西番蓮（Passiflora edulis Sims）染色體微分離與單染色體DNA文庫的構(gòu)建.pdf

1、紫果西番蓮(Passiflora edulis Sims)為西番蓮科西番蓮屬的多年生常綠攀緣性藤本果樹，是熱帶、亞熱帶重要果樹之一。目前西番蓮研究多集中于栽培引種、果實加工、進化關(guān)系等方面，對西番蓮的遺傳背景研究很少，基因連鎖遺傳圖譜的研究更是缺乏，育種工作只能通過傳統(tǒng)方式開展，效率不高。利用日益成熟的染色體顯微分離技術(shù)，分離西番蓮單染色體，進行PCR擴增，建立單染色體DNA文庫，進而運用RAPD和AFLP技術(shù)，可以較快地從文庫中篩選特

2、異性分子標(biāo)記，尋找與目的基因緊密連鎖的探針，進行精細(xì)的分子作圖，為西番蓮的分子育種奠定理論基礎(chǔ)。本研究以紫果西番蓮的實生種子為材料，探索了西番蓮的細(xì)胞學(xué)制片技術(shù)并進行了核型分析，分離了隨體染色體(第4染色體)建立了單染色體DNA文庫，并利用AFLP尋找染色體特異性標(biāo)記。主要結(jié)果和結(jié)論如下： 1．不同浸種時間及光照對西番蓮種子萌發(fā)的影響通過對西番蓮種子的浸種研究發(fā)現(xiàn)，適當(dāng)?shù)慕N可以提高種子的發(fā)芽率，使發(fā)芽集中。浸種3 d內(nèi)，發(fā)芽率

3、與發(fā)芽勢都比未浸種的高，其中以浸種1 d效果最好，3d以后，發(fā)芽率和發(fā)芽勢都低于未浸種處理，隨著浸種時間的延長，其發(fā)芽率和發(fā)芽勢逐漸下降。黑暗環(huán)境有利于西番蓮種子的萌發(fā)。 2．不同預(yù)處理對西番蓮根尖細(xì)胞有絲分裂中期分裂相形態(tài)的影響不同化學(xué)藥劑對西番蓮根尖細(xì)胞進行處理的結(jié)果表明，采用8-羥基喹啉(0.002mol·L<'-1>)處理2．5 h效果最好，壓片后染色體分散好，著絲點比較清晰，隨體明顯，便于染色體的辨認(rèn)。 3．西

4、番蓮核型研究西番蓮核型的研究結(jié)果表明，染色體數(shù)目為2n=18，第1和第8對為近中部著絲粒染色體，其余7對均為中部著絲粒染色體，第4對染色體帶有隨體，其核型公式為2n=2x=18=14m(2sat)+4sm。 4．西番蓮隨體染色體DNA文庫的構(gòu)建用玻璃針顯微分離出西番蓮帶隨體染色體，經(jīng)LA-PCR擴增得到210～1100 bp的DNA片段。經(jīng)Southern雜交表明，擴增片段與西番蓮基因組DNA之間有同源性，從而證明西番蓮帶隨體染