葡萄ACO基因的克隆及其遺傳轉化的研究.pdf

1、葡萄作為一種重要的經(jīng)濟作物，其產(chǎn)量可占全球水果產(chǎn)量的25％，葡萄果實中含有極其豐富的營養(yǎng)物質(zhì)，因此常常用于制成果汁、葡萄干和葡萄酒等。但同時也由于葡萄易受到病蟲害、機械傷害、生理失調(diào)和果實自身成熟等因素的影響，而導致其經(jīng)濟效益的損失。眾所周知，乙烯作為一種氣體植物激素，對植物的生長發(fā)育以及植物對逆境脅迫的響應具有重要的調(diào)節(jié)作用。在乙烯的生物合成途徑中，1-氨基環(huán)丙烷-1-羧酸氧化酶（1-aminocyclopropane-1-carbo

2、xylic acid oxidase，ACO）催化1-氨基環(huán)丙烷-1-羧酸(ACC)轉變成乙烯，它是乙烯合成途徑中最后一個限速酶，對乙烯的生物合成具有重要的調(diào)控作用。因此，對ACC氧化酶的研究就顯得極為必要。
　　本研究利用RT-PCR方法從葡萄中分離到了兩個ACO基因，并將其命名為VvACO1和VvACO2，其中VvACO1基因開放閱讀框長1020bp，共編碼339個氨基酸，VvACO2基因開放閱讀框長957bp，共編碼318個

3、氨基酸。對兩個ACO基因編碼的氨基酸序列分析表明均具有ACO家族的保守結構域。多序列比對結果表明兩個ACO基因編碼的氨基酸序列與其他高等植物ACO的氨基酸序列具有較高的相似性。為了進一步分析ACO基因的功能，將ACO基因正向插入植物表達載體pCAMBIA Super-1300中，構建了ACO基因正義表達載體，以Micro-Tom番茄和Columbia型擬南芥為受體材料，利用農(nóng)桿菌介導的葉盤轉化法和蘸花法實現(xiàn)對番茄和擬南芥的遺傳轉化。使用