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文檔簡介
1、<p><b> 本科畢業(yè)設(shè)計</b></p><p><b> ?。?0_ _屆)</b></p><p> 氣相色譜法檢測水產(chǎn)品中主要菊酯類農(nóng)藥殘留的研究</p><p> 所在學(xué)院 </p><p> 專業(yè)班級
2、 生物技術(shù) </p><p> 學(xué)生姓名 學(xué)號 </p><p> 指導(dǎo)教師 職稱 </p><p> 完成日期 年 月 </p><p> 【摘要】樣品前處理技術(shù)是食品中
3、違禁藥物殘留檢測研究的重點,為準(zhǔn)確分析水產(chǎn)樣品中擬除蟲菊酯類農(nóng)藥的殘留量,建立水產(chǎn)樣品中6種擬除蟲菊酯類農(nóng)藥的殘留檢測方法,水產(chǎn)樣品經(jīng)正己烷:丙酮(V/V,1:1)提取后,用弗羅里硅土柱進(jìn)行凈化,乙醚:丙酮:正己烷(2:2:1,體積比)進(jìn)行洗脫后,經(jīng)GC-ECD進(jìn)行檢測,采用外標(biāo)法定量。實驗結(jié)果表明,6種擬除蟲菊酯類農(nóng)藥在水產(chǎn)樣品中的添加回收率為73.9-85.0%,RSD為3.4-6.7%。該方法可用于進(jìn)行水產(chǎn)品中多種菊酯類農(nóng)藥殘留的
4、檢測分析。</p><p> 【關(guān)鍵詞】擬除蟲菊酯類農(nóng)藥;殘留;氣相色譜法檢測;水產(chǎn)品</p><p> 【ABSTRACT】A method for determination residues of bifenthrin、phenothrin、cyfluthrin、cypermethrin、fenvalerate and deltamethrin in aquatic produc
5、ts had been developed. Pesticide residues was extracted by hexane:acetone (2:1,v/v), and cleaned up with the florisil column, eluted with diethyl ether: acetone: hexane (2:2:1, v/v/v), the detected by GC-ECD. The results
6、 showed that the recoveries of six pyrethroid insecticides in aquatic products were 73.9-85.0%, RSD為3.4-6.7%. The method was used for detec</p><p> 【KEYWORDS】Pyrethroid pesticide; Residue; Gas chromatograph
7、y; Aquatic products</p><p><b> 目 錄</b></p><p><b> 1.前言3</b></p><p><b> 2.試驗部分4</b></p><p> 2.1.材料與方法4</p><p>
8、 2.1.1.試劑4</p><p> 2.1.2.儀器4</p><p> 2.2.樣品制備4</p><p> 2.3.氣相色譜條件4</p><p> 2.4.標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制4</p><p> 2.5.回收率的計算4</p><p> 2.6.檢測
9、限和定量限的測定4</p><p> 3.結(jié)果與討論4</p><p> 3.1.標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制4</p><p> 3.2.精密度實驗5</p><p> 3.3.水產(chǎn)品中擬除蟲菊酯類農(nóng)藥的檢測5</p><p> 3.4.檢測限和定量限的測定6</p><p>
10、;<b> 4.結(jié)論8</b></p><p> 致謝錯誤!未定義書簽。</p><p><b> 參考文獻(xiàn)9</b></p><p> 附錄錯誤!未定義書簽。</p><p><b> 前言</b></p><p> 擬除蟲菊酯類
11、農(nóng)藥是新一代廣譜殺蟲劑,它具有高效廣譜、持效長、作用迅速等特點,特別是在處理對有機磷農(nóng)藥已經(jīng)產(chǎn)生抗性的害蟲時有特效,所以得到廣泛的使用[1]。這類農(nóng)藥因其生物活性強、環(huán)境相容性較好等特點,在國際農(nóng)藥市場中約占有20℅的份額,在衛(wèi)生害蟲和農(nóng)作物害蟲防治中占有重要地位。但是目前在對農(nóng)藥檢測環(huán)節(jié)中,人們對具有高毒高殘留的農(nóng)藥如有機磷、六六六、滴滴涕等的殘留檢測工作較為重視,卻常常對擬除蟲菊酯類農(nóng)藥殘留的危害有所忽視,有關(guān)水體及養(yǎng)殖生物中該類農(nóng)
