費菜提取液抑菌效果和抗氧化研究【畢業(yè)設計】

1、<p><b>　　本科畢業(yè)設計</b></p><p><b>　?。?0_ _屆）</b></p><p>　　費菜提取液抑菌效果和抗氧化研究</p><p>　　所在學院 </p><p>　　專業(yè)班級 食品質(zhì)量與安

2、全 </p><p>　　學生姓名 學號 </p><p>　　指導教師 職稱 </p><p>　　完成日期 年 月 </p><p><b>　　目錄</b></

3、p><p>　　1引言錯誤!未定義書簽。</p><p><b>　　2材料與方法4</b></p><p>　　2.1 材料與試劑4</p><p>　　2.1.1 原料5</p><p>　　2.1.2 試驗菌種5</p><p>　　2.1.3 試劑2<

4、/p><p>　　2.1.4 主要儀器2</p><p>　　2.2 實驗方法6</p><p>　　2.2.1實驗路線6</p><p>　　2.2.2 測定方法3</p><p>　　2.2.2.1 費菜提取液中黃酮濃度測定3</p><p>　　2.2.2.2 菌種的預處理錯誤!未

5、定義書簽。</p><p>　　2.2.2.3 費菜提取液抑菌圈測定4</p><p>　　2.2.2.4 費菜提取液最低抑菌濃度（MIC）測定5</p><p>　　2.2.2.5 費菜提取液最低殺菌濃度（MB）測定5</p><p>　　2.2.2.6 費菜提取液還原力測定5</p><p>　　2.2.2

6、.7 費菜提取液羥自由基清除率測定5</p><p>　　2.2.2.8 費菜提取液DPPH·清除能力測定6</p><p><b>　　3結果與分析6</b></p><p>　　3.1 費菜提取液總黃酮含量6</p><p>　　3.2 費菜提取液的抑菌效果7</p><p&g

7、t;　　3.3不同濃度的費菜提取液對細菌的抑制效果9</p><p>　　3.4 不同濃度的費菜提取液的滅菌效果9</p><p>　　3.5 費菜提取液的還原能力10</p><p>　　3.6 費菜提取液清除羥基自由基的能力10</p><p>　　3.7 費菜提取液清除DPPH·的能力11</p>&l

8、t;p><b>　　4小結12</b></p><p>　　4.1 費菜提取液的抑菌效果12</p><p>　　4.2 費菜提取液的抗氧化效果12</p><p><b>　　致謝13</b></p><p>　　參考文獻錯誤!未定義書簽。</p><p>

9、<b>　　附錄15</b></p><p>　　【摘要】 費菜，俗稱養(yǎng)心草、救心菜、三七等，屬景天科多年生草本植物。費菜是一種集食用、藥用和觀賞為一體的經(jīng)濟農(nóng)作物。本文通過測定抑菌圈、MIC、MBC等方法對費菜提取液進行抑菌效果研究，結果發(fā)現(xiàn)其對大腸桿菌、金黃色葡萄球菌、枯草芽孢桿菌有明顯的抑菌效果，而且抑菌效果隨著費菜提取液濃度的增加而加強；用還原力、羥自由基清除率和DPPH自由基清除

10、率測定抗氧化能力表明具有較強的抗氧化能力。通過此研究可以提高費菜有效成分的應用新價值，有助于生產(chǎn)天然保健品和出具有治療和預防多種疾病的藥品，為費菜的綜合利用開辟新途徑，創(chuàng)造更大的社會效益和經(jīng)濟效益。</p><p>　　【關鍵詞】 費菜; 抑菌; 抗氧化</p><p>　　【Abstract】 Aizoon stonecrop herb, commonly known as yangx

11、in grass, save heart grass, notoginseng etc.It is belong to Stonecrop Herb perennial herbaceous plants.Aizoon Stonecrop Herb is an economic crops aggregate edible、medicinal and ornamental functions, This article uses det

12、ermination bacteriostatic circle, MIC, MBC methods to research the bacteriostatic effect of Aizoon Stonecrop Herb extract. Founding that its has obvious bacteriostatic effect to escherichia coli, staphylococcus aureus an

13、d </p><p>　　【Keyword】 Aizoon stonecrop herb; bacteriostat; antioxidati</p><p><b>　　1.引言</b></p><p>　　費菜，俗稱養(yǎng)心草、救心菜、三七、土三七等，屬景天科多年生草本植物。株高25—50厘米，叢生，分蘗力強。肉質(zhì)根較肥大，葉匙形，對生，翠

14、綠，肥厚多汁，葉緣鋸齒狀；花黃色，星蕓狀集生頂部，成片狀分布，花期6—9月；果熟期8—10月，種子細小。</p><p>　　費菜始載于《救荒本草》，具體很好的營養(yǎng)價值，據(jù)研究測定[1]，每l00g鮮食部位含蛋白質(zhì)2lg、碳水化臺物8g、脂肪0.7g．粗纖維1.5g、胡蘿卜素2.8mg、維生素B．0.05mg、維生素B 0.3lmg，維生素C 95mg、煙酸0.9mg，鈣315mg，磷39mg、鐵32mg。除了營

