柑橘CitSERK基因克隆、序列分析及其遺傳轉(zhuǎn)化.pdf

1、植物組織培養(yǎng)中,胚性愈傷組織經(jīng)長(zhǎng)期繼代后分化能力能否保持,一直是細(xì)胞工程研究中的重要課題。柑橘部分品種的愈傷組織經(jīng)長(zhǎng)期繼代后,仍具有很強(qiáng)的體胚發(fā)生能力,但也有一些品種的愈傷組織經(jīng)長(zhǎng)期繼代后體胚發(fā)生能力下降,甚至完全喪失體胚發(fā)生能力。從柑橘愈傷組織中克隆控制體胚發(fā)生的基因,對(duì)于通過(guò)基因工程改良品種、提高轉(zhuǎn)化子的再生具有重要意義。對(duì)柑橘體細(xì)胞胚胎發(fā)生的研究,有助于進(jìn)一步揭示柑橘愈傷組織體細(xì)胞胚胎發(fā)生的分子調(diào)控機(jī)理,同時(shí),也有助于進(jìn)一步提高柑

2、橘愈傷組織離體種質(zhì)庫(kù)用于生物技術(shù)遺傳改良的效率。
　　 本研究以暗柳橙的愈傷組織為實(shí)驗(yàn)材料,利用RT-PCR方法克隆了CitSERK的cDNA全序列,并對(duì)其核苷酸序列及其編碼的氨基酸序列進(jìn)行了生物信息學(xué)分析。同時(shí),還構(gòu)建了CitSERK的正義表達(dá)載體和反義表達(dá)載體,并進(jìn)行了遺傳轉(zhuǎn)化。主要研究結(jié)果如下:
　　 1.提取了暗柳橙愈傷組織的總RNA,所提取的RNA的A260/A280在1.65-1.90之間,A260/A230

3、大于2.0；其質(zhì)量和濃度能夠直接用于其它分子生物學(xué)研究,如RT-PCR圾Northern雜交等實(shí)驗(yàn)。
　　 2.利用RT-PCR方法從暗柳橙愈傷組織中克隆得到CitSERK基因的cDNA全序列,全長(zhǎng)1886 bp,并對(duì)重組質(zhì)粒DNA進(jìn)行了PCR檢測(cè)和酶切檢測(cè)。
　　 3.利用美國(guó)國(guó)立生物技術(shù)信息中心BLAS工程序、ExPASy和Clustal W軟件進(jìn)行分析發(fā)現(xiàn),CitSERK基因與已克隆的其它SERK基因具有很高的同源