水稻OsSZF1基因的克隆與其功能初步分析.pdf

1、本文選用粳型旱稻品種“滬旱3號”為模式材料，在本研究室對抗旱QTt。定位的基礎(chǔ)上，采用RT-PCR策略，從抗旱QTL區(qū)間克隆水稻逆境脅迫相關(guān)基因，并進(jìn)行功能驗證。 通過SMART RACE技術(shù)，從EST片段的保守區(qū)，分別獲得OsSZFl基因的3’和5’端序列，利用Vector NTI 8.0將保守區(qū)、3’和5’拼接后得到OsSZF1基因全長cDNA。通過相關(guān)的生物信息分析，獲得一個開放閱讀框，編碼367個氨基酸，3’端有210b

2、p的非翻譯區(qū)，5’端也有182bp的非翻譯區(qū)，具有保守的C3HC4結(jié)構(gòu)，是典型的RING型鋅指蛋白基因。 通過RT-PCR技術(shù)，擴(kuò)增水稻OsSZF1基因開放閱讀框， Southern雜交分析表明OsSZF1基因在水稻基因組中為單拷貝。分別用3種不同濃度梯度的NaCl、脫落酸(ABA)、水楊酸(SA)和甘露醇(Mannitol)和甲基茉莉酸(m-JA)處理水稻幼苗1 h后剪取葉片和根，抽提總RNA反轉(zhuǎn)錄成cDNA為模板，以3’非編

3、碼區(qū)設(shè)計引物，使用熒光定量PCR檢測OsSZF1基因在不同處理的表達(dá)情況，結(jié)果顯示OsSZF1基因受不同處理誘導(dǎo)表達(dá)，以ABA，NaCl的表達(dá)差異最大，水楊酸和甲基茉莉酸低濃度處理就可誘導(dǎo)OsSZF1基因表達(dá)，但隨著處理濃度的升高表達(dá)反而下降，不同濃度甘露醇處理后，OsSZF1基因的表達(dá)量隨著濃度的增加而增加，由此表明水稻OsSZFl基因和植物的抗逆性有關(guān)系，且該基因?qū)Σ煌瑵舛鹊奶幚碛胁煌膽?yīng)答，是ABA依賴的DNA表達(dá)蛋白。