15、養(yǎng)方面的價值，費菜還有不菲的藥用價值，它含有生物堿、谷甾醇、黃酮類、齊敦果酸、景天庚糖，果糖等藥物成分。費菜中的生物堿具有抗腫瘤活性，保護心血管系統(tǒng)，對神經(jīng)系統(tǒng)具有鎮(zhèn)痛和止痛作用，還具有抑菌效果[2]；谷甾醇能阻止人體對膽固醇的吸收，降血脂，防止血管硬化；黃酮類可擴張心腦血管，促進血液循環(huán)；齊墩果酸還可保護肝臟，起到延緩老年性肝組織纖維化的作用，經(jīng)常服用能有益健康、延年益壽[3]。</p><p>　　費菜幾乎無

16、病蟲危害，栽培過程不施農(nóng)藥，無污染，無農(nóng)藥殘留，是一種綠色食品，受到廣大人們的喜愛。費菜主要食用嫩莖葉，無異味。采下洗凈可直接素炒，配肉、蛋、食用菌炒，火鍋、燉食、清蒸、澆湯，久煮不爛[4]。 費菜藥用功能主要有消腫、定痛、止血、化瘀、治吐血、衄血、便血、尿血、崩漏、乳癰、跌打損傷等，也是治療心臟病的良藥。</p><p>　　費菜具有群體整齊，顏色鮮綠，覆蓋率高，花色鮮艷，花期較長的特點。費菜在栽培過程中不生蟲

17、、無病害，這是它的一大優(yōu)點，能在貧瘠的土壤里長勢強壯，所以無需噴灑農(nóng)藥，避免了化肥污染；加之其易種、易管、產(chǎn)量高，一般栽培條件下，每667m2產(chǎn)量可達5000kg以上，所以是園林花壇、草坪綠化難得的好品種，又是農(nóng)業(yè)產(chǎn)業(yè)結構調(diào)整和發(fā)展無公害綠色蔬菜的理想品種之一。家庭栽培幾盆費菜，既有藥用價值，又能美化環(huán)境，凈化空氣，陶冶情操，增添樂趣[5]。</p><p>　　費菜經(jīng)萎凋脫水15％ ～20％ ，搖青3～5分鐘，

18、渥堆6小時，220～240oC殺青5～6分鐘、揉捻、烘干可制得色香味俱佳的方便飲品養(yǎng)心茶[6]，泡出的茶水色、香、味俱佳，飲用后可高效抑制失眠、心悸、煩悶等癥，加糖飲用1：3味更佳；除降血壓外，還可解除酒醉頭痛。除主治心腦血管疾病外，而且對吐血、咯血、煩躁失眠、驚悸癔癥、跌打損傷有療效。</p><p>　　目前已有很多研究，從不同植物中提取黃酮和生物堿開發(fā)不同的產(chǎn)品[7-8]。比如竹葉黃酮飲料、啤酒、保健膠囊、

19、抗氧化劑、美容護膚品；銀杏黃酮飲料、啤酒、保健膠囊、美容護膚品；大豆異黃酮膠囊；生物堿的鎮(zhèn)咳止痛抗腫瘤等。費菜含有大量的黃酮類和生物堿，目前對費菜的研究基本還停留在其藥用價值、培養(yǎng)和繁殖階段，沒有對費菜進一步的開發(fā)，今后費菜的研究方向可以轉向費菜的生物活性成份。</p><p><b>　　2材料與方法</b></p><p><b>　　2.1 材料與儀器

20、</b></p><p><b>　　2.1.1材料</b></p><p>　　原料：費菜，產(chǎn)于寧波慈溪。</p><p>　　試驗菌種：大腸桿菌(Escherichia coli)；金黃色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)；枯草芽孢桿菌（Bacillus subtilis）</p><p&

21、gt;<b>　　2.1.2 試劑</b></p><p><b>　　無水乙醇：</b></p><p>　　蘆丁(蕓香葉苷）：BR，含量≥95%，國藥集團化學試劑有限公司；</p><p>　　亞硝酸鈉: 分析純，宜興市第二化學試劑開發(fā)中心；</p><p>　　硝酸鋁： 分析純，天津市永大化

22、學試劑開發(fā)中心；</p><p>　　氫氧化鈉：分析純，杭州高晶精細化工有限公司；</p><p>　　三氯乙酸：分析純，國藥集團化學試劑有限公司；</p><p>　　鐵氰化鉀：分析純，北京化工廠；</p><p>　　三氯化鐵：分析純，宜興市第二化學試劑廠；</p><p>　　磷酸二氫鈉：分析純，汕頭全砂化工廠；

