30513.柑橘細菌人工染色體文庫構(gòu)建及乙烯調(diào)控基因克隆

1、西南大學(xué)碩士學(xué)位論文柑橘細菌人工染色體文庫構(gòu)建及乙烯調(diào)控基因克隆姓名：王淼申請學(xué)位級別：碩士專業(yè)：植物學(xué)指導(dǎo)教師：鐘廣炎20090501西南大學(xué)碩士學(xué)位論文摘要平均為82kb左右；計算表明文庫總?cè)萘肯喈斢诟涕倩蚪M的13倍，因而在理論上從該文庫中找到任意單拷貝序列的概率為9999％。多個克隆連續(xù)多次傳代培養(yǎng)證實該文庫遺傳穩(wěn)定，沒有發(fā)生插入片段丟失和可檢測到的變異。為了進一步評價該文庫的代表性，本研究進行了從文庫中篩選基因的實驗。將本BA

2、C文庫10個384孔培養(yǎng)板中的3840個克隆按板、行和列分別分級混合，得到該文庫的混合板池、行池和列池。根據(jù)本實驗室基因芯片分析結(jié)果，確定篩選7個受乙烯調(diào)控的候選基因，根據(jù)這7個基因的已知EST序列設(shè)計特異引物，用PCR對混合樣本進行逐級篩選，確定PCR陽性克隆所在的行和列。實際篩選到了其中5個基因的陽性克隆，用基因特異引物直接測序BAC克隆，結(jié)果證實所篩選出的5個克隆均含有目標基因，表明文庫代表性良好，同時也表明本研究所用的PCR篩選