番茄Sl-XRN2、Sl-XRN4基因的克隆及遺傳轉(zhuǎn)化研究.pdf

1、5’-3’核酸外切酶是一類重要的酶，廣泛存在于各種生物體內(nèi)，在生長發(fā)育過程中具有重要的作用。XRN家族是一類重要的5’-3’核酸外切酶家族，存在于各種動(dòng)物、植物以及微生物中。目前已知的XRN家族成員包括Xrn1p、Xrn2p、XRN2、XRN3以及XRN4，不同的家族成員其功能以及作用的場(chǎng)所不同。XRN2位于細(xì)胞核內(nèi)，主要參與rRNA前體的成熟加工、MIRNA-loop的降解以及外源RNA的降解過程；XRN4位于細(xì)胞質(zhì)，主要參與miRN

2、A剪切產(chǎn)物的降解、外源RNA的降解過程以及乙烯信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路。
　　目前在植物中，對(duì)XRN家族的研究主要在擬南芥中進(jìn)行，在煙草中也有少量的研究報(bào)道。雖然擬南芥是一種生物學(xué)研究的重要模式植物，但它有一定的局限性，尤其是其果實(shí)發(fā)育和成熟的特征不明顯。番茄作為果實(shí)類的重要模式植物，具有明顯的果實(shí)發(fā)育特征。因此以番茄為對(duì)象可以研究XRN家族對(duì)植物生長發(fā)育及果實(shí)成熟衰老的影響，對(duì)闡明果實(shí)成熟衰老機(jī)理具有重要參考價(jià)值。
　　為了揭示番茄X

3、RN2、XRN4在植物生長發(fā)育過程中的功能，本研究克隆了番茄Sl-XRN2、Sl-XRN4基因并對(duì)其進(jìn)行了生物信息學(xué)分析、表達(dá)模式分析以及遺傳轉(zhuǎn)化研究。主要研究結(jié)果如下：
　?、俨捎肦T-PCR方法擴(kuò)增出Sl-XRN2基因。測(cè)序結(jié)果表明，Sl-XRN2基因的開放閱讀框包含3327bp，編碼1109個(gè)氨基酸。
　?、诓捎肦T-PCR方法擴(kuò)增出Sl-XRN4基因。測(cè)序結(jié)果表明，Sl-XRN4基因的開放閱讀框包含2937bp，編碼

4、978個(gè)氨基酸。
　?、鄄捎冒攵縋CR方法對(duì)Sl-XRN2基因進(jìn)行了表達(dá)模式分析，結(jié)果表明Sl-XRN2基因在根中的表達(dá)水平最高。
　?、軐?duì)番茄葉片進(jìn)行傷害處理，Sl-XRN2基因表達(dá)水平上升。
　?、輼?gòu)建了Sl-XRN2基因的正義及反義表達(dá)載體，經(jīng)PCR和測(cè)序驗(yàn)證正確后對(duì)農(nóng)桿菌GV3101進(jìn)行了轉(zhuǎn)化。
　?、迾?gòu)建了Sl-XRN4基因的正義及反義表達(dá)載體，經(jīng)PCR和測(cè)序驗(yàn)證正確后對(duì)農(nóng)桿菌GV3101進(jìn)行了轉(zhuǎn)化。