番茄Sl-EBF2基因的克隆及遺傳轉(zhuǎn)化研究.pdf

1、乙烯是一種重要的植物激素，對(duì)植物生長(zhǎng)發(fā)育及果實(shí)成熟過(guò)程具有重要的調(diào)控作用。在擬南芥中研究表明，EBF2基因編碼的F-box蛋白，通過(guò)泛素/蛋白酶體途徑降解乙烯信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路中的重要調(diào)控因子EIN3蛋白參與調(diào)節(jié)植株對(duì)乙烯的反應(yīng)。但因擬南芥的果實(shí)發(fā)育與成熟特征不明顯，故目前在擬南芥中獲得的結(jié)果并不能闡明EBF2蛋白對(duì)番茄等肉質(zhì)果實(shí)發(fā)育與成熟的影響。
　　 本研究克隆并鑒定了番茄Sl-EBF2基因，進(jìn)行了番茄遺傳轉(zhuǎn)化研究。主要研究結(jié)果包

2、括：⑴采用RT-PCR方法擴(kuò)增出Sl-EBF2基因。測(cè)序結(jié)果顯示，Sl-EBF2基因全長(zhǎng)編碼區(qū)為1914bp，編碼637個(gè)氨基酸序列。亞細(xì)胞定位研究顯示其定位于細(xì)胞核內(nèi)。⑵采用定量PCR 方法對(duì)Sl-EBF2基因的表達(dá)模式分析表明，Sl-EBF2基因在花中、開(kāi)花期及果實(shí)發(fā)育的破色期和后熟期均有較高表達(dá)水平。⑶構(gòu)建了植物超表達(dá)載體pCambia1301-EBF2，經(jīng)PCR和測(cè)序驗(yàn)證正確后轉(zhuǎn)化入農(nóng)桿菌GV3101。⑷采用農(nóng)桿菌介導(dǎo)的葉盤(pán)法轉(zhuǎn)