一個HSV-1刺激相關(guān)基因的克隆及其功能的初步分析.pdf

1、該實(shí)驗(yàn)的研究重點(diǎn)是分析病毒感染誘導(dǎo)的差異基因所編碼蛋白在細(xì)胞內(nèi)的功能意義,通過HSV-1型病毒刺激KMB-17細(xì)胞后,進(jìn)行差異顯示分析,根據(jù)分析結(jié)果,克隆得到了一個差異基因,命名為HSV-1刺激相關(guān)基因(HSV-1 stimulation related gene 1,hsrg1),經(jīng)GenBank檢索為一未知功能編碼基因,全長1748bp,CDS全長為1641bp,我們將該基因克隆到谷胱甘肽轉(zhuǎn)移酶融合表達(dá)載體(pGEX-5x-1)中,

2、構(gòu)建了pGEX-HSRG1表達(dá)質(zhì)粒,在大腸桿菌BL21中獲得了較高的表達(dá),并采用Glutathione Sepharose4B進(jìn)行親和純化,獲得較高純度的目的蛋白,用該蛋白免疫小鼠后制備的特異抗體,蛋白印跡實(shí)驗(yàn)表明原核表達(dá)的HSRG1能被該抗體特異識別.該抗體在病毒刺激KMB-17細(xì)胞前后的免疫沉淀實(shí)驗(yàn)(IP)中亦表現(xiàn)出較好的特異性,顯示我們所表達(dá)的HSRG1蛋白具有與天然蛋白相同的構(gòu)象.多組織mRNA表達(dá)譜分析表明,hsrg1基因在骨