波數(shù) = 1/ ? = ?/c 光是由光子流組成，光子的能量： E = h ? = h c / ? （Planck常數(shù)：h=6.626 × 10 -34 J × S ),,,光的波長越短（頻率越高），其能量越大。,單色光：單波長的光（由具有相同能量的光子組成）白光（太陽光）：由各種單色光組成的復(fù)合光,如果把適當(dāng)顏色的兩種光按一定強(qiáng)度比例混合，也可成為白光，這兩種顏色的

5、光稱為互補(bǔ)色光。,,,,,白光,,,,,,,,,綠500-580,橙600-650,黃580-600,紅650-780,紫400-450,藍(lán)450-480,青藍(lán)480-490,青490-500,光的互補(bǔ)色示意圖,物質(zhì)對光的選擇性吸收,,物質(zhì)的顏色是基于物質(zhì)對光有選擇性吸收的結(jié)果而物質(zhì)呈現(xiàn)的顏色則是被物質(zhì)吸收光的互補(bǔ)色。,物質(zhì)的吸收光譜曲線：,,將不同波長的光依次通過某一固定濃度和厚度的有色溶液，分別測出它們對各種波長光

6、的吸收程度，以波長為橫坐標(biāo)，以吸光度為縱坐標(biāo)作圖，畫出曲線，此曲線即稱為該物質(zhì)的光吸收曲線（或吸收光譜曲線）,吸收定律,吸光度：單色光通過溶液時(shí)被吸收的程度，用A表示。,朗伯（Lambert）和比耳（beer）分別于1760年和1852年研究了光的吸收與有色溶液按液層的厚度及溶液濃度的定量關(guān)系，奠定了分光光度分析法的理論基礎(chǔ)。,如果同時(shí)考慮溶液的濃度和液層的厚度都變化，都影響物質(zhì)對光的吸收，則上述兩個(gè)定律可合并為朗伯-比耳定律，得

7、到：A=Kbc 此式為光吸收定律的數(shù)學(xué)表達(dá)式。,式中A稱為吸光度； K是比例常數(shù)，與入射光的波長、物質(zhì)的性質(zhì)和溶液的溫度等因素有關(guān)。,,吸收系數(shù)A=Kbc中比例常數(shù)K稱為吸收系數(shù)；物理意義：單位濃度的溶液液層厚度為1 cm 時(shí)，在一定波長下測得的吸光度。在藥品檢驗(yàn)的實(shí)際工作中，通常有兩種表示方法：,質(zhì)量吸收系數(shù)a當(dāng)c的單位為g/L，b的單位為cm時(shí)，K用a表示，稱為質(zhì)量吸收系

8、數(shù)這時(shí)朗伯-比耳定律為： A＝abc。,在藥品檢驗(yàn)中經(jīng)常使用的是百分吸收系數(shù)，用（E1%1cm）表示。物理意義:當(dāng)吸光物質(zhì)溶液濃度為1%(1g/100mL) ，液層厚度為1cm時(shí)，在一定條件下的吸收度。,,摩爾吸收系數(shù)ε 當(dāng)式中濃度c的單位為mol/L，液層厚度的單位為cm時(shí)，則用另一符號(hào)ε表示，稱為摩爾吸收系數(shù)，它表示物質(zhì)的濃度為1mol/L，液層厚度為1cm時(shí)，溶液的吸光

9、度。其單位為L/mol·cm。這時(shí)朗伯-比耳定律就變?yōu)椋?A＝εbc,紫外吸收光譜的應(yīng)用,鑒別：同一物質(zhì)在相同條件下，測得的紫外-可見吸收光譜應(yīng)具有完全相同的特征。 對比吸收光譜特征參數(shù) 比較吸收度比值的一致性 對比吸收光譜的一致性雜質(zhì)檢查：藥物與雜質(zhì)的吸收光譜有明顯差別含量測定：朗伯-比耳定律 對照品比較法 吸收系數(shù)法 計(jì)