23、</p><p>　　磷酸氫二鈉：分析純，天津市巨星圣源化學試劑有限公司；</p><p>　　硫酸亞鐵：分析純，上海展云化工有限公司；</p><p>　　抗壞血酸（VC）：分析純，杭州化學試劑有限公司；</p><p>　　水楊酸：分析純，國藥集團化學試劑有限公司；</p><p>　　冰醋酸：分析純，國藥集團化學

24、試劑有限公司；</p><p>　　無水醋酸鈉：分析純，上海試劑四廠；</p><p>　　雙氧水、鹽酸、無水乙醇（均為國產(chǎn)分析純）；蒸餾水。</p><p>　　細菌用營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基：BR，成分為蛋白胨10g，牛肉膏3g，氯化鈉5g，瓊脂20g，取38g加蒸餾水至1000mL，pH 7.2~7.4，國藥集團化學試劑有限公司；</p><p>

25、;　　LB肉湯：BR，成份為蛋白胨10g，酵母粉5g，氯化鈉5g，葡萄糖1g，取21加蒸餾水至1000mL，中國進出口商品檢驗技術研究所。</p><p>　　2.1.3 主要儀器</p><p>　　電熱恒溫水浴鍋：DK-S22型，上海精宏實驗設備有限公司；</p><p>　　旋轉蒸發(fā)儀：SENCO R-201型，上海申順生物科技有限公司；</p>

26、<p>　　循環(huán)水真空泵：SHZ-D(Ш)型，鞏義市英峪予華儀器廠；</p><p><b>　　濕熱滅菌鍋：</b></p><p>　　電熱鼓風干燥箱：CS101-1AB型，中國重慶銀河實驗儀器有限公司；</p><p>　　酸度計：pHS-25型，上海理達儀器廠；</p><p>　　可見分光光度計：

27、7200型，尤尼柯（上海）儀器有限公司；</p><p>　　高速臺式離心機：H1650型，長沙湘儀離心機儀器有限公司；</p><p>　　電子天平：BP221D型，Sartorius。</p><p>　　氣浴恒溫振蕩器：SHZ-82型，金壇市科析儀器有限公司；</p><p><b>　　2.2 實驗方法</b>&

28、lt;/p><p><b>　　2.2.1實驗路線</b></p><p>　　實驗主要分為三部分，原料準備、抑菌能力和抗氧化能力測定。</p><p>　　原料準備包括原料的預處理和費菜提取液粗提取。原料預處理：取新鮮費菜葉在70℃烘干24h，然后用藥物粉碎機粉粉碎并過80目篩，得到的葉粉備用，在提取之前將葉粉在105℃烘干2h左右。費菜提取液粗

29、提取過程[9-10]：稱取5g干粉，置于500ml錐形瓶中，按照料液比1:50加入濃度為90%的乙醇，超聲提取50min，60℃水浴浸提6h，趁熱抽濾，得到濾液。將粗提液用旋轉蒸發(fā)儀在45-50℃下濃縮至適量后，加入2倍體積的95％乙醇以沉淀多糖，放入冰箱6h，過濾，再將提液用旋轉蒸發(fā)儀在45-50℃下濃縮至適量后待用。</p><p>　　抑菌能力測定包括費菜提取液中黃酮濃度、抑菌圈大小、MIC（最低抑菌濃度）

30、和MBC（最低殺菌濃度）的測定。</p><p>　　抗氧化能力測定包括費菜提取液還原力、費菜提取液羥自由基清除率和費菜提取液DPPH﹒清除能力的測定。</p><p><b>　　2.2.2測定方法</b></p><p>　　2.2.2.1 費菜提取液中總黃酮濃度測定</p><p>　　標準溶液的制備[11-12]

31、。精密稱取120℃干燥至恒重的蘆丁9.0mg，置50mL量瓶中，加30%乙醇適量，置水浴上微熱使其溶解、冷卻，加30%乙醇至刻度，搖勻，量取上述試液10.0mL，置100mL量瓶中，用蒸餾水稀釋至刻度，搖勻即得標準溶液。每1mL含蘆丁0.018mg。</p><p>　　精密量取上述標準溶液1.0mL、1.5mL、2.0mL、2.5mL、3.0mL、3.5mL，分置25mL量瓶中，各加水至6mL；分別加5 %Na

32、NO2溶液1mL，搖勻，放置6min；分別加10 %Al(N03)3溶液1mL，搖勻，放置6min；然后分別加4 %NaOH溶液10mL，并分別加水至刻度，搖勻，靜置15min，在510nm測定吸收度，以30%乙醇溶液代替蘆丁溶液做空白對照。以濃度(C)(mg/mL)對吸光度(A)作標準曲線.繪制標準曲線如圖1所示。由圖1得到回歸方程y=12.353x-0.0022，R2=0.9997。</p><p><

33、b>　　圖1 蘆丁標準曲線</b></p><p>　　Fig.1 The standard curve of Rutin</p><p>　　費菜提取液中總黃酮含量測定。把制得的費菜提取液取1ml稀釋100倍，分別吸取0.5ml、1.0ml、1.5ml、2.0ml、2.5ml稀釋液代替蘆丁溶液，按照制作標準曲線相同的方法測吸光值。</p><p>

