黃芩毛狀根培養(yǎng)體系的研究-Ⅱ.pdf

1、黃芩（Scutellaria baicalensis Georgi）為唇形科草本植物，是一味傳統(tǒng)的常用中藥。主產(chǎn)于河北、遼寧、陜西、山東、內(nèi)蒙古等地。其根性寒，味苦，有清熱燥濕、瀉火解毒、止血、安胎等功效?，F(xiàn)代藥理研究表明其主要有效成分黃芩苷（baicalin）具有抗腫瘤、抗HIV等作用。以其開發(fā)新的藥物前景將十分廣闊，但因黃芩為多年生草本植物，生長(zhǎng)較慢，限制黃芩產(chǎn)品深度開發(fā)。利用現(xiàn)代生物技術(shù)建立黃芩毛狀根培養(yǎng)體系是解決中藥資源可持續(xù)發(fā)

2、展的有效途徑之一。
　　 本論文主要對(duì)黃芩毛狀根培養(yǎng)、黃芩苷積累規(guī)律、黃芩毛狀根放大培養(yǎng)及高效液相法測(cè)定黃芩毛狀根中黃芩苷含量等相關(guān)內(nèi)容進(jìn)行了研究。研究結(jié)果如下：
　　 1.高效液相色譜法測(cè)定黃芩毛狀根中黃芩苷含量的色譜條件為：色譜柱：化學(xué)鍵合型十八烷基柱（SciC18色譜柱）；流動(dòng)相：甲醇：水：磷酸=50：50：0.2；檢測(cè)波長(zhǎng)274nm；柱溫：室溫；流速：1mL/min。在該條件下，黃芩苷的保留時(shí)間為9min，在12

3、～72μg/mL內(nèi)線性關(guān)系良好（r=0.9992），平均加樣回收率為99.32％，RSD=1.36％。
　　 2.分別以蔗糖、葡萄糖和果糖為碳源研究了碳源對(duì)黃芩毛狀根的生長(zhǎng)和黃芩苷積累的影響。研究表明：三種碳源，黃芩毛狀根生長(zhǎng)曲線均呈“S”型；蔗糖最有利于黃芩毛狀根生物量的積累，生長(zhǎng)量（干重）最高達(dá)13.1g/L，黃芩苷含量為8.16％；果糖最適合黃芩苷的合成，黃芩苷含量最高達(dá)10.66％，生長(zhǎng)量為11.4g/L。
　　

4、 3.溫度對(duì)黃芩毛狀根培養(yǎng)的影響研究表明：28℃培養(yǎng)，有利于生物量積累，最高達(dá)12.80g/L（干重），20℃培養(yǎng)明顯有利于黃芩苷的積累，黃芩苷含量最高達(dá)8.80％。毛狀根的最大生物量和次生代謝產(chǎn)物積累并不在同一溫度。通過對(duì)變溫培養(yǎng)條件優(yōu)化研究結(jié)果顯示，毛狀根的最大生物量和次生代謝產(chǎn)物積累均有較大提高，結(jié)果：毛狀根生長(zhǎng)量（干重）為13.3g/L，黃芩苷含量為12.58％，黃芩苷產(chǎn)量為1.62g/L，其產(chǎn)量比28℃恒溫培養(yǎng)提高了66.34

5、％。
　　 4.分別研究了誘導(dǎo)子、激素、前體及補(bǔ)加培養(yǎng)基對(duì)黃芩毛狀根中黃芩苷產(chǎn)量的影響。研究表明：以黑曲霉誘導(dǎo)子和米曲霉誘導(dǎo)子濃度為40mg/L和20mg/L時(shí)，CO2+濃度為15.3×10-5mmol/L時(shí)，黃芩苷產(chǎn)量較對(duì)照培養(yǎng)分別提高了9.18％、10.20％和13.27％；生長(zhǎng)素NAA和細(xì)胞分裂素6-BA的濃度為0.4mg/L和0.2mg/L時(shí)，黃芩苷產(chǎn)量較對(duì)照培養(yǎng)分別提高了25.74％和24.75％；添加0.4mmol/

6、L的苯丙氨酸，黃芩苷產(chǎn)量較對(duì)照培養(yǎng)提高了36.63％；補(bǔ)加培養(yǎng)基后毛狀根培養(yǎng)至70d，黃芩苷產(chǎn)量較對(duì)照培養(yǎng)提高了56.44％。
　　 5.黃芩毛狀根放大培養(yǎng)的初步研究表明，毛狀根在氣升反應(yīng)裝置中能迅速生長(zhǎng)，并有效富集黃芩苷。氣升培養(yǎng)55d時(shí)，黃芩苷產(chǎn)量較搖床培養(yǎng)下降了22.41％，提示培養(yǎng)方式的改變對(duì)黃芩苷的的積累有一定的影響，需對(duì)放大培養(yǎng)條件進(jìn)行深入研究。
　　 通過對(duì)黃芩毛狀根生長(zhǎng)和黃芩苷積累的研究，建立了黃芩毛狀根