絨山羊絨毛生長(zhǎng)相關(guān)基因的篩選、鑒定和多態(tài)性分析.pdf

1、絨山羊是重要的絨用經(jīng)濟(jì)動(dòng)物，其絨毛生長(zhǎng)具有較強(qiáng)的季節(jié)性，但不同品種之間有很大的差異，大多數(shù)絨山羊在非長(zhǎng)絨季節(jié)（5-8月份）不長(zhǎng)絨，而遼寧絨山羊一些品系可以常年長(zhǎng)絨（6月開始長(zhǎng)絨）。埋植褪黑激素可以促進(jìn)絨山羊在非長(zhǎng)絨季節(jié)長(zhǎng)絨，從而達(dá)到四季長(zhǎng)絨的目的。本研究以內(nèi)蒙古白絨山羊?yàn)橹饕芯繉?duì)象，采用分子標(biāo)記和基因芯片技術(shù)，從候選基因和差異表達(dá)基因篩選入手，研究絨山羊產(chǎn)絨經(jīng)濟(jì)性狀的遺傳多態(tài)性和非長(zhǎng)絨季節(jié)埋植褪黑激素絨山羊皮膚組織差異表達(dá)基因，初步探

2、討促進(jìn)絨山羊絨毛生長(zhǎng)的因素及其分子調(diào)控機(jī)理。
　　1、絨山羊內(nèi)分泌激素類基因SNP分析
　　應(yīng)用PCR-SSCP和DNA測(cè)序技術(shù)，以內(nèi)蒙古阿爾巴斯型、阿拉善型、二郎山型以及罕山白絨山羊4個(gè)品種（系）共456個(gè)樣本為實(shí)驗(yàn)材料，分析PRL、PRLR、MLTR1a、MLTR1b、IGF-I和TG6個(gè)候選基因共16個(gè)位點(diǎn)的遺傳多態(tài)性，結(jié)果表明：
　?。?）在絨山羊PRL基因Exon5區(qū)域P2引物位點(diǎn)存在X76049:g.576

3、bp處C-A突變，該突變導(dǎo)致第176個(gè)密碼子CCC變成ACC，從而使脯氨酸變成蘇氨酸（Pro-Thr）,該位點(diǎn)SNP對(duì)絨山羊絨厚度存在顯著影響(P＜0.01)，同時(shí)還對(duì)阿爾巴斯絨山羊產(chǎn)羔數(shù)存在邊際顯著影響(P=0.055)；在PRLR基因Exon10區(qū)域P3引物位點(diǎn)存在HQ266606:g.1076bp處T-C突變，該突變導(dǎo)致第359個(gè)密碼子CTT變成CCT，從而使亮氨酸變成脯氨酸（Lue-Pro），該位點(diǎn)SNP對(duì)阿爾巴斯絨山羊羊絨細(xì)度

4、存在顯著影響(P＜0.05)；
　?。?）在絨山羊MLTR1b基因Exon2區(qū)域P8引物位點(diǎn)存在NM_001206907:g.648bp處C-G突變，該突變沒有導(dǎo)致氨基酸的改變，還存在NM_001206907:g.665bp處G-A，該突變導(dǎo)致第223個(gè)密碼子CGC變成CAC，從而使精氨酸變成組氨酸(Arg-His)，該位點(diǎn)SNP對(duì)絨山羊產(chǎn)絨量有顯著影響（P＜0.05）。同時(shí)，該多態(tài)位點(diǎn)基因型與年齡互作效應(yīng)對(duì)絨山羊絨厚度有顯著影響

5、（P＜0.05）；MLTR1b基因Exon2區(qū)域P9引物位點(diǎn)存在NM_001206907:g.1015bp處G-A突變，該突變導(dǎo)致第339個(gè)密碼子GGC變成AGC，從而使甘氨酸變成絲氨酸(Gly-Ser)，該位點(diǎn)SNP與年齡互作效應(yīng)對(duì)絨山羊絨細(xì)度存在邊際顯著影響（P=0.056）；這兩個(gè)位點(diǎn)多態(tài)對(duì)絨山羊產(chǎn)羔數(shù)、羔羊初生重等繁殖性狀均無顯著影響（P＞0.05）
　?。?）在絨山羊TG基因Exon9區(qū)域P14引物位點(diǎn)存在NM_1738

6、83:g.1895bp處C-T突變，該突變導(dǎo)致第632個(gè)密碼子GCG變成GTG，從而使丙氨酸變成纈氨酸（Ala-Val）；在Exon11區(qū)域P16引物位點(diǎn)存在NM_173883:g.2849bp處G-A突變，該突變導(dǎo)致第950個(gè)密碼子CGC變成CAC，從而使精氨酸變成組氨酸（Arg-His）。這兩個(gè)位點(diǎn)SNP對(duì)絨山羊體重、產(chǎn)羔數(shù)和產(chǎn)絨性狀均無顯著影響（P＞0.05）。
　　2、絨山羊皮膚差異表達(dá)基因的篩選、鑒定和特征分析
　

7、?。?）通過基因芯片技術(shù)篩選絨山羊在非長(zhǎng)絨期埋植MLT促進(jìn)羊絨生長(zhǎng)的相關(guān)基因。篩選出差異表達(dá)的基因95個(gè)，其中61個(gè)表達(dá)上調(diào)、34個(gè)下調(diào)。這些異常表達(dá)的基因按照功能分類,參與組成細(xì)胞成分的基因占18.33％，參與分子功能的基因占47.78%，參與生物學(xué)過程的基因占33.89%。
　?。?）Pathway信號(hào)通路分析表明：差異基因共參與了55條信號(hào)通路，其中CTNNB1基因參與的Wnt信號(hào)通路，CYP2B基因參與的維生素A代謝和外源

8、藥物代謝等信號(hào)通路可能與埋植MLT促進(jìn)絨山羊非長(zhǎng)絨期絨毛生長(zhǎng)和毛囊發(fā)育有關(guān)。
　　（3）采用Real time定量PCR檢測(cè)技術(shù)，選擇芯片試驗(yàn)結(jié)果中表達(dá)差異顯著上調(diào)的PAX6基因和顯著下調(diào)的CSN2基因，進(jìn)一步擴(kuò)大樣本對(duì)芯片結(jié)果準(zhǔn)確性做驗(yàn)證。結(jié)果表明，PAX6基因在埋植MLT試驗(yàn)組羊皮膚中的表達(dá)量是對(duì)照組羊皮膚中表達(dá)量的2.399倍，CSN2基因在試驗(yàn)組羊皮膚中的表達(dá)量是對(duì)照組羊皮膚中表達(dá)量的0.044倍，與基因芯片結(jié)果完全相符，