10、算分光光度法,,,,,,,紫外-可見分光光度計(jì),儀器的基本組成部件,,單色器,吸收池,檢測器,顯示,,,光源,,一般由光源、單色器、吸收池、檢測器和信號(hào)顯示器（數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)）五部分組成。,光源,單色器（分光系統(tǒng)） 包括狹縫、透鏡系統(tǒng)（準(zhǔn)直鏡）和色散元件,,,吸收池（比色皿） 玻璃—能吸收紫外光，僅適用于可見光區(qū)； 石英—不能吸收紫外光，適用于紫外和 可見

11、光區(qū)； 要求：匹配性（對光的吸收和反射應(yīng)一致） 為了消除誤差提高測量的準(zhǔn)確度，兩只比色 皿應(yīng)配套使用,,檢測器（又叫接受器、光電轉(zhuǎn)化器）,,,信號(hào)顯示器 早期使用的是檢流計(jì)、微安表、電位計(jì)、數(shù)字電壓表、自動(dòng)記錄儀等。 現(xiàn)代的分光光度計(jì)廣泛采用數(shù)字電壓表、函數(shù)記錄儀、示波器及自動(dòng)記錄型裝置和數(shù)據(jù)處理臺(tái)（稱為工作站）。,,紫外-可見分光光度計(jì)的類型

12、 單光束分光光度計(jì): 常用的有751G型、752型、721型、722型。 雙光束分光光度計(jì) ： 常用的有710型、730型、UV-210型等。 雙波長分光光度計(jì) ： 與單波長分光光度計(jì)的主要區(qū)別在于采用雙單色器。,,,,T6新世紀(jì)紫外-可見分光光度計(jì),紅外吸收產(chǎn)生的原理與條件紅外光譜法的應(yīng)用紅外光譜儀,三、

13、紅外分光光度法,紅外吸收產(chǎn)生的原理與條件 原理：當(dāng)分子中某個(gè)基團(tuán)的振動(dòng)頻率和紅外光的頻率一致時(shí)，分子就吸收紅外光的能量，從原來的基態(tài)振動(dòng)能級(jí)躍遷到能量較高的振動(dòng)能級(jí)。物質(zhì)對紅外光的吸收曲線稱為紅外吸收光譜。 根據(jù)試樣的紅外吸收光譜進(jìn)行定性、定量分析和確定分子結(jié)構(gòu)等分析的方法，稱為紅外分光光度法。,,紅外光譜產(chǎn)生的條件 紅外光的能量應(yīng)恰好能滿足振動(dòng)能級(jí)躍遷所需要的能量，當(dāng)紅外光的頻率與分子中某基團(tuán)的

14、振動(dòng)頻率相同時(shí)，紅外光的能量才能被吸收。 紅外光與物質(zhì)之間有耦合作用。分子必須有偶極矩的變化。,,★,★,紅外光譜法的應(yīng)用 定性分析研究分子結(jié)構(gòu)：如確定分子的空間構(gòu)型，求化學(xué)鍵的力常數(shù)、鍵長和鍵角及未知化合物的結(jié)構(gòu)鑒定等。,,定性分析官能團(tuán)的定性分析、已知化合物的鑒定 ①官能團(tuán)的定性分析,★,肯定法：根據(jù)紅外光譜的特征吸收峰，確認(rèn)某基團(tuán)的存在。如某化合物的IR譜，在官能團(tuán)區(qū)1740cm-1有吸收→C=O，在

15、指紋區(qū)1300cm-1~1150cm-1范圍內(nèi)有兩個(gè)強(qiáng)吸收峰→C－O，根據(jù)官能團(tuán)區(qū)及指紋區(qū)的這三個(gè)相關(guān)峰：,否定法：基于某個(gè)波數(shù)區(qū)間內(nèi)的吸收峰對某個(gè)基團(tuán)是特征的，在譜圖中若無此吸收峰出現(xiàn)，則說明此基團(tuán)在分子中不存在。,,②已知化合物的鑒定 用標(biāo)準(zhǔn)試樣對照 將試樣的譜圖與標(biāo)準(zhǔn)樣品的譜圖進(jìn)行對照。 與標(biāo)準(zhǔn)譜圖對照 在沒有純凈的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)時(shí)，可用標(biāo)準(zhǔn)譜圖比較。,★,未知物結(jié)構(gòu)分析未知

