菠菜Y染色體重復(fù)序列的分離及染色體定位.pdf

1、菠菜，莧科藜亞科菠菜屬一年生或兩年生草本植物，其性別決定方式為XY型，基因組約為989 Mbp，細(xì)胞學(xué)證據(jù)表明菠菜的1號(hào)染色體為性染色體并且Y染色體已經(jīng)得到成功分離并進(jìn)行了體外擴(kuò)增。微分離的Y染色體的擴(kuò)增產(chǎn)物為我們研究菠菜性染色體的結(jié)構(gòu)與演化鑒定了基礎(chǔ)。重復(fù)序列在其他雌雄異株模式植物，如番木瓜、白麥瓶草、酸模等性染色體演化中的作用已研究的比較透徹，然而重復(fù)序列在菠菜性染色體演化過(guò)程中的作用未見(jiàn)相關(guān)報(bào)道。研究表明微分離的單染色體DOP-P

2、CR擴(kuò)增產(chǎn)物會(huì)聚集許多重復(fù)序列，本研究在獲得菠菜微分離Y染色體DOP-PCR擴(kuò)增產(chǎn)物的基礎(chǔ)上，利用消減雜交、斑點(diǎn)雜交等技術(shù)手段篩選性別差異表達(dá)的重復(fù)序列，并構(gòu)建探針，分別與菠菜雌、雄株根尖有絲分裂中期染色體進(jìn)行熒光原位雜交，觀察信號(hào)在性染色體和常染色體上分布情況，探討重復(fù)序列在菠菜性染色體演化中的作用。
　　本研究主要內(nèi)容包括：⑴成功構(gòu)建了菠菜單染色體消減雜交文庫(kù)并進(jìn)行了重組質(zhì)粒的篩選。⑵成功的獲得一個(gè)菠菜雄性特異重復(fù)序列SP74

3、-1。⑶將獲得的雄性特異或雌雄差異的片段SP73、SP74-1、SP74-3、SP75、SP76、SP77、SP78和SP79進(jìn)行染色體定位，F(xiàn)ISH結(jié)果顯示SP73、SP75熒光信號(hào)在性染色體上強(qiáng)度要大于其在常染色體上的信號(hào)強(qiáng)度，熒光信號(hào)強(qiáng)度在X和Y染色體之間沒(méi)有明顯差別。雄性特異分子標(biāo)記SP74-1和雌雄差異序列SP73、SP74-3、SP75、SP76、SP77、SP78和SP79均包含有部分Tyl-copia和Ty3-gypsy