番茄LeACBF基因的克隆及表達(dá)研究.pdf

1、苯丙氨酸解氨酶(PAL)是一種誘導(dǎo)酶,許多環(huán)境條件以及植物激素對其活性都有不同程度的影響,它與植物抗逆有著極其密切的關(guān)系,對植物的生理意義非常重大.ACBF編碼了結(jié)合在苯丙氨酸解氨酶啟動子AC富集區(qū)上的一個轉(zhuǎn)錄因子,ACBF基因已經(jīng)在擬南芥、煙草等植物中得到了克隆.根據(jù)GenBank中的擬南芥、煙草ACBF家族成員序列比較的結(jié)果,在該基因的保守區(qū)設(shè)計簡并引物(degenerate primer),以轉(zhuǎn)色期普通番茄果實的RNA為模板,進(jìn)行

2、RT-PCR擴增,獲得239 bp的擴增片段,以此片段作為探針篩選轉(zhuǎn)色期普通番茄果實cDNA噬菌體文庫,獲得了包含全長編碼區(qū)的陽性克隆.序列分析表明這個基因?qū)儆贏CBF家族,命名為LeACBF.LeACBF的cDNA長1503bp,編碼區(qū)含有428個氨基酸.LeACBF與煙草中的ACBF基因在DNA水平上的序列相似性為83﹪,在氨基酸水平上的序列相似性為79﹪,是一個新基因.LeACBF的DNA序列已在GenBank登錄,登錄號為AY5

3、06544.Northern雜交的結(jié)果分析表明:LeACBF基因在轉(zhuǎn)色期番茄的根、莖、葉、果實等組織中均有表達(dá),并且表達(dá)量無明顯差異.用不同的紫外線照射時間處理番茄幼芽,苯丙氨酸解氨酶(PAL)的活性呈先是增加,達(dá)到最大值后再減小的趨勢.通過Northern雜交結(jié)果的分析,LeACBF基因的表達(dá)量與苯丙氨酸解氨酶(PAL)的活性變化具有相同的趨勢.表明在紫外光照射條件下,LeACBF編碼的轉(zhuǎn)錄因子的變化趨勢與苯丙氨酸解氨酶(PAL)活性