龍眼成花轉(zhuǎn)變與成花逆轉(zhuǎn)的差異蛋白質(zhì)組學(xué)研究.pdf

1、本研究以龍眼正常成花和成花逆轉(zhuǎn)的花芽為研究對(duì)象，運(yùn)用蛋白質(zhì)組學(xué)方法和技術(shù)比較龍眼正常成花和成花逆轉(zhuǎn)花芽的蛋白質(zhì)組變化，應(yīng)用雙向電泳對(duì)花芽蛋白進(jìn)行分離，從2-D凝膠上均檢測(cè)到分離的蛋白質(zhì)點(diǎn)約1000個(gè)，應(yīng)用PDQuest軟件對(duì)凝膠圖譜進(jìn)行分析，獲得65個(gè)表達(dá)量差異在2倍以上的差異蛋白，其中28個(gè)蛋白在龍眼成花逆轉(zhuǎn)花芽中上調(diào)表達(dá)，37個(gè)蛋白下調(diào)表達(dá)。MALDI-TOF-TOF/MS串聯(lián)質(zhì)譜分析和數(shù)據(jù)庫(kù)檢索鑒定了其中41個(gè)差異表達(dá)蛋白，鑒定率

2、為63％。鑒定得到的蛋白中，與龍眼成花逆轉(zhuǎn)關(guān)系密切的物質(zhì)和能量代謝相關(guān)蛋白，轉(zhuǎn)錄和翻譯相關(guān)的蛋白，次生代謝相關(guān)蛋白，調(diào)控相關(guān)蛋白，抗逆相關(guān)蛋白和細(xì)胞骨架蛋白的生物學(xué)功能都得到了討論。通過(guò)對(duì)這些差異蛋白在成花過(guò)程中的功能分析，表明這些蛋白在龍眼成花逆轉(zhuǎn)過(guò)程中的差異表達(dá)可能影響了花芽的正常發(fā)育，進(jìn)而導(dǎo)致了龍眼成花逆轉(zhuǎn)。應(yīng)用RT-PCR和RACE方法克隆其中4個(gè)與龍眼成花逆轉(zhuǎn)關(guān)系密切的差異蛋白的基因：獲得了上調(diào)表達(dá)的調(diào)控因子14-3-3蛋白(

3、登錄號(hào)FJ479618)，細(xì)胞骨架α-微管蛋白(登錄號(hào)FJ479617)，轉(zhuǎn)醛醇酶(登錄號(hào)FJ472991)和下調(diào)表達(dá)的花青素合成酶(登錄號(hào)FJ479616)的完整開(kāi)放閱讀框，4個(gè)基因的全長(zhǎng)cDNA都分別在大腸桿菌中表達(dá)，獲得相應(yīng)外源蛋白，其中14-3-3蛋白和α-微管蛋白經(jīng)過(guò)Western blotting驗(yàn)證確認(rèn)。半定量RT-PCR結(jié)果顯示，ANS和TAL在轉(zhuǎn)錄和翻譯水平上具有同樣表達(dá)差異，TUB和14-3-3在轉(zhuǎn)錄水平上無(wú)明顯差異