斑馬魚中一個母源轉(zhuǎn)錄因子調(diào)控軸旁中胚層圖式形成.pdf

1、胚胎形體模式形成中的軸-軸旁中胚層分化是脊椎動物特有的背腹分化事件。但軸-軸旁中胚層區(qū)域的劃分不能用已知的，建立在合子信號梯度基礎(chǔ)上的背腹分化機制來解釋。在斑馬魚中，spt以細胞自主性方式調(diào)控軸旁中胚層分化，flh則通過抑制spt的異位表達而啟動軸中胚層分化。但二者的最初表達區(qū)域在胚盤邊緣區(qū)域是重疊的。因此，限定軸中胚層調(diào)控關(guān)鍵基因flh和軸旁中胚層發(fā)育調(diào)控關(guān)鍵基因spt的表達區(qū)域是軸-軸旁中胚層圖式形成的前提條件。我們在前期工作發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)

2、錄因子Vsx1具有直接抑制flh表達而保護spt表達的功能。本研究進一步分析了Vsx1在調(diào)控斑馬魚軸-軸旁中胚層圖式形成中的作用和分子機制，主要研究結(jié)果和結(jié)論如下:
　　 1.通過整胚免疫組織化學(xué)定位分析，證明了母源Vsx1在卵裂期即在胚胎預(yù)定的腹側(cè)區(qū)域表達。
　　 2.利用特異性抑制轉(zhuǎn)錄的MO和抑制剪接的MO證明母源而非合子的vsx1mRNA在胚胎軸旁中胚層形成中起關(guān)鍵的調(diào)控作用。
　　 3.通過整胚原位雜交確

3、定了母源Vsx1在腹側(cè)區(qū)域通過抑制flh的表達而保護spt表達，從而確定軸旁中胚層區(qū)域。
　　 4.發(fā)現(xiàn)母源Vsx1對維持原腸期胚胎腹側(cè)的特性也有重要作用，但對已知的維持胚胎腹部特性的Wnt8，Bmp2b信號途徑?jīng)]有影響，提示斑馬魚胚胎腹側(cè)特性的維持可能受兩個平行的途徑調(diào)控。
　　 5.通過將Vsx1蛋白的N端區(qū)域分別用果蠅EngrailedN端的轉(zhuǎn)錄抑制結(jié)構(gòu)域和病毒Vp16的轉(zhuǎn)錄激活結(jié)構(gòu)域替換，分析En-Vsx1和VP

4、16-Vsx1融合蛋白對胚胎發(fā)育表型的影響和對flh表達的影響，證明了Vsx1是一個轉(zhuǎn)錄抑制因子。
　　 6.通過突變分析，確定了Vsx1在flh近端啟動子上的特異性結(jié)合位點，證明了只有該位點介導(dǎo)了Vsx1對flh的轉(zhuǎn)錄抑制。
　　 7.確定了Vsx1在靶基因啟動上特異性結(jié)合位點的序列特性。通過突變分析證明了除homeodomain的結(jié)合基序TAATTN外，至少還有一個CCC序列是Vsx1特異性識別和結(jié)合靶點所必需的。C