12、藥殘留的檢測鮮有研究報道[2]。然而,近年來在農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中,氯氰菊酯和溴氰菊酯等擬除蟲菊酯類農(nóng)藥在漁業(yè)生產(chǎn)實踐中多用于毒殺雜魚、和有害生物清塘等工作[3-5],但其使用不當(dāng)進(jìn)入水體,便會造成污染,雖然此類物質(zhì)多數(shù)對人類低毒,但對魚、蝦、貝和甲殼類水生生物毒性較大,近期在魚塘污染、死魚事故的報道中菊酯類中毒的比例很高。如氯氰菊酯對魚和水生無脊椎動物就具有較高的毒性,實驗表明通常在低于1 g/L就能對其產(chǎn)生毒性效應(yīng)[6]。因其不溶于水,屬于高
13、親脂性農(nóng)藥的特點,進(jìn)入環(huán)境后容易被油滴或顆粒物吸附,最終沉降在沉積物中。又因存在于沉積物中的農(nóng)藥降解速度非常</p><p> 菊酯類農(nóng)藥分子結(jié)構(gòu)中含有多個不對稱碳原子,因此它包含多種同分異構(gòu)體,同時,水產(chǎn)品與其他植物性食品類相比成分比較復(fù)雜,有蛋白質(zhì)和脂肪含量較高等特點。這些因素對水產(chǎn)品中菊酯類農(nóng)藥殘留的提取、凈化和檢測帶來很大困難[8-10]。</p><p> 目前對菊酯類農(nóng)藥殘
14、留的檢測方法已有一些報道,但主要是針對蔬菜和茶葉等方面,對養(yǎng)殖水環(huán)境,尤其是水生生物中菊酯類農(nóng)藥檢測方法報道的不多,主要有氣相色譜法(GC)、液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜(LC-MS)和氣相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜(GC-MS)等儀器分析方法[11,12],而且由于菊酯類農(nóng)藥各品種之間的極性相差較大,導(dǎo)致在進(jìn)行多殘留檢測時萃取分離過程相對復(fù)雜,在分析之前通常需要進(jìn)行復(fù)雜的樣品前處理,因此,提高水產(chǎn)品中農(nóng)藥殘留檢測的準(zhǔn)確率和效率便需要發(fā)展樣品的前處理技術(shù)。樣
15、品前處理的合理應(yīng)該不僅能保證測定結(jié)果的準(zhǔn)確性、可靠性及其效率,也可以成功的減少樣品中殘留農(nóng)藥對色譜柱和檢測分析儀器的污染。同時,食品中一般農(nóng)藥的殘留量只在10-6~10-9(w/w)甚至更低的水平,這也對樣品的前處理技術(shù)的精確度提出了更高的要求[13]。固相萃?。⊿olid Phase Extraction,簡稱SPE)是一種用途廣泛而且越來越受歡迎的樣品前處理技術(shù)。SPE是利用固體吸附劑將液體樣品中的目標(biāo)化合物吸附,與樣品的集體和干擾
16、化合物分離,然后再用洗脫液洗脫或加熱解吸附,達(dá)到分離的目的,其操作使用具有安全、快速、操作簡便、重現(xiàn)性</p><p> 本論文采用正己烷:丙酮(v/v,1:1)對水產(chǎn)樣品中的6種擬除蟲菊酯類農(nóng)藥進(jìn)行提取后,經(jīng)弗羅里圭土固相萃取法(Florisil-solid phase extraction)純化,采用氣相色譜電子俘獲檢測器(GC-ECD)進(jìn)行檢測,建立水產(chǎn)品中6種擬除蟲菊酯類農(nóng)藥殘留的檢測方法。 </
17、p><p><b> 試驗部分</b></p><p><b> 材料與方法</b></p><p><b> 試劑</b></p><p> 弗羅里土硅土固相萃取小柱購自上海安譜科學(xué)儀器有限公司,正己烷、丙酮、乙醚、異辛烷購自國藥集團化學(xué)試劑有限公司,農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)品聯(lián)苯菊酯、
18、苯醚菊酯、氟氯氰菊酯、氯氰菊酯、氰戊菊酯和溴氰菊酯,標(biāo)準(zhǔn)樣品純度均高于99%。</p><p> 樣品準(zhǔn)備:取魚的可食部分,用均質(zhì)機破碎混勻,放置冰箱-l8℃冷凍保存。</p><p><b> 儀器</b></p><p> 高效氣相色譜(GC-2010,島津),載氣:氮氣,渦旋混合器(XW-80A,上海),固相萃取裝置(Supelco