16、物結(jié)構(gòu)分析的一般步驟如下：,①了解與試樣性質(zhì)有關(guān)的其他資料了解來源元素分析的結(jié)果相對分子質(zhì)量熔點(diǎn)、沸點(diǎn)等物理性質(zhì)和有關(guān)的化學(xué)性質(zhì)由元素分析結(jié)果和相對分子質(zhì)量推算出分子式計(jì)算不飽和度：,n1－1價(jià)原子數(shù)目n3－3價(jià)原子數(shù)目n4－4價(jià)原子數(shù)目,★☆★規(guī)定：雙鍵(C=C、C=O)、飽和環(huán)狀結(jié)構(gòu)：Ω=1；叁鍵(C≡C)：Ω=2；苯環(huán)： Ω=4。,分子結(jié)構(gòu)式中達(dá)到飽和時(shí)所缺一價(jià)元素的對數(shù)，每缺兩個(gè)一價(jià)元素時(shí)，不飽和度為一個(gè)單位,②

17、試樣的制備和紅外光譜的制作 被分析的試樣應(yīng)該是純物質(zhì) 純物質(zhì)可以通過對試祥進(jìn)行分離和精制的方法(如分餾、萃取、重結(jié)晶、層析等)得到 根據(jù)試樣的性質(zhì)，按照試驗(yàn)條件制作紅外光譜圖,③譜圖的解析 首先觀察官能團(tuán)區(qū)，解析第一強(qiáng)吸收峰屬于何種基團(tuán)的特征吸收峰。如，羰基(C=O)在1820cm-1~1600cm-1有強(qiáng)吸收峰，其中：,找出該基團(tuán)的全部或主要相關(guān)蜂，包括該基團(tuán)在指紋區(qū)的吸收峰，進(jìn)一步確認(rèn)該基團(tuán)的存在。然后

18、解析第二強(qiáng)峰及其相關(guān)峰。,確定分子中各個(gè)基團(tuán)或化學(xué)鍵所連接的原子或原子團(tuán)，以及與其他基團(tuán)的結(jié)合方式，并結(jié)合相對分子質(zhì)量、不飽和度以及其他儀器分析結(jié)果等有關(guān)資料，推測分子的結(jié)構(gòu)。,④與標(biāo)準(zhǔn)譜圖進(jìn)行對照 在相同的實(shí)驗(yàn)條件下操作，將得到的紅外光譜圖與標(biāo)準(zhǔn)譜圖進(jìn)行比較，若兩張譜圖吸收峰的位置和形狀完全相同，峰的相對強(qiáng)度一樣，可以認(rèn)為樣品與該種已知物是同一物質(zhì)。,例 某未知物分子式為C8H8O，其IR譜如圖所示，試推測未知物的分子

19、結(jié)構(gòu)。解：(1)根據(jù)分子式計(jì)算不飽和度： Ω＝1+8+(0-8)/2＝5,苯環(huán)及CH3的C—H伸縮振動(dòng),苯環(huán)的骨架振動(dòng),單取代苯,C=O的伸縮振動(dòng)。因分子式中只有一個(gè)氧原子，不可能是酸或酯，只可能是酮，而且分子中有苯環(huán)，很可能是芳香酮。,CH3的C—H對稱彎曲振動(dòng)δs(CH),CH3的C—H反對稱彎曲振動(dòng)δas(CH),(2)圖譜解析,綜上所述，該化合物中有一個(gè)單取代的苯環(huán)、一個(gè)羰基(估計(jì)是芳香酮羰基)、一個(gè)甲基，根

