內(nèi)蒙古白絨山羊角蛋白14(K14)基因啟動(dòng)子多態(tài)性及其與絨毛性狀關(guān)聯(lián)性.pdf

1、角蛋白14（Keratin14，KRT14，K14）作為哺乳類動(dòng)物絨毛結(jié)構(gòu)蛋白，與角蛋白5成對(duì)表達(dá)于表皮基底層細(xì)胞、絨毛及毛囊外根鞘細(xì)胞內(nèi),是覆層鱗狀上皮的生物標(biāo)記物。因此我們對(duì)內(nèi)蒙古白絨山羊角蛋白14啟動(dòng)子進(jìn)行了相關(guān)研究。
　　試驗(yàn)一：內(nèi)蒙古白絨山羊角蛋白14啟動(dòng)子的克隆和分析。本試驗(yàn)以內(nèi)蒙古白絨山羊DNA為模板，參照牛的角蛋白14序列設(shè)計(jì)和合成引物，通過PCR擴(kuò)增獲得長(zhǎng)度為2834bp（登錄號(hào)為JQ063036）,包括啟動(dòng)子區(qū)

2、2631bp和結(jié)構(gòu)基因第一外顯子區(qū)203bp的內(nèi)蒙古白絨山羊角蛋白14基因片段，對(duì)角蛋白14基因啟動(dòng)子結(jié)構(gòu)進(jìn)行了生物信息學(xué)分析，并與人和牛角蛋白14啟動(dòng)子序列做了比對(duì)。結(jié)果：山羊角蛋白14啟動(dòng)子結(jié)構(gòu)與人角蛋白14啟動(dòng)子只含有Sox-5，GATA-1，GATA-1/2結(jié)合位點(diǎn)等3個(gè)共同的轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合位點(diǎn)；但與牛的有較高的相似性，含有Sox-5，SRY，Cdx A，Myo D，MZF1，GATA-1/3，Nkx-2結(jié)合位點(diǎn)等7個(gè)共同的轉(zhuǎn)錄因

3、子結(jié)合位點(diǎn)。
　　試驗(yàn)二：內(nèi)蒙古白絨山羊角蛋白14基因單核苷酸多態(tài)性分析。①在對(duì)內(nèi)蒙古白絨山羊角蛋白14啟動(dòng)子序列克隆的基礎(chǔ)上，首先以20只山羊混合DNA為模板通過克隆測(cè)序?qū)ふ叶鄳B(tài)位點(diǎn)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)引物 D2和D4擴(kuò)增片段-421和-1838處出現(xiàn)套峰。②在-421和-1838處分別設(shè)計(jì)引物S1和S2，以150頭內(nèi)蒙古白絨山羊?yàn)檠芯繉?duì)象，應(yīng)用PCR-SSCP技術(shù)和DNA測(cè)序技術(shù)檢測(cè)內(nèi)蒙古白絨山羊角蛋白14啟動(dòng)子的分子變異。結(jié)果：引物S

4、1擴(kuò)增產(chǎn)物有AA、AG、GG3種基因型；引物S2擴(kuò)增產(chǎn)物有CC、CT、TT3種基因型；克隆測(cè)序分析，發(fā)現(xiàn)-421和-1838位點(diǎn)分別發(fā)生了A→G和C→T的堿基突變。③群體遺傳學(xué)表明：經(jīng)χ2檢驗(yàn)。-421（A→G）和-1838（C→T）位點(diǎn)上的SNP均處于Hardy-Weinberg(P>0.05)平衡狀態(tài)，且均屬中度多態(tài)。-421（A→G）位點(diǎn)AA型個(gè)體的絨厚顯著低于GG型和AG型個(gè)體，GG型個(gè)體的絨長(zhǎng)顯著高于AA型個(gè)體；-1838（C