波爾山羊GHR基因多態(tài)性研究.pdf

1、生長激素受體基因是公認的調(diào)控動物生長發(fā)育的關(guān)鍵基因之一，其外顯子氨基酸編碼區(qū)引起生長激素受體氨基酸改變的SNP位點，必然會影響生長激素受體結(jié)構(gòu)的改變，從而影響GHR與GH之間的結(jié)合，進而影響動物的生長發(fā)育。本實驗以波爾山羊（202只）為主要研究對象，馬頭山羊為參考對象（20），對生長激素受體基因外顯子4、5、6、7、10進行PCR擴增，并利用PCR-SSCP技術(shù)進行了多態(tài)性的檢測，以期尋找到影響生長激素受體氨基酸組成的SNP位點。

2、>　　 本研究首先根據(jù)GnenBank上山羊GHR基因的序列信息，并運用在線引物設(shè)計軟件Primer3（http：//frodo．wi．mit．edu/）設(shè)計各外顯子相應(yīng)的引物；然后利用PCR技術(shù)擴增目的片段，并通過瓊脂糖凝膠電泳檢測擴增片段是否與目的片段長度相一致；再利用DNA回收試劑盒回收目的片段，混合8-10個樣本進行目的片段序列測定；根據(jù)測定的結(jié)果尋找SNP位點，如果發(fā)現(xiàn)多態(tài)性位點，就可根據(jù)測序的結(jié)果尋找合適的內(nèi)切酶進行多態(tài)性

3、位點的驗證，基因分型以及分型后基因型和性狀間的關(guān)聯(lián)分析等研究。本實驗在測序之中未發(fā)現(xiàn)多態(tài)性位點，為了確定其可靠性，將擴增的目的片段進行了SSCP多態(tài)性分析。
　　 研究結(jié)果如下：
　　 1．exon 4研究結(jié)果：PCR目的片段包含外顯子4所有基因序列，測序結(jié)果與引物設(shè)計參考序列AY739707（Mai and Zwierzchowski 2006）比對顯示，與參考序列外顯子堿基完全相同；PCR-SSCP檢測也顯示本研究的

4、樣本內(nèi)未發(fā)現(xiàn)基因多態(tài)性位點。
　　 2．exon 5研究結(jié)果：根據(jù)GeneBank序列DQ179241自行設(shè)計引物，該引物的目的片段包含了外顯子5所有的基因序列，擴增目的片段長度與預(yù)測長度一致。
　　 3．exon 6研究結(jié)果：GeneBank序列DQ179242自行設(shè)計引物，外顯子6全部序列均包含在目的片段內(nèi)。目的片段長度與預(yù)測一致。
　　 4．exon 7研究結(jié)果：根據(jù)序列DQ179243設(shè)計引物，外顯子序列