辣椒一個(gè)新的WRKY轉(zhuǎn)錄因子的克隆及其功能初步分析.pdf

1、辣椒是一種病害發(fā)生較為嚴(yán)重的重要茄科蔬菜,頻繁的病害常常導(dǎo)致辣椒產(chǎn)量和品質(zhì)的降低。培育與推廣應(yīng)用抗病品種是解決辣椒病害問題的根本技術(shù)對(duì)策,對(duì)辣椒抗病機(jī)制的闡明有利于辣椒抗病遺傳改良有效技術(shù)策略的制訂。大量的研究表明,病原菌等生物逆境及非生物逆境脅迫可激活植物對(duì)逆境的抗性,而WRKY、ERF、MYB、NAC等轉(zhuǎn)錄因子在防御反應(yīng)的誘導(dǎo)中起重要的調(diào)節(jié)作用。分離、鑒定參與特定逆境脅迫應(yīng)答的轉(zhuǎn)錄因子并開展其功能鑒定是揭示植物抗病及抗逆分子機(jī)制的重

2、要途徑。鑒于此,本研究從外源SA處理的辣椒葉片均一化cDNA文庫中分離獲得一個(gè)辣椒WRKY基因家族成員的全長(zhǎng)cDNA,并對(duì)其結(jié)構(gòu)、亞細(xì)胞定位、與W盒結(jié)合活性以及在不同逆境脅迫下的表達(dá)進(jìn)行了初步分析,旨在為進(jìn)一步分析其功能并探討其在植物抗逆基因工程中的應(yīng)用價(jià)值奠定基礎(chǔ)。主要研究結(jié)果如下:
　　 1.克隆得到的CaWRKY經(jīng)生物軟件分析發(fā)現(xiàn)其編碼一個(gè)相對(duì)分子質(zhì)量為37KDa的蛋白,具有WRKY轉(zhuǎn)錄因子典型的WRKYGQK和C2HC鋅

3、指結(jié)構(gòu),并根據(jù)保守域的序列結(jié)構(gòu),將其歸入第三組WRKY基因家族；
　　 2.運(yùn)用基因槍介導(dǎo)的方式將構(gòu)建好的CaWRKY與GFP融合表達(dá)質(zhì)粒導(dǎo)入洋蔥細(xì)胞,結(jié)果顯示CaWRKY為核定位蛋白；
　　 3.構(gòu)建CaWRKY的效應(yīng)質(zhì)粒與含W盒的報(bào)告質(zhì)粒并將其共轉(zhuǎn)入洋蔥細(xì)胞中,利用質(zhì)粒瞬時(shí)表達(dá)分析CaWRKY與W-box的結(jié)合特性,結(jié)果顯示CaWRKY具有W-box結(jié)合特性；
　　 4.轉(zhuǎn)錄激活分析顯示CaWRKY在其C端具

4、有一個(gè)潛在的轉(zhuǎn)錄激活域；
　　 5.運(yùn)用RT-PCR分析CaWRKY辣椒中不同時(shí)期和不同組織的表達(dá),結(jié)果表明,CaWRKY在根、莖、葉等各組織器官中都存在一定的表達(dá)量,而在成熟期的葉片中表達(dá)量最高；通過Real-time PCR分析了CaWRKY在各種非生物脅迫和生物脅迫下辣椒中的表達(dá)模式,結(jié)果表明,CaWRKY受高溫、寒冷、機(jī)械損傷以及辣椒青枯菌誘導(dǎo)后上調(diào)表達(dá),而在干旱、鹽脅迫下表達(dá)變化量較為微弱；CaWRKY受MeJA、SA