20、據(jù)分子式，推測未知物的結(jié)構(gòu)式可能是:,總結(jié)：,3000cm-1 、1600cm-1~1500cm-1苯環(huán)的骨架振動(dòng)、指紋區(qū)760cm-1，692cm-1單取代苯,1681cm-1強(qiáng)峰為C=O的伸縮振動(dòng),1363cm-1 CH3的C—H1430cm-1CH3的C—H,定量分析 紅外光譜定量分析是通過對特征吸收譜帶強(qiáng)度的測量來求出組份含量。其理論依據(jù)是朗伯-比耳定律。 由于紅外光譜的譜帶較多，選擇的余地大，

21、所以能方便地對單一組份和多組份進(jìn)行定量分析。 此外，該法不受樣品狀態(tài)的限制，能定量測定氣體、液體和固體樣品。因此，紅外光譜定量分析應(yīng)用廣泛。但紅外光譜法定量靈敏度較低，尚不適用于微量組份的測定。,,紅外光譜儀,色散型IR譜儀：利用單色器作為色散元件傅立葉IR譜儀：利用光的干涉作用進(jìn)行測定，沒有色散元件,,,第二節(jié) 色譜法,一、色譜法概述二、薄層色譜法三、氣相色譜法四、高效液相色譜法,一、色譜法概述,色譜法的來源

22、 色譜法(chromatography)早在1903年由俄國植物學(xué)家茨維特最先發(fā)明并定義，他在研究植物葉的色素成分時(shí)，將植物葉子的萃取物倒入填有碳酸鈣的直立玻璃管內(nèi)，然后加入石油醚使其自由流下，結(jié)果色素中各組分互相分離形成各種不同顏色的譜帶。他稱之為色譜。這種方法因此得名為色譜法，又稱層析法。以后此法逐漸應(yīng)用于無色物質(zhì)的分離,,色譜分離過程,色譜分離的原理,,當(dāng)流動(dòng)相中攜帶的混合物流經(jīng)固定相時(shí)，其與固定相發(fā)生相互作用。由于

23、混合物中各組分在性質(zhì)和結(jié)構(gòu)上的差異，與固定相之間產(chǎn)生的作用力的大小、強(qiáng)弱不同，隨著流動(dòng)相的移動(dòng)，混合物在兩相間經(jīng)過反復(fù)多次的分配平衡，使得各組分被固定相保留的時(shí)間不同，從而按一定次序由固定相中流出。與適當(dāng)?shù)闹髾z測方法結(jié)合，實(shí)現(xiàn)混合物中各組分的分離與檢測。,兩相及兩相的相對運(yùn)動(dòng)構(gòu)成了色譜法的基礎(chǔ),色譜法分類,,二、薄層色譜法(TLC)(thin layer chromatography),TLC的概念、分類、特點(diǎn),,概念： TLC法系將

24、供試品溶液點(diǎn)于薄層板上，在展開容器內(nèi)用展開劑展開，使供試品所含成分分離，所得色譜圖與適宜的對照物按同法所得的色譜圖對比，并可用薄層掃描儀進(jìn)行掃描，用于鑒別、檢查或含量測定。,分類：,吸附薄層色譜：固定相為吸附劑，適于異構(gòu)體的分離 原理：產(chǎn)生差速遷移而得到分離 分配薄層色譜：固定相為液體，適于同系物的分離 原理：利用樣品中各組分在固定相與流動(dòng)相之間的分配系數(shù)差別而實(shí)現(xiàn)分離 膠束薄層色譜：以表面活性劑膠束溶液為展開

25、劑的薄層色譜 原理：被分離組分在水、膠束和固定相三者之間形成分配平衡,特點(diǎn),方法簡便易行，容易掌握； 不需考慮雜質(zhì)的污染問題，對樣品凈化程度的要求低； 在一塊薄層板上可以同時(shí)展開多個(gè)樣品，分析時(shí)間短； 展開后的薄層可以用不同的掃描條件反復(fù)掃描比較，只 要所測的斑點(diǎn)穩(wěn)定，還可存放到需要時(shí)再測定； 可選用各種不同顯色劑噴霧顯色，有助于定性鑒別。,載板： 具有一定機(jī)械強(qiáng)度、化學(xué)惰性、耐一

