狹葉松果菊組織培養(yǎng)、毛狀根誘導(dǎo)及其松果菊苷和綠原酸積累的研究.pdf

1、本文對狹葉松果菊組織培養(yǎng)、毛狀根誘導(dǎo)及其松果菊苷和綠原酸積累進(jìn)行了研究。結(jié)果如下： 1．狹葉松果菊的組織培養(yǎng)和植株再生：以無菌苗葉片及葉柄為材料通過L 9(3<'4>)正交試驗(yàn)篩選出最佳的愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基：MS+6BA0.5mg/L+NAA1.0mg/L；最佳的叢芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基：MS+6BA1.0mg/L+NAA0.5mg/L．再生芽經(jīng)附加IBA0.5mg/L的1/2MS培養(yǎng)基生根后移栽成活獲得再生植株。采用HPLC方法分析了狹

2、葉松果菊組培苗各部位中次生代謝產(chǎn)物松果菊苷和綠原酸的含量，結(jié)果表明組培苗根中松果菊苷和綠原酸的含量高于地上部分，愈傷組織中含量最低，幾乎檢測不到松果菊苷的存在。 2．狹葉松果菊的毛狀根誘導(dǎo)：利用發(fā)根農(nóng)桿菌A4、R1000誘導(dǎo)得到狹葉松果菊毛狀根，建立狹葉松果菊毛狀根誘導(dǎo)體系。狹葉松果菊外植體被A4、R1000兩種發(fā)根農(nóng)桿菌感染后，20d后，外植體傷口處陸續(xù)分化生長出白色的毛狀根。PCR實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，Ri質(zhì)粒的T-DNA已整合在狹

3、葉松果菊毛狀根的基因組中。利用HPLC分別檢測了A4-1、A4-2、R1000-1、R1000-24個(gè)單克隆毛狀根培養(yǎng)系中松果菊苷和綠原酸的含量，結(jié)果表明不同株系次生代謝物含量差異較大．其中A4-2毛狀根培養(yǎng)系中松果菊苷和綠原酸的含量分別達(dá)到0.16 mg/gDW和0.82mg/gDw，均超過了原植物的0.15 mg/gDw和0.68 mg/gDW。R1000-2毛狀根培養(yǎng)系的綠原酸含量0.94mg/gDW，為原植物的1.4倍。

4、 3．狹葉松果菊根懸浮培養(yǎng)體系的建立：以1/2MS為基本培養(yǎng)液，通過在培養(yǎng)液中添加不同的生長激素，試驗(yàn)結(jié)果表明添加了0.5mg/L的IBA根長勢最好，優(yōu)于添加NAA及2，4-D的培養(yǎng)液，后兩者培養(yǎng)過程中愈傷化嚴(yán)重。通過在根懸浮培養(yǎng)液中添加不同濃度苯丙氨酸(0，5，10，15，20，25mg/L)的實(shí)驗(yàn)表明苯丙氨酸有促進(jìn)組培苗根生長的作用，其中5mg/L苯丙氨酸促進(jìn)生根效果最明顯。經(jīng)HPLC檢測添加20mg/L的苯丙氨酸最有利于松果菊苷的