34、;　　2.2.2.2 菌種的預處理[13]</p><p>　　首先制作九管無菌的營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基斜面，并標記好菌種和時間，第一天用三管斜面分別接種三種細菌，在37oC培養(yǎng)24h；第二天以培養(yǎng)好的細菌為菌種，分別接種一管，繼續(xù)在在37oC培養(yǎng)24h；第三天以第二天培養(yǎng)的細菌為菌種，分別接種一管，在在37oC培養(yǎng)24h，備用。</p><p>　　在無菌條件下，取一環(huán)大腸桿菌放入0.9%的無菌

35、生理鹽水中，充分震蕩混勻后，制成10-1的均勻稀釋液。大概使菌懸液的濃度為106、107cfu/ml（之前做幾次預實驗）。領取5支9ml無菌生理鹽水試管，分別標記大腸桿菌和10-2、10-3、10-4、10-5、10-6。用1ml滅菌移液槍吸取10-1稀釋菌液1ml，沿著管壁徐徐注入標有10-2試管的滅菌生理鹽水中（注意移液槍頭不要觸及管內(nèi)稀釋液），然后另換1個1ml移液槍頭插入10-2試管中反復吹吸菌懸液10余次，充分混合均勻（吹吸菌

36、液時不要過猛太快，吸時將槍頭插入液面下面一點，吹時將吸管提到接近液面以下），制成10-2稀釋液。按上述操作順序，制成10-3、10-4、10-5、10-6系列稀釋菌液（每遞增稀釋一次，即換用一個槍頭，否則稀釋不準）。</p><p>　　2.2.2.3 提取液的抑菌圈測定</p><p>　　先將滅菌的營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基融化后，在無菌室中趁熱導入無菌平板中，冷卻后分別做好標記。用移液槍取10-

37、6試管中的菌液0.1ml，對號接種于10-6的平板中（每個編號設兩個重復），再用無菌玻璃涂布棒（用酒精棉擦拭并灼燒滅菌）將菌液涂布均勻，平放于實驗臺上20-30min，使菌液滲入培養(yǎng)基內(nèi)。</p><p>　　按照上述方法制作 10-1、10-4、10-5菌液的平板，10-4、10-5菌液各兩個，10-1菌液6個平板。10-4、10-5、10-6菌液做菌落總數(shù)計數(shù)用，10-1菌液做抑菌圈用。</p>

38、<p>　　把直徑為6mm的打孔器（用酒精棉擦拭并在酒精燈上灼燒滅菌），在每個10-1菌液平板上打3個孔，每個孔之間相差30mm以上，并用無菌鑷子（酒精棉擦拭并在酒精燈上灼燒滅菌）把平板上打孔后的瓊脂拿掉。取出一個平板，分別在里面的三個孔中注入50μl的無菌水、硫酸慶大霉素溶液、費菜提取液，做3個平行。取出另一個平板，分別在里面的三個孔中注入50μl的費菜提取液、0.1%山梨酸鉀、0.5%山梨酸鉀溶液，同樣做三個平行。以上操

39、作完后，菌落計數(shù)的幾個平板倒置于37oC培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24h，做抑菌圈的幾個平板正放于37oC培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24h后觀察。</p><p>　　金黃色葡萄球菌和枯草芽孢桿菌也做以上相同的操作，但用山梨酸鉀做對照的只做大腸桿菌。</p><p>　　2.2.2.4 費菜提取液最低抑菌濃度（MIC）的測定[14-15]</p><p>　　總黃酮采用二倍稀釋法配成各種濃度，

40、其方法：取6支試管分別加入2mL液體培養(yǎng)基，2mL提取液于第1支試管中，混勻后取2mL入第2管，然后依次取2mL移入下一管，到笫6管時棄去2mL，即將提取原液(1g/mL)用提取相應的溶劑按照1：2、1：4、1：8、1：16、1：16、1：32的比例進行倍半稀釋，得6個濃度的稀釋提取液。在這6管中分別加入0.1rnL大腸桿菌10-1菌液，另取7支試管不加菌液作為空白對照。將其放于培養(yǎng)箱中，37℃培養(yǎng)24h，觀察記錄澄清不長菌的最高稀釋度

41、就是最低抑菌濃度(MIC)，每個樣品設2個平行組，結果以平均值計。金黃色葡萄球菌和枯草芽孢桿菌也做以上相同的操作。</p><p>　　2.2.2.5 費菜提取液最低殺菌濃度（MBC）的測定[16-17]</p><p>　　取若干個無菌平皿做好標記，將MIC測定中未生長細菌的肉湯用傾注平板法接種于營養(yǎng)瓊脂平板上，37oC培養(yǎng)24h，觀察結果，以仍無細菌生長的管內(nèi)的費菜提取液的濃度，為最低

