兩種丹參毛狀根的快速培養(yǎng)及其生物反應(yīng)器初步研究.pdf

1、丹參（Salvia miltiorrhiza Bunge）為唇形科植物，以根入藥，具有很高的藥用價(jià)值，已經(jīng)廣泛應(yīng)用于冠心病和心絞痛等心血管疾病的預(yù)防和治療。丹參是我國(guó)傳統(tǒng)大宗藥材之一，被認(rèn)為是中藥材研究的模式植物。其有效成分主要包括水溶性的酚酸類(lèi)和脂溶性的丹參酮類(lèi)兩類(lèi)成分。本研究以?xún)煞N丹參毛狀根為材料，對(duì)毛狀根的快速培養(yǎng)及其生物反應(yīng)器進(jìn)行初步的研究。
　　1.研究了7種液體培養(yǎng)基WP、6,7-V、SJ-1、B5、N6、改良Whit

2、e和MS對(duì)藏丹參和紫花丹參毛狀根生長(zhǎng)以及有效成分積累的影響，發(fā)現(xiàn)B5培養(yǎng)基培養(yǎng)后的藏丹參毛狀根生長(zhǎng)狀況最佳，其次是WP和6，7-V；MS培養(yǎng)基對(duì)紫花丹參毛狀根生長(zhǎng)培養(yǎng)狀況最佳，其次是B5。采用SJ-1培養(yǎng)基培養(yǎng)的藏丹參毛狀根中的咖啡酸和丹參酮類(lèi)化合物產(chǎn)量和含量最高，改良White培養(yǎng)基培養(yǎng)的藏丹參毛狀根中的迷迭香酸和丹酚酸B產(chǎn)量和含量均為最高。MS培養(yǎng)基培養(yǎng)后的紫花丹參毛狀根生長(zhǎng)狀況最佳，B5培養(yǎng)基培養(yǎng)的紫花丹參毛狀根中的咖啡酸產(chǎn)量和含

3、量最高，改良White培養(yǎng)基培養(yǎng)的迷迭香酸和丹酚酸B含量最高。SJ-1培養(yǎng)基培養(yǎng)后所得的毛狀根中二氫丹參酮Ι、隱丹參酮含量最高，改良White培養(yǎng)基次之；改良White培養(yǎng)基培養(yǎng)后所得的毛狀根中丹參酮Ⅰ、丹參酮ⅡA含量最高，SJ-1培養(yǎng)基次之。
　　2.研究了半乳糖、果糖、乳糖、葡萄糖、阿拉伯糖和蔗糖等6種碳源對(duì)藏丹參和紫花丹參毛狀根生長(zhǎng)以及有效成分積累的影響，結(jié)果表明半乳糖和蔗糖對(duì)藏丹參毛狀根生長(zhǎng)最為有利；半乳糖培養(yǎng)基培養(yǎng)的藏丹

4、參毛狀根中的丹酚酸類(lèi)成分產(chǎn)量和含量最高；果糖使二氫丹參酮I、隱丹參酮、丹參酮I的產(chǎn)量和含量顯著增加，蔗糖培養(yǎng)基培養(yǎng)后的藏丹參中丹參酮IIA含量最高，因此果糖和蔗糖可用于培養(yǎng)提取丹參酮單一成分的原料。半乳糖對(duì)紫花丹參毛狀根生長(zhǎng)最為有利，其次是果糖；果糖和葡萄糖明顯促進(jìn)了丹酚酸類(lèi)成分的積累增加，卻降低了丹參酮類(lèi)成分的積累，適合用于培養(yǎng)丹酚酸類(lèi)有效成分的提取原料；乳糖和阿拉伯糖則顯著促進(jìn)了丹參酮的積累，可用于培養(yǎng)丹參酮類(lèi)有效成分的提取原料。<

5、br>　　3.研究了水解乳蛋白、蛋白胨、牛肉浸膏、酪蛋白、酵母提取物和NH4NO3等6種氮源對(duì)丹參毛狀根生長(zhǎng)及有效成分積累的影響，發(fā)現(xiàn)NH4NO3對(duì)藏丹參毛狀根和紫花丹參毛狀根生長(zhǎng)促進(jìn)最為顯著，水解乳蛋白對(duì)兩種丹參毛狀根丹酚酸類(lèi)成分積累最為有利，而YE對(duì)兩種丹參毛狀根丹參酮類(lèi)成分積累最為有利。
　　4.設(shè)計(jì)并加工了氣升式生物反應(yīng)器，罐體為透明玻璃，放置于避光房間內(nèi)，并采用空調(diào)控制溫度25±1℃，供氣泵進(jìn)行不間斷供氣，氣體流量計(jì)控制

6、供氣速度。初步研究表明，采用氣升式生物反應(yīng)器培養(yǎng)紫花丹參毛狀根，其生長(zhǎng)速度明顯較快，培養(yǎng)24天，鮮重提高了26.4倍，而采用100 mL錐形瓶培養(yǎng)毛狀根，其鮮重一般提高10-15倍。丹酚酸類(lèi)成分和丹參酮類(lèi)成分含量顯著低于100 mL錐形瓶中毛狀根的含量，如丹酚酸B含量不足錐形瓶培養(yǎng)的30％，丹參酮IIA含量不足錐形瓶培養(yǎng)的5%。說(shuō)明盡管氣升式生物反應(yīng)器培養(yǎng)紫花丹參毛狀根生長(zhǎng)速度較快，但其有效成分積累明顯較慢，如何提高反應(yīng)器培養(yǎng)毛狀根中有