19、,American),氮氣吹干儀(HGC-12A,上海安譜)。 </p><p><b> 樣品制備</b></p><p> 稱取2.0 g魚樣品置于100 mL具塞玻璃離心瓶中,加人10 mL正己烷:丙酮(V/V,1:1)作為提取劑;漩渦2 min混勻,采用超聲波提取30 min,2100 rpm離心5min,取上層有機相,過無水硫酸鈉,再重復(fù)上述操作提取兩次
20、,合并提取液于雞心瓶中,40℃條件下旋轉(zhuǎn)蒸至2 mL,加入到Florisil固相萃取中,用8mL乙醚:丙酮:正己烷(2:2:1,v/v/v)洗脫,收集人雞心瓶,于40 °C水浴旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至干,并重新溶于1 mL丙酮:異辛烷(1:9,v/v)中,0.22 μm濾膜過濾后,轉(zhuǎn)入色譜進(jìn)樣瓶,待氣相色譜分析。</p><p><b> 氣相色譜條件</b></p><p
21、> 使用GC-ECD分析檢測樣品,操作使用帶有Supel SPB-5(30 m × 0.25 mm I.D. × 0.25 μm 膜厚度)毛細(xì)管柱的氣象色譜分析(日本島津公司)、氮氣作為運載氣體和補充氣體,流動速度分別設(shè)為1.0 mL/min。用分離模式注入標(biāo)準(zhǔn)溶液和樣品萃取物,注入溫度保持在240 °C,烘箱溫度保持在240 °C,持續(xù)3 min,然后以5 °C/min的速度加
22、熱到290 °C,持續(xù)5 min,電子俘獲檢測器(ECD)溫度設(shè)為320 °C.</p><p><b> 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制</b></p><p> 分別準(zhǔn)確稱取取聯(lián)苯菊酯、苯醚菊酯、氟氯氰菊酯、氯氰菊酯、氰戊菊酯和溴氰菊酯10.0 mg,置于10 mL容量瓶中,用丙酮、乙腈溶解并定容至刻度,搖勻,作為標(biāo)準(zhǔn)貯備液。進(jìn)一步精密量取上述溶液,制備濃
23、度(除苯醚菊酯,增大10倍)500 ng/g、250 ng/g、100 ng/g、50 ng/g、10 ng/g的對照品標(biāo)準(zhǔn)也,進(jìn)樣1μL,繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線并計算回歸方程。</p><p><b> 回收率的計算 </b></p><p> 取空白魚樣品,定量加入6種擬除蟲菊酯類農(nóng)藥,配制0.01 mg kg-1、0.05 mg kg-1和0.1 mg kgL-13個
24、濃度,混勻,靜置。按照“2.2樣品制備方法”處理后,GC-ECD檢測,根據(jù)峰面積計算回收率及精密度。 </p><p> 檢測限和定量限的測定</p><p> 將6種擬除蟲菊酯類農(nóng)藥分別加入空白樣品中,將樣品按“2.2樣品制備”方法處理后,GC-ECD檢測,按信噪比為S/N=3、S/N=10,確定最低檢測限和定量限。</p><p><b> 結(jié)果
25、與討論 </b></p><p><b> 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制</b></p><p> 通過氣相色譜法測定峰面積,得到標(biāo)準(zhǔn)曲線和回歸方程,如表1、圖1,聯(lián)苯菊酯、氟氯氰菊酯、氯氰菊酯、氰戊菊酯、溴氰菊酯菊酯類農(nóng)藥在0.01-0.5 mg/kg范圍內(nèi)線性顯著,苯醚菊酯在0.1-5.0 mg/kg范圍內(nèi)線性顯著其相關(guān)系數(shù)r2值大于0.9910,并具有較好的色
26、譜分離效果。</p><p> 表1 6種擬除蟲菊酯類農(nóng)藥的線性方程及相關(guān)系數(shù)(n=3)</p><p> 圖1 聯(lián)苯菊酯、苯醚菊酯(0.5 mg/kg)、氟氯氰菊酯、氯氰菊酯、氰戊菊酯、溴氰菊酯的標(biāo)準(zhǔn)氣相色譜圖(0.05 mg L-1)。</p><p><b> 精密度實驗</b></p><p> 把含量為
27、0.05 mg/kg的聯(lián)苯菊酯、氟氯氰菊酯、氯氰菊酯、氰戊菊酯、溴氰菊酯,0.5 mg/kg的苯醚菊酯六種擬除蟲菊酯類農(nóng)藥混合標(biāo)準(zhǔn)溶液重復(fù)近樣5次,測定峰面積,聯(lián)苯菊酯、苯醚菊酯、氟氯氰菊酯、氯氰菊酯、氰戊菊酯、溴氰菊酯的平均峰面積分別為11258.5、4232.8、16208.5、15784.7、14907.8、8633.2, 相對標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)為2.3%、3.4%、2.1%、2.4%、2.6%、3.1%(n=5),標(biāo)明儀器具有較