42、殺菌濃度。</p><p>　　2.2.2.6 費菜提取液還原力測定</p><p>　　原理[18]：抗氧化劑的還原力與其抗氧化性之間存在十分密切的關系。抗氧化劑是電子的給予體(elec—tron donor)，通過自身的還原作用給出電子而清除自由基，還原力越強，抗氧化性越強。因此，可通過測定還原力來說明其抗氧化活性的大小。普魯士藍法測定還原力的原理是樣品將鐵氰化鉀(K3Fe(CN)6）

43、還原成亞鐵氰化鉀(K4Fe(CN)6)，亞鐵氰化鉀再與Fe3+作用，生成亞鐵氰化鐵(普魯士藍)，在700nm波長處檢測普魯士藍的吸光度，以表示還原力的大小，吸光度越高樣品的還原力就越強。</p><p>　　操作步驟[19]：在2.5 ml、pH 6.6磷酸緩沖溶液(phosphate bufer saline，PBS，pH 6.6)中加入1ml不同濃度的費菜提取物溶液、1ml 1%鐵氰化鉀，混合物在50℃恒溫條

44、件下加熱20min，急速冷卻，加2.5 ml10%三氯乙酸，離心分離10min。取上層清液5ml，加5ml水，再加1ml 0.1%FeC13，混合均勻，靜置10min后，在700nm下測定其吸光度值(以蒸餾水代替樣品的混合液作參比溶液)，吸光度值越高還原力越強。</p><p>　　2.2.2.7 費菜提取液羥自由基清除率測定</p><p>　　原理[20]：參照Fnton反應的方法建立

45、反應體系模型，利用H2O2與Fe2+混合產(chǎn)生·OH，但由于·OH具有很高的反應活性，存活時間短，若在反應體系中加入水楊酸，就能有效地捕捉·OH，并產(chǎn)生有色產(chǎn)物。</p><p>　　反應式如下： H2O2 + Fe2+ → Fe3+ +·0H + 0H-</p><p>　　該產(chǎn)物在510nm處有強吸收，若在此反應體系中加入具有清除·OH功

46、能的被測物，便會與水楊酸競爭·OH，從而使有色產(chǎn)物生成量減少。</p><p>　　操作步驟[21]：于25mL容量瓶中依次加入2mmol/LFeSO4 5mL，6mmol/L H2O2 5mL，6mmol/L水楊酸一乙醇15mL，于37℃水浴中保溫15min后取出，以蒸餾水為參比，510nm下測其吸光度(Ao)，然后再加入1 mL被測定樣品，搖勻，37℃水浴中保溫15min后取出，以蒸餾水為參比，51

47、0nm下測其吸光度(Ax)?？紤]到色素本身的吸光度值，做了對照試驗：于25mL容量瓶中依次加入2mmol/LFeSO45mL，蒸餾水5mL，6mmol/L水楊酸一乙醇15mL，于37℃水浴中保溫15min，然后加入1mL被測定樣品，搖勻，于37℃水浴中保溫15min后取出，以蒸餾水為參比，510nm下測其吸光度(Axo)。根據(jù)下面的公式計算抑制率。</p><p>　　清除率=[Ao-(Ax-Axo)]/Ao&#

48、215;l00％</p><p>　　式中：Ao為蒸餾水代替樣品的對照值；Ax為加樣后的吸光度；Axo為樣品本身的本底值。</p><p>　　把費菜提取液稀釋10倍、8倍、6倍、4倍、2倍、1倍，分別測清除率，作圖。</p><p>　　2.2.2.8 費菜提取液DPPH﹒的清除能力測定</p><p>　　原理[22]：DPPH·

49、;（1，1-二苯基-2-三硝基苯肼）是一種穩(wěn)定的有機自由基，其乙醇溶液顯紫色，在517nm處有最大吸收峰。當有供氫的抗氧化劑存在時(如酚類)，孤電子被配對，DPPH·溶液的顏色變淺，吸光度值變小，根據(jù)吸光度的變化可測得抗氧化劑的活性。</p><p>　　操作步驟[23]：DPPH·以50%乙醇溶液配成0.2μmol/L溶液，取上述不同質(zhì)量濃度的待測液各2m1和DPPH·溶液2ml先

50、后加入同一具塞試管，搖勻于室溫下放置30min后，于517 nm波長處分別測定各反應液的吸光值。 </p><p>　　DPPH·的清除率(%)=[1-(Ai-Aj)/Ac]×100%</p><p>　　式中，Ai代表2mlDPPH·溶液加入2ml費菜提取液吸光值，Aj代表2m1費菜提取液加入2ml乙醇的吸光值，Ac代表2ml DPPH

51、83;溶液加入2ml乙醇的吸光值。</p><p>　　把費菜提取液稀釋10倍、8倍、6倍、4倍、2倍、1倍，分別測清除率，作圖。</p><p><b>　　結果與分析</b></p><p>　　3.1 費菜提取液總黃酮含量</p><p>　　通過費菜提取液中黃酮含量的測定，其結果見表1所示。</p>

