傳染性脾腎壞死病毒(ISKNV)ORF071L基因的初步研究.pdf

1、近年來世界范圍出現(xiàn)的由虹彩病毒感染引起的水生動物高發(fā)病率和高死亡率現(xiàn)象給水產(chǎn)業(yè)造成了重大經(jīng)濟(jì)損失，引起了病毒學(xué)家們的熱切關(guān)注。鱖(Siniperca chuatsi傳染性脾腎壞死病毒(Infectious spleen and kidney necrosisvirus，ISKNV)是近年來廣東省養(yǎng)殖鱖的爆發(fā)性流行病的主要病原，它是一種虹彩病毒,脾和腎是其主要感染器官，其特征是造成受染細(xì)胞腫大。ISKNV是腫大細(xì)胞病毒屬中首個全基因組測序

2、的病毒。
　　 本文選取基因ORF071L為研究對象，經(jīng)實驗室前人的工作經(jīng)驗預(yù)測為晚期基因，可能與病毒結(jié)構(gòu)有關(guān)，所表達(dá)的蛋白為高豐度表達(dá)蛋白。通過生物信息學(xué)分析后，首先克隆該基因并構(gòu)建重組質(zhì)粒載體pMAL-c2X-ORF071L(B)，制備其多克隆抗體，繼而進(jìn)行后續(xù)研究。在對鱖魚活體進(jìn)行免疫保護(hù)實驗以及對鱖魚細(xì)胞(MFF-1)的抗體中和實驗中，免疫保護(hù)試驗效果并不十分理想，保護(hù)作用不明顯。但在抗體中和實驗中，ORF071L多克隆

3、鼠抗在10-1～10-3稀釋倍數(shù)時能夠?qū)FF-1細(xì)胞起到較為明顯的保護(hù)作用。通過轉(zhuǎn)錄時相譜分析該基因的表達(dá)時間。最后將ORF071L重組到真核表達(dá)載體pEGFP-N3上，重組質(zhì)粒pEGFP-N3-ORF071 L轉(zhuǎn)染FHM細(xì)胞后通過激光共聚焦倒置顯微鏡觀察，發(fā)現(xiàn)ORF071L較特異地定位于細(xì)胞質(zhì)中。通過以上實驗對ORF071L基因進(jìn)行了一個初步的研究，對于其是否較特異地定位于某個的細(xì)胞器以及與細(xì)胞中與其相關(guān)聯(lián)蛋白的作用，及其在病毒中所