26、定溫度、表面平整、厚度均勻，價(jià)格合理，常用為玻璃板。 玻璃板的常用規(guī)格：5×20cm、10×20cm、20×20cm，要求光滑、平整、洗凈后不附水珠、干燥。,TLC的基本材料,,固定相或載體： 硅膠：常用極性吸附劑，具表面活性中心，略帶酸性 氧化鋁：常用極性吸附劑，具表面活性中心，略帶堿性 硅藻土：中性吸附劑 纖維素：液-液分配色譜擔(dān)體（水為固定液），具一定粘性

27、 聚酰胺：特殊有機(jī)薄層材料,硅膠G(含粘合劑煅石膏)，GF254(含254nm熒光劑)，硅膠H(不含粘合劑)，硅膠HF254,點(diǎn)樣器： 常用微升毛細(xì)管或手動(dòng)、半自動(dòng)、全自動(dòng)點(diǎn)樣器。,展開容器：上行展開可用適合薄層板大小的專用平底或雙槽展開缸，展開時(shí)須能密閉；水平展開用專用的水平展開缸。,顯色裝置： 噴霧顯色用玻璃噴霧瓶或?qū)Ｓ脟婌F器； 浸漬顯色用專用玻璃器械或用適宜的展開缸代用； 蒸氣熏蒸顯色用

28、雙槽展開缸或適宜大小的干燥器代替。 檢視裝置： 為裝有可見光、254nm及365nm紫外光源及相應(yīng)的濾光片的暗箱，可附加攝像設(shè)備供拍攝圖像用。,TLC的基本操作,,除另有規(guī)定外，將1份固定相和3份水（或加有黏合劑的水溶液）在研缽中按同一方向研磨混合，去除表面的氣泡后，倒入涂布器中，在玻板上平穩(wěn)地移動(dòng)涂布器進(jìn)行涂布（厚度為0.2~0.3mm），取下涂好薄層的玻板，置水平臺(tái)上于室溫下晾干后，在110℃烘30分

29、鐘，即置有干燥劑的干燥箱中備用。使用前檢查其均勻度，在反射光及透視光下檢視，表面應(yīng)均勻、平整、光滑、無麻點(diǎn)、無氣泡、無破損及污染。,制備,點(diǎn)樣： 一般為圓點(diǎn)狀或窄細(xì)的條帶狀，點(diǎn)樣基線距底邊10~15mm，圓點(diǎn)狀直徑一般不大于3mm，條帶狀寬度一般為5~10mm；點(diǎn)間距一般不少于8mm。,展開： 準(zhǔn)備：在展開缸中加入適量的展開劑，密閉保持15~30分鐘。 展開方式：上行、下行、近水平、雙向展開等，多采

30、用上行展開。,,,,（b）直立式展開1－色譜缸 2－薄層板 3－展開劑 4－展開劑蒸氣,（a）傾斜上行法展開1－色譜缸 2－薄層板 3－展開,展開：將點(diǎn)好供試品的薄層板放入展開缸中，浸入展開劑的深度為距原點(diǎn)5mm為宜，密閉。一般展開8~15cm。溶劑前沿達(dá)到規(guī)定 展距，取出薄層板，晾干，待檢測。,顯色與檢視： 對有色物質(zhì)，展開后可直接檢視； 對無色物質(zhì)可在紫外燈(254nm或365nm)下，觀察有無暗斑