52、<p>　　表1 總黃酮含量測定結果</p><p>　　Table 1 The flavonoids content determination result</p><p>　　費菜提取液總黃酮的含量:2.382±0.011mg/ml</p><p>　　3.2費菜提取液的抑菌效果</p><p>　　通過費菜提

53、取液對細菌抑制效果的實驗，其結果見表2、表3所示.</p><p>　　表2 菌懸液的細菌總數(shù)</p><p>　　Table 2 The total bacterial count of Bacteria levitation liquid</p><p>　　表3 費菜提取液的抑菌效果</p><p>　　Table 3 Antimi

54、crobia effect of Aizoon Stonecrop Herb’extract</p><p>　　從表3可以看出，費菜提取液對三種所選菌種的都有著明顯的抑制效果（見圖2-6）。其中對大腸桿菌的抑制效果尤為強烈，枯草芽孢桿菌次之，金黃色葡萄球菌最弱。從圖3和圖4可以得出，費菜提取液對不同濃度的細菌抑制效果有所區(qū)別，細菌濃度越大，抑菌效果越弱。圖5和圖6的對照分別是0.1%和0.5%的山梨酸鉀溶液，從

55、圖可以看出費菜提取液比山梨酸鉀的抑菌效果好。</p><p>　　費菜提取液對幾種細菌的抑菌圈</p><p>　　Antimicrobial circles of Aizoon Stonecrop Herb extract against Some bacteria</p><p>　　圖1 107cfu/ml大腸桿菌 圖2 1

56、07cfu/ml金黃色葡萄球菌</p><p>　　Fig.1 107cfu/ml Escherichia coli Fig.2 107cfu/ml Staphylococcus aureus </p><p>　　圖3 107cfu/ml枯草芽孢桿菌 圖4 106cfu/ml枯草芽孢桿菌</p><p&g

57、t;　　Fig.3 107cfu/ml Bacillus subtilis Fig.4 106cfu/ml Bacillus subtilis </p><p>　　圖5 107cfu/ml大腸桿菌 （山梨酸鉀做對照） </p><p>　　Fig.5 107cfu/ml Escherichia coli （Potassium sorbet as

58、 compared）</p><p>　　3.3 不同濃度的費菜提取液對細菌的抑制效果的影響</p><p>　　不同濃度費菜提取液對上述三種受試菌的低抑制濃度實驗結果見表4</p><p>　　表4不同濃度山費菜提取液對各種細菌的抑制效果</p><p>　　Table 4 Antimicrobial effect of Aizoon St

59、onecrop Herb’extract with different concentration on different Strains</p><p>　　注：+++表示液體非常渾濁，++表示液體渾濁，+表示液體輕微渾濁，- 表示液體澄清。</p><p>　　Note: +++ stands for liquid very turbidity. ++ stands for liqu

60、id turbidity. + stands for slight turbidity. - stands for liquid clarify. </p><p>　　在37oC溫箱中培養(yǎng)24h后，取出試管，肉眼觀察試管中液體的渾濁度，判斷細菌生長情況，結果顯示，費菜提取液對大腸桿菌、金黃色葡萄球菌和枯草芽孢桿菌都有明顯的抑制作用，隨著費菜提取液濃度提高抑菌效果越強，到一定濃度后可以完全抑制細菌的生長。三種菌

61、在費菜提取液稀釋到1/16濃度時都出現(xiàn)渾濁，但金黃色葡萄球菌試管的液體更渾濁。所以三種菌的最低抑菌濃度是費菜提取液稀釋到1/8的濃度。</p><p>　　3.4不同濃度的費菜提取液的殺菌效果</p><p>　　不同濃度的費菜提取液對上述三種受試菌的殺菌濃度實驗結果見表4</p><p>　　表5 費菜提取液對各種細菌的最低滅菌濃度</p><

62、p>　　Table 5 Minimum bactericidal concentration of Aizoon Stonecrop Herb’extract on different Strains</p><p>　　注：+表示有菌體生長，- 表示無菌生長。</p><p>　　Note: + stands for biomass growth. - stands for no

63、 biomass growth. </p><p>　　在37oC溫箱中培養(yǎng)24h后，取出試管，肉眼觀察平板中是否長有菌落，結果顯示，費菜提取液對大腸桿菌的最低殺菌濃度是提取液稀釋到1/8,對金黃色葡萄球菌和枯草芽孢桿菌的最低殺菌濃度是提取液稀釋到1/4，說明費菜提取液對大腸桿菌的殺菌效果比對金黃色葡萄球菌和枯草芽孢桿菌好。</p><p>　　3.5 費菜提取液的還原能力</p&g

64、t;<p>　　Vc和費菜提取液經(jīng)還原力測定結果曲線</p><p>　　圖7 費菜提取液和Vc的還原力吸光度曲線</p><p>　　Fig.7 The absorbance-concentration curve of Aizoon Stonecrop Herb extract and Vc </p><p>　　圖7橫坐標是以費菜提取液中總黃酮