28、好的精密度,可用于水產(chǎn)品中6種擬除蟲菊酯類農(nóng)藥的同時檢測。</p><p> 水產(chǎn)品中擬除蟲菊酯類農(nóng)藥的檢測</p><p> 魚類等生物樣品基質(zhì)復(fù)雜,含有豐富的蛋白等生物基質(zhì),因此,在對魚等水產(chǎn)樣品中的殘留違禁藥物進(jìn)行分析前,為了降低復(fù)雜生物基質(zhì)對檢測的干擾,提高樣品檢測的靈敏度,通常需要復(fù)雜的樣品前處理,本論文選擇Florisil-SPE固相萃取柱,對魚樣品中的擬除蟲菊酯類農(nóng)藥分離
29、、純化,有效的消除了魚樣品中復(fù)雜基質(zhì)對6種擬除蟲菊酯類農(nóng)藥檢測的干擾,GC-ECD檢測方法獲得了較高的靈敏度和準(zhǔn)確性。結(jié)果如圖2、表2,對0.01 mg kg-1、0.05 mg kg-1、0.1 mg kg-1 三個添加濃度,6種擬除蟲菊酯類農(nóng)藥的回收率達(dá)73.9%以上,RSD小于6.7%,結(jié)果標(biāo)明建立的Florisil-SPE結(jié)合GC-ECD檢測方法具有較高的準(zhǔn)確性,可用于魚類樣品中相關(guān)擬除蟲菊酯類農(nóng)藥殘留的定量分析。 </p
30、><p> 圖2 魚樣品的色譜圖</p><p> 表2 魚樣品的回收率和相對標(biāo)準(zhǔn)偏差</p><p> 檢測限和定量限的測定</p><p> 檢測限:指的是在所給的成都范圍內(nèi),用一分析法能從樣品中檢測出待測樣品的最小的濃度或者是最小的量。它不需要經(jīng)過定量的測定,是定性的測定。他只需要確定在所測的樣品中存在著濃度比空白高的物質(zhì)就可以。當(dāng)
31、被測的一組的亮比檢測限高的時候,就可以被檢驗出來,但是不一定準(zhǔn)確[24]。</p><p> 定量限:指的是用定量測定的方法測定物質(zhì)所得到的最低量。與檢測限相比,定量限的測定結(jié)果有一定的準(zhǔn)確性和精密性。定量限可以體現(xiàn)出其所用的分析方法具備靈敏的定量測定的能力。</p><p> 信噪比S/N為3時,魚樣品中聯(lián)苯菊酯、苯醚菊酯、氟氯氰菊酯、氯氰菊酯、氰戊菊酯、溴氰菊酯的最低檢測限為16.
32、50、19.47、17.49、16.50、19.47、17.49 μg/kg,S/N為10時,最低定量限為700.59、23.43、27.72、700.59、23.43、27.72 μg/kg,聯(lián)苯菊酯、氟氯氰菊酯、氯氰菊酯、氰戊菊酯、溴氰菊酯的檢測限和定量限滿足水產(chǎn)品中6種SAs殘留的定量測定要求。見表3</p><p> 表3 檢測限和定量限</p><p><b> 結(jié)
33、論</b></p><p> 本實驗選擇10 ml正己烷:丙酮(v/v,2:1)混合溶液作為提取液,選用活化后的Florisil小柱,8 ml乙醚:丙酮:正己烷(v/v/v,2:2:1)混合溶液作為洗脫液,建立水產(chǎn)樣品中6種擬除蟲菊酯類農(nóng)藥的殘留檢測方法,6種擬除蟲菊酯類農(nóng)藥在水產(chǎn)樣品中的添加回收率為73.9-85.0%,RSD為3.4-6.7%,本方法可用于水產(chǎn)品中多種菊酯類農(nóng)藥殘留的檢測分析。&
34、lt;/p><p> 本實驗建立的檢測方法與簡單參照有機磷、六六六、滴滴涕等農(nóng)藥殘留檢測的標(biāo)準(zhǔn)方法相比,操作簡單,并且具有較高的靈敏度、精密度和準(zhǔn)確度。然而,雖然氣相色譜法作為檢測菊酯類農(nóng)藥殘留中的高效方法,具有其他技術(shù)所沒有的優(yōu)勢,但對樣品前處理,尤其凈化過程要求很高,并且存在對待許多熱穩(wěn)定性差或沸點太高的菊酯類農(nóng)藥難以檢測等問題[25,26]。同時,由于擬除蟲菊酯類農(nóng)藥是一大類物質(zhì),理化性質(zhì)也存在較大差異[2]
35、。因此,本實驗使用氣相色譜法的檢測方法適用于多數(shù)市場上主要使用的擬除蟲菊酯類農(nóng)藥的殘留檢測,對于其他擬除蟲菊酯類農(nóng)藥在水產(chǎn)品中殘留的檢測方法仍需進(jìn)行進(jìn)一步的研究實驗。</p><p><b> 參考文獻(xiàn)</b></p><p> 胡志強,許良忠,任雪景,等.?dāng)M除蟲菊酯類殺蟲劑的研究進(jìn)展[J].青島化工學(xué)院學(xué)報,2002,23(1):48-51.</p>
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