免疫血清學實驗

1、雙向免疫擴散試驗 直接凝集試驗,抗原（antigen, Ag）: 能夠刺激機體產(chǎn)生抗體和致敏淋巴細胞，并能與之特異性結(jié)合的物質(zhì)。,抗體(antibody, Ab)： B細胞識別抗原后增殖分化為漿細胞所產(chǎn)生的可特異性結(jié)合抗原的一組糖蛋白。,抗原-抗體反應的基本檢測方法,凝集反應(agglutination):顆粒性抗原與抗體的反應。,沉淀反應(precipitation):可溶性抗原與抗體的反應。,補體參與的反應,免疫標記

2、技術（immunolabelling technique）:用示蹤物質(zhì)標記抗原或抗體，進行抗原-抗體反應的檢測。,一、沉淀反應-雙向免疫擴散試驗,原理 用半固體瓊脂凝膠作為介質(zhì)，可溶性抗原、抗體在其中能自由擴散。將可溶性抗原和抗體分別加入瓊脂板上相對應的孔中，兩者各自向四周擴散，如果抗原和抗體相對應，則在兩者比例適當處形成白色沉淀線。,主要材料,器材：載玻片、EP管、微量加樣器、槍頭、打孔器、 注射器針頭試

3、劑：生理鹽水、瓊脂粉、 抗原（正常小鼠IgG）、 抗體（兔抗小鼠IgG血清）,配制1%瓊脂：用生理鹽水配制，加熱溶解制板：趁熱將3.5ml融化瓊脂水平鋪在玻片上，室溫下冷卻凝固打孔：用打孔器按圖示打孔稀釋抗體：取5支EP管，將抗體倍比稀釋加樣：周圍孔加入不同稀釋度的抗體，中間孔加入抗原瓊脂板放入濕盒內(nèi)，置4℃，24-48小時后觀察結(jié)果。,實驗步驟,Ag,1,2,3,4,5,control,6,,

4、倍比稀釋法,1:4,1:8,1:16,1:64,,100µL,100µL,100µL,100µL,100µL,100µL,100µL,,樣品管,,第一管,第二管,第四管,結(jié)果判斷,,,,,,,,應用,測定抗體的效價用特異性抗體檢測抗原檢查抗原和免疫血清的特異性、純度或濃度，比較抗原之間的異同點,兩個樣品為同一抗原,存在三種不同的抗原,兩個樣品部分相同,二、凝集反應

5、,原理 顆粒性抗原(完整的病原微生物或紅細胞等)與相應抗體特異性結(jié)合，在有電解質(zhì)存在的條件下，形成肉眼可見的凝集團塊?；绢愋?直接凝集反應、間接凝集反應、凝集抑制反應等。,直接凝集實驗（ABO血型鑒定）,器材：酒精棉球、滅菌干棉球、微量加樣器、 滅菌槍頭、玻片、一次性采血針試劑 抗A試劑（藍色）、抗B試劑（黃色）,主要材料,實驗步驟,干凈玻片上分別滴加抗A、抗B試劑各一滴酒精棉球消毒無