65、的量來標定的，VC的濃度與費菜提取液中總黃酮的濃度一致。費菜提取液和VC的吸光度隨著濃度的升高而升高。吸光度越大，樣品還原力越強，從圖7可以得出費菜提取液的還原力高，由于提取液中的成份復雜，一些黃酮類和生物堿類等都具有抗氧化性，和Vc的還原力沒有相比性，只做參考。此實驗表明費菜提取液具有一定的抗氧化能力。</p><p>　　3.6 費菜提取液清除羥自由基清的能力</p><p>　　通過

66、清除率計算公式得到不同濃度費菜提取液和Vc的羥自由基的清除率，繪制曲線，如圖8所示。</p><p>　　圖8 費菜提取液和Vc的羥自由基清除能力</p><p>　　Fig.8 Scavenging effect of Aizoon Stonecrop Herb extract and Vc on OH·</p><p>　　圖8橫坐標是以費菜提取液中總

67、黃酮的量來標定的，Vc的濃度與費菜提取液中總黃酮的濃度一致。從圖8中可以看出，隨著費菜總提取液的濃度逐漸增加，其清除率也逐步增大，具有良好的量效關系。本實驗中最高濃度的費菜總黃酮樣液的最大清除率達93.79%。由此表明，費菜提取液對羥自由基具有較高的清除能力。Vc只做參考，不做對照。</p><p>　　3.7 費菜提取液清除DPPH﹒的能力</p><p>　　不同濃度費菜提取液和Vc對

68、DPPH﹒的清除率，繪制曲線，如圖9所示。</p><p>　　圖9 費菜提取液和Vc的羥自由基清除能力</p><p>　　Fig.9 Scavenging effect of Aizoon Stonecrop Herb extract and Vc on DPPH﹒</p><p>　　圖9橫坐標是以費菜提取液中總黃酮的量來標定的，Vc的濃度與費菜提取液中總黃酮

69、的濃度一致。從圖9中可以看出，隨著費菜總提取液和Vc的濃度逐漸增加，其清除率也逐步增大，兩者都具有良好的量效關系。費菜提取液中除了黃酮還有其他抗氧化物質(zhì)存在的條件下，其對DPPH﹒的清除率不如Vc，所以總的來說，費菜提取液提取液清除DPPH自由基能力比Vc弱。</p><p><b>　　4 小結</b></p><p>　　4.1 費菜提取液的抑菌效果</p&

70、gt;<p>　　從表3-5，圖1-4可以得出費菜提取液對三種受試菌有著不同效果的抑制作用。比較費菜提取液對受試菌抑菌圈的直徑大小、最低抑菌濃度和最低殺菌濃度可知（見表3-5），費菜提取液對大腸桿菌的抑制作用最為強烈，對金黃色葡萄球菌作用次之，而對枯草芽孢桿菌的抑制作用最弱。比較這三種受試菌后發(fā)現(xiàn)金黃色葡萄球菌和枯草芽孢桿菌為革蘭氏陽性菌，大腸桿菌為典型的革蘭氏陰性菌，金黃色葡萄球菌為球菌，大腸桿菌和枯草芽孢桿菌為桿菌，所

71、以從某種程度上來講費菜提取液對革蘭氏陽性和陰性菌，桿菌和球菌都有一定的抑制作用，可見費菜提取液有著廣譜的抑菌效果。而且從MIC和MBC中可以得出，費菜提取液對三種菌完全抑制所需的濃度不大，所以費菜提取液如果進一步開發(fā)可以用在食品、醫(yī)療和農(nóng)業(yè)等方面。費菜含有生物堿、谷甾醇、黃酮類、齊敦果酸、景天庚糖，果糖等藥物成分，很多資料表明[23-26]，生物堿和黃酮類化合物具有明顯的抑菌效果，這就是費菜抑菌的大致原理，但是由于費菜的活性成份很多，具

72、體的原因有待進一步研究。</p><p>　　4.2 費菜提取液的抗氧化效果</p><p>　　本實驗以費菜提取液為原料，通過三種方法檢測其抗氧化活性，結果表明費菜提取液具有一定的抗氧化能力，不同的實驗檢測方法，檢測的是其對不同能力的抗氧化性，但總的來說費菜提取液的抗氧化能力較好。</p><p>　　1）還原力測定結果表明費菜提取液具有較高還原力，且隨著提取液

73、濃度的升高而增大，從而費菜總黃酮具有較好的抗氧化能力。</p><p>　　2）羥自由基清除能力結果表明費菜提取液對羥自由基具有很強的清除能力，且隨著提取液濃度的升高而增大，在濃度不大的情況下清除率亦可達到93.79%。</p><p>　　3）DPPH自由基清除能力結果表明費菜提取液對DPPH自由基有較好的清除能力，且隨著提取液濃度的升高而增大，但相對于Vc而言，其清除效果不如Vc。&l