31、或熒光斑點(diǎn)，記錄其顏色、位置及強(qiáng)弱。適用于有熒光的物質(zhì)或少數(shù)有紫外吸收的物質(zhì)； 熒光薄層板(如硅膠GF254板)檢測，在254nm紫外光燈下觀察熒光板上的熒光淬滅物質(zhì)形成的色譜； 既無色，又無紫外吸收的物質(zhì)可用噴霧法或浸漬法以適宜的顯色劑顯色，或加熱顯色，在日光下檢視。,定性鑒別：利用Rf值進(jìn)行定性鑒別定量分析,TLC的應(yīng)用,,原點(diǎn)到組分斑點(diǎn)質(zhì)量中心的距離Rf值 =

32、 原點(diǎn)到溶劑前沿的距離,,三、氣相色譜法(GC) (gas chromatography ),GC的概念、分類、特點(diǎn)及應(yīng)用對象,,分類,,,,氣相色譜,氣液分配色譜,填充柱氣相色譜,毛細(xì)管柱氣相色譜,概念,GC法系采用氣體為流動(dòng)相（載氣）流經(jīng)裝有填充劑的色譜柱進(jìn)行分離測定的色譜方法。,特點(diǎn),應(yīng)用范圍廣,應(yīng)用對象,具有揮發(fā)性或在一定溫度下能夠汽化的物質(zhì),不揮發(fā)或熱不穩(wěn)定的物質(zhì)可衍生化后分析,某些大分子物質(zhì)和高聚物可用

33、裂解色譜法分析,分離效率高，分析速度快,樣品用量少， 靈敏度高,選擇性好,氣相色譜儀,,國產(chǎn)氣相色譜儀,氣相色譜儀的構(gòu)成,氣路系統(tǒng),進(jìn)樣系統(tǒng),分離系統(tǒng),檢測系統(tǒng),溫控系統(tǒng),,,,氣路系統(tǒng),作用：獲得純凈、流速穩(wěn)定的載氣。包括氣源、壓力計(jì)、流量計(jì)及氣體凈化裝置等。 常用的載氣：H2、He、N2、Ar 載氣的要求：化學(xué)惰性，不與有關(guān)物質(zhì)反應(yīng)。載氣的選擇除了要求考慮對柱效的影響外，還要與分析對象和所用的檢測器相匹配。 載氣的來源：,氣

34、體鋼瓶和減壓閥：壓力表多為兩級(jí)壓力指示 氣體發(fā)生器：氮?dú)?、氫氣、空氣及一體機(jī),,,進(jìn)樣系統(tǒng),構(gòu)成：進(jìn)樣器、進(jìn)樣口、氣化室等,要求： 進(jìn)樣量或體積要適宜、準(zhǔn)確； 采用常規(guī)色譜柱分離，進(jìn)樣體積幾至幾十微升； 對毛細(xì)管柱分離，體積約為10-2~10-3μL； 體積過大或進(jìn)樣過慢，將導(dǎo)致分離變差（拖尾）； 進(jìn)樣針最大容量與進(jìn)樣量要匹配。,汽化室要求：體積?。粺崛萘看?；對樣品無催化作用,包括：填充柱和毛細(xì)管柱（或開管柱）,分離系統(tǒng),填

35、充柱：多為U形或螺旋形；內(nèi)徑2~6mm；長1~3m；內(nèi)填固定相。,毛細(xì)管柱：分為涂壁、多孔層和涂載體開管柱，內(nèi)徑0.1~0.5mm，長達(dá)幾十至100m，通常彎成直徑10~30cm的螺旋狀；其特點(diǎn)為滲透性好、傳質(zhì)快，分離效率高（n可達(dá)106）、分析速度快、樣品量小。,作用對象：氣化室、柱箱、檢測器 控溫方式：恒溫和程序升溫,溫控系統(tǒng),作用：將經(jīng)色譜柱分離后順序流出的化學(xué)組分的信息轉(zhuǎn)變?yōu)楸阌诩o(jì)錄的電信號(hào)，然后對被分離物質(zhì)的組成和

