漳州水仙隨體單染色體文庫的構(gòu)建及其AFLP標(biāo)記的研究.pdf

1、中國水仙(Narcissus tazetta var.chinensis)為石蒜科水仙屬多年生球根花卉，是法國水仙(Narcissus tazetta)的一個(gè)變種。中國是世界重要的水仙生產(chǎn)及出口國之一，久負(fù)盛名的中國水仙不僅是中國著名的十大傳統(tǒng)名花之一，更是中國傳統(tǒng)出口花卉中的佼佼者[12]。但近年來，我國在水仙生產(chǎn)中存在的品種單一、病蟲害增多，品質(zhì)下降等問題日益顯現(xiàn)，因此需要進(jìn)行水仙育種基礎(chǔ)性研究，為培育新品種打下堅(jiān)實(shí)的基礎(chǔ)。一直以來

2、，對(duì)漳州水仙的染色體起源問題都不是很明確，而且研究大多是局限在細(xì)胞學(xué)水平，分子水平研究甚少，作者認(rèn)為對(duì)漳州水仙有代表性的第7號(hào)染色體的3條隨體染色體的研究，將對(duì)探索漳州水仙的染色體起源問題及指導(dǎo)水仙新品種的選育有較大的意義。 本研究以漳州水仙為材料，探索了漳州水仙隨體染色體數(shù)，通過染色體微分離、微克隆技術(shù)建立了兩條隨體染色體(第7號(hào)染色體)單染色體DNA文庫，并且把該技術(shù)與單酶切AFLP分子標(biāo)記技術(shù)相結(jié)合，建立了兩條染色體分子標(biāo)

3、記。主要內(nèi)容及結(jié)論如下： 1.漳州水仙的隨體染色體 漳州水仙為三倍體，2n=3x-30，其中第7號(hào)染色體的3條染色體均為隨體染色體，但3條隨體染色體形態(tài)不同。當(dāng)染色體預(yù)處理時(shí)間過長(zhǎng)時(shí)，其中一條隨體收縮過短，光學(xué)顯微鏡下難以辨認(rèn)。 2.漳州水仙隨體染色體DNA文庫的構(gòu)建 用玻璃針顯微分離出漳州水仙兩條隨體染色體，經(jīng)LA-PCR擴(kuò)增得到200～2500bp的DNA片段；Southern雜交表明，擴(kuò)增片段與漳州

4、水仙基因組DNA之間有同源性，從而證明漳州水仙帶隨體染色體DNA已經(jīng)被成功擴(kuò)增；將擴(kuò)增產(chǎn)物克隆到PMD18-T載體中，約獲得5.0×105個(gè)和3.7×105個(gè)克隆，經(jīng)EcoRⅠ、HindⅢ酶切鑒定插入片段大小為300～2000bp。 3.兩條染色體的AFLP分子標(biāo)記 將LA-PCR技術(shù)與單酶切AFLP分子標(biāo)記結(jié)合，以LA-PCR接頭序列為依據(jù)，設(shè)計(jì)引物，通過變性聚丙烯酰胺膠電泳與銀染技術(shù)，建立了兩條染色體的分子標(biāo)記，并且