74、t;/p><p>　　費菜含有生物堿、谷甾醇、黃酮類、齊敦果酸、景天庚糖，果糖等藥物成分，很多資料表明[23-26]，生物堿、黃酮類化合物和一些多糖等具有明顯的抗氧化效果，正是由于費菜的這些生理活性物質(zhì)使得它具有抗氧化功能。</p><p><b>　　參考文獻</b></p><p>　　[1] 孫執(zhí)中．費菜[J]．特種經(jīng)濟動植物，2003，1：

75、25．</p><p>　　[2] 李家玉，王海斌，林志華等．植物次生代謝物的結構、生物合成及其功能分析---生物堿[J]．農(nóng)業(yè)科學研究，2009，30(4)：68-72．</p><p>　　[3] 中國藥科大學．中藥辭海（第一卷)[M]．北京：中國醫(yī)藥科技出版社，1993：1855．</p><p>　　[4] 金運松．21世紀綠色保健食療佳肴——費菜[J]．小

76、康生活，2003，11：13-14．</p><p>　　[5] 種高軍．新型保健類蔬菜——費菜的栽培及繁殖[J]．中國園藝文摘，2009，9：111-112．</p><p>　　[6] 陳宗忠．一種新型保健茶——養(yǎng)心茶的研制[J]．福建農(nóng)業(yè)科技，2005，6：53-54．</p><p>　　[7] 王鋒鵬．生物堿化學[M]．北京：化工出版社，2008：1-51

77、9．</p><p>　　[8] 唐浩國．黃酮類化學物研究[M]．北京：科學出版社，2009：273-382．</p><p>　　[9] 劉羽中，楊洋．生物類黃酮提取研究進展[J]．原料與配料，2004，(10)：48-49．</p><p>　　[10] 周林，徐立，伍春等．桑枝皮總黃酮提取工藝條件的優(yōu)化試驗[J]．蠶葉學，2010，36(3)：491-495．

78、</p><p>　　[11] 呂國紅，鐘曉凌，李良等．枳子總黃酮測定方法的比較分析[J]．湖北工業(yè)大學學報，2009，24(1)：9-12．</p><p>　　[12] 莫開菊，柳圣，程超等．生姜黃酮的抗氧化活性研究[J]．食品科學，2009，27（09）：110-114．</p><p>　　[13] 劉慧.現(xiàn)代食品微生物學實驗技術[M].北京:中國輕工業(yè)出版

79、社,2009:143-148.</p><p>　　[14]　徐金瑞，郭志成，羅燕琴．番石榴葉對食品中幾種常見細菌的抑菌作用[J]．食品研究與開發(fā)，2010，31(3)：173-175．</p><p>　　[15]唐浩國，單方方，魏曉霞等．牡丹葉總黃酮抑茵活性研究[J]．時珍國醫(yī)國藥，2009，20(6)：1355-1357．</p><p>　　[16] 袁婷，

80、鐘學穩(wěn)．常見中草藥的體外抑菌試驗[J]．試驗研究，2009，9：23-24．</p><p>　　[17] 梁波，李寶林．長春七花和果實揮發(fā)油的抗菌活性研究[J]．商洛學院學報，2008，22(5)：47-49．</p><p>　　[18] 李東海，楊發(fā)忠，代紅娟等．葉下花黃酮抗氧化活性研究[J]．云南化工，2009，36(2)：32-35．</p><p>　　

81、[19] 劉愛青，段玉峰，王應強等．中華稻蝗內(nèi)黃酮組分的抗氧化活性[J]．江蘇農(nóng)業(yè)學報，2007，23(3)：233-23．</p><p>　　[20] 陸海峰，羅建華，蒙春越等．蒲公英總黃酮提取及對羥自由基清除作用[J]．廣州化工，2009，37(3)：101-103．</p><p>　　[21] 施興鳳，李瓊，李學輝等．黃瓜黃酮類化合物的抗氧化作用[J]．食品研究與開發(fā)，2010，

82、31(3)：85-86．</p><p>　　[22] 方敏，宮智勇，王耀峰等．玉米須乙醇提取物體外抗氧化活性研究[J]．中國食品與營養(yǎng)，2008，4：45-47．</p><p>　　[23] 王冰芳，張學武等．花紅茶提取物的抗氧化活性研究[J]．安徽農(nóng)業(yè)科學，2009，37(35)：17685-17688．</p><p>　　[24] Adriana Basi

83、le, Lydia Ferrara ,Marisa Del Pezzo etc. Antibacterial and antioxidant activities of ethanol extract from Paullinia cupana Mart. Journal of Ethnopharmacology .2005,102:32–35.</p><p>　　[25] Mojca Skerget , Pe

84、tra Kotnik , Majda Hadolin etc.Phenols, proanthocyanidins, flavones and flavonols in some plant materials and their antioxidant activities.Food Chemistry.2005,89:191–198.</p><p>　　[26] 張桂芝，耿莎，楊海燕等．植物抗氧化成分的研究