36、含量進(jìn)行鑒定和測量。,常用的檢測器：氫火焰離子化檢測器(Flame ionized detector，F(xiàn)ID)熱導(dǎo)檢測器(Thermal conductivity detector，TCD)電子捕獲檢測器(Electron capture detector ，ECD)質(zhì)譜檢測器(MSD)即氣相—質(zhì)譜聯(lián)用儀(GC-MS),檢測系統(tǒng),主要用于可在H2-Air火焰中燃燒的有機(jī)化合物（如烴類物質(zhì)）的檢測。,通用型檢測器,主要對含

37、有較大電負(fù)性原子的化合物響應(yīng)。它特別適合于環(huán)境樣品中鹵代農(nóng)藥和多氯聯(lián)苯等微量污染物的分析。,質(zhì)譜是唯一可以給出分子量, 確定分子式的方法, 而分子式的確定對化合物的結(jié)構(gòu)鑒定 是至關(guān)重要的,四、高效液相液相色譜法(HPLC) (high performance liquid chromatography ),HPLC的概念、分類、特點(diǎn)及應(yīng)用,HPLC系采用高壓輸液泵將規(guī)定的流動(dòng)相泵入裝有填充劑的色譜柱進(jìn)行分離測定的色譜方法。,根據(jù)分離

38、機(jī)制不同，分為液固吸附色譜、液液分配色譜、化學(xué)鍵合色譜、離子交換色譜、分 子排阻色譜等,概念,分類,,利用保留值作為定性參數(shù)；利用在樣品中加入對照品，通過峰值增高來確認(rèn)；利用LC-MS聯(lián)用儀，通過被分離物的質(zhì)譜圖與譜庫的譜圖對比來定性；利用二極管陣列檢測器給出UV光譜與對照品相比較，結(jié)合保留時(shí)間來確認(rèn)。,應(yīng)用,高速、高效、高靈敏度、應(yīng)用廣泛（GC分析只占有機(jī) 物的20%，HPLC分析可占80%）,特點(diǎn),高效液相色譜儀,,輸液系

39、統(tǒng),進(jìn)樣系統(tǒng),分離系統(tǒng),檢測系統(tǒng),,,,其工作過程如下：首先高壓泵將貯液器中流動(dòng)相溶劑經(jīng)過進(jìn)樣器送入色譜柱，然后從控制器的出口流出。當(dāng)注入欲分離樣品時(shí)，流經(jīng)進(jìn)樣器貯液器的流動(dòng)相將樣品同時(shí)帶入色譜柱進(jìn)行分離，然后依先后順序進(jìn)入檢測器，記錄儀將檢測器送出的信號(hào)記錄下來，由此得到液相色譜圖。,輸液系統(tǒng),高壓輸液泵：壓力：150～350×105 Pa為了獲得高柱效而使用粒度很小的固定相（<10μm），液體的流

40、動(dòng)相高速通過時(shí)，將產(chǎn)生很高的壓力，因此高壓、高速是高效液相色譜的特點(diǎn)之一。,常用的輸液泵分為恒流泵和恒壓泵兩種。,六通閥進(jìn)樣,進(jìn)樣系統(tǒng),分離系統(tǒng),分離系統(tǒng)的主要元件是色譜柱，它是色譜分離過程中存放固定相的場所 。,常用檢測器：,紫外-可見檢測器(Ultraviolet and Visible Detector, UVD)熒光檢測器(Fluorescence Detector, DFD)折光指數(shù)檢測器(Refractive Ind

41、ex Detector, RID) 蒸發(fā)光散射檢測器(Evaporative Light Scattering Detector, ELSD)質(zhì)譜檢測器(Mass Detector, MSD),檢測系統(tǒng),應(yīng)用最廣，對大部分有機(jī)化合物有響應(yīng),主要用于氨基酸、多環(huán)芳烴等生物制品及環(huán)境監(jiān)測及體內(nèi)藥物分析,適合于無紫外吸收、無電活性和不發(fā)熒光的樣品的檢測,通用型檢測器,固定相與裝柱方法的選擇： 選粒徑小的、分布均勻的球形固定相