黑麥4R染色體特異分子標(biāo)記開(kāi)發(fā)及其染色體區(qū)段定位.pdf

1、小麥（Triticum aestivum L.）是世界上重要的糧食作物之一。而黑麥(S.cereale L.)是改良小麥抗病性和產(chǎn)量等性狀的重要基因源，故應(yīng)對(duì)黑麥各染色體進(jìn)行更深入的研究。
　　本實(shí)驗(yàn)主要采用非變性熒光原位雜交(ND-FISH)的方法對(duì)小麥-黑麥雜交后代進(jìn)行鑒定，同時(shí)利用SLAF-seq技術(shù)獲得黑麥4R染色體特異序列。借助小麥-黑麥附加系、4R染色體易位變異系，開(kāi)發(fā)基于PCR的4R染色體特異分子標(biāo)記，并將這些特異標(biāo)

2、記定位到4R染色體不同區(qū)段，具體研究結(jié)果如下:
　　1、利用寡核苷酸探針，鑒定了來(lái)自普通小麥綿陽(yáng)11(Triticum aestivum L.)(MY11)×黑麥Kustro(Secale cereale L.)的小麥-黑麥4R二體附加系DA4RKu、4RL雙端體附加系DTA4RLKu和4RS雙端體附加系DTA4RSKu。并且利用探針(AAC)6、Oligo-pSc119.2-1、Oligo-pSc200和Oligo-pSc250

3、，將4R染色體區(qū)分為9個(gè)區(qū)段，分別命名為S-1、S-2、S-3、S-4、L-1、L-2、L-3、L-4和L-5。
　　2、利用寡核苷酸探針，鑒定4RS-5DS.5DL、5DS-4RS.4RL易位系12FT2115的后代以及DTA4RLKu和12FT2115的部分輻射后代。12FT2115的自交后代中，鑒定出了純合4RS-5DS.5DL易位系14T190-1、純合5DS-4RS.4RL易位系14T150-11以及純合4RS/5DS易

4、位系14T150-27。從12FT2115的輻射后代中，鑒定出了含1對(duì)斷裂5DS-4RS.4RL易位染色體的易位系15T305-12。從DTA4RLKu的輻射后代中，鑒定出了純合4BL.4BS-4RL和4RL/5BL易位系14T201-11、含一條4RL-5BL.5BS易位染色體的易位系15T139-1以及含一條4RL/5BL易位染色體的易位系15T165-9?？筛鶕?jù)這些易位系中4R染色體斷裂位置的不同，將4R染色體區(qū)分為7個(gè)區(qū)段:區(qū)段

5、S-1+S-2、區(qū)段S-3、區(qū)段S-4、區(qū)段L-1+L-2.1、區(qū)段L-2.2、區(qū)段L-2.3和區(qū)段L-3+L-4+L-5。
　　3、基于SLAF-seq技術(shù)篩選黑麥Kustro4R染色體特異的SLAF序列，再隨機(jī)選擇800條設(shè)計(jì)引物。對(duì)小麥/黑麥單體附加系MA1RKu-7RKu，進(jìn)行PCR擴(kuò)增，篩選到381個(gè)黑麥Kustro的4R染色體特異分子標(biāo)記。
　　4、利用鑒定出的4R二體附加系DA4RKu及其易位變異系，實(shí)現(xiàn)對(duì)Ku

6、stro4R染色體特異分子標(biāo)記進(jìn)行染色體區(qū)段定位，最終有314個(gè)標(biāo)記定位成功，定位到4R染色體的7個(gè)區(qū)段（區(qū)段S-1+S-2、區(qū)段S-3、區(qū)段S-4、區(qū)段L-1+L-2.1、區(qū)段L-2.2、區(qū)段L-2.3和區(qū)段L-3+L-4+L-5），特異分子標(biāo)記的數(shù)目分別為109、9、19、27、18、6和126個(gè)。
　　5、利用兩套小麥-黑麥二體附加系DA1RKi-7RKi和DA1RI-7RI，對(duì)已篩選到的381個(gè)標(biāo)記進(jìn)行多態(tài)性驗(yàn)證。得到21