黃芩、黃柏提取液與抗-MRSA IgY體外抑菌活性的比較研究.pdf

1、[目的]耐甲氧西林金黃色葡萄球菌是醫(yī)院感染的重要致病細菌之一；黃芩抗菌范圍廣，對金黃色葡萄球菌、綠膿桿菌、大腸桿菌、痢疾桿菌、肺炎球菌等常見病菌均有抑菌作用，臨床上可用于治療濕溫、暑溫、胸悶、惡心嘔吐、瀉痢、黃疸、咳嗽、高熱煩渴、血熱吐衄、癰腫瘡毒、胎動不安等??；黃柏對金黃色葡萄球菌、白色葡萄球菌、甲型鏈球菌、乙型鏈球菌、變形桿菌均有明顯的抑菌作用，臨床主要應用于濕熱瀉痢、熱淋盜汗、瘡瘍腫毒等；抗-MRSA IgY對MRSA有明顯抑制作

2、用，它將對MRSA感染的防治起到積極作用。本研究擬通過體外抗菌活性的觀察，初步探討黃芩、黃柏的提取物，以及這兩個中藥組成的不同配伍液對耐甲氧西林金黃色葡萄球菌的抑菌作用，同時也對抗-MRSA免疫球蛋白抗菌活性進行觀察，與中藥進行比較，為臨床防治耐甲氧西林金黃色葡萄球菌感染提供思路。
　　 [方法]黃芩原液的制備采用二次煮沸法，取黃芩加入蒸餾水浸泡20min，強火加熱煮沸，文火煎煮30min，攪拌，過濾；藥渣再加入蒸餾水按上法煎熬

3、、過濾；兩次藥液合并濃縮，調(diào)pH值至7.8～8.0，并置離心管中，以4000r/min離心10min；121℃高壓蒸汽滅菌20min后備用；黃柏原液同樣的方法制備；IgY的提取采用改良水稀釋法，打蛋收集蛋黃液，以6倍雙蒸水稀釋蛋黃液，調(diào)節(jié)pH值為5.5，置4℃冰箱放置過夜，10000轉(zhuǎn)/分離心20min，收集上清液，加入硫酸銨，使硫酸銨的飽和度達45％，置4℃冰箱靜置8 h，以10000轉(zhuǎn)/分離心20min，棄去上清液，沉淀物按每mL卵

4、黃液加5mL PBS緩沖液(0.01 mol/L，pH7.0)溶解，將溶解液裝入透析袋對蒸餾水透析除NH4+，最后1次改用對PBS緩沖液透析，透析液用G6漏斗除菌過濾，即得IgY提取液。耐甲氧西林金黃色葡萄球菌體抑菌作用的檢測采用瓊脂稀釋法，用M-H瓊脂對中藥進行定量抑菌實驗，用倍比稀釋的藥液制成含藥平板，將耐甲氧西林金黃色葡萄球菌新鮮培養(yǎng)物制成菌液(濃度相當于0.5麥氏比濁管)，接種于各含藥平板上，以不加藥液的瓊脂平板為對照，于35℃

5、培養(yǎng)18～24 h，觀察最低抑菌濃度(MIC)，并統(tǒng)計出抑制50％試驗菌株的最低藥物濃度(MIC50)和抑制90％試驗菌株的最低藥物濃度(MIC90)以及累計抑菌百分率。
　　 [結果]用二次煮沸法提取的黃芩、黃柏具有有效成分易于煎出，吸收快，奏效迅速，作用強特點，因其操作簡單，不需特殊儀器設備，因此具有易于推廣的優(yōu)點；用改良水稀釋法提取的卵黃中IgY具有特異性強，純度高，效價高，耐熱，耐酸的特點，具有易于規(guī)模提取的優(yōu)點。耐甲氧

6、西林金黃色葡萄球菌體抑菌作用：黃芩提取液的MIC50為0.75mg/ml，MIC90為6.20mg/ml；黃柏MIC501.35mg/ml，MIC90為10.60mg/ml；黃芩：黃柏(1:1)MIC50為0.18mg/ml，MIC90為1.40mg/ml；黃芩：黃柏(1:2)MIC50為0.34mg/ml，MIC90為2.74mg/ml；黃芩：黃柏(2:1)MIC50為0.09mg/ml，MIC90為0.74mg/ml；抗-MRSA