雞馬立克氏病疫苗CVI988-RISPENS毒種CEF細(xì)胞適應(yīng)株的免疫相關(guān)性分析.pdf

1、馬立克氏病毒(MDV)1型CVI988/RISPENS疫苗毒種是荷蘭學(xué)者Rispens等發(fā)現(xiàn)的，經(jīng)組織傳代致弱而成。將該30代毒種用SPF雞胚成纖維細(xì)胞(CEF)傳至45代，并分析其一系列免疫相關(guān)特性。
　　 ⑴培養(yǎng)特性與血清型鑒定。CEF適應(yīng)株35、40、45代毒種，30代毒種和FC126毒種分別按每胚1500PFU經(jīng)卵黃囊接種5枚5日齡雞胚，培養(yǎng)14～16天，記錄雞胚死亡和絨毛尿囊膜痘斑變化。分別按每4個(gè)培養(yǎng)瓶(100ml)

2、毒種接種1個(gè)轉(zhuǎn)瓶(1萬ml)CEF細(xì)胞單層，轉(zhuǎn)動(dòng)培養(yǎng)觀察至60小時(shí)，觀察病變形成和發(fā)展過程，試驗(yàn)上述毒種采用工業(yè)化CEF細(xì)胞生產(chǎn)工藝的培養(yǎng)特性。結(jié)果表明：30代毒種和CEF適應(yīng)株疫苗都具有良好的培養(yǎng)特性，經(jīng)卵黃囊接種可在CAM上產(chǎn)生經(jīng)典痘斑，但不致死雞胚；CEF適應(yīng)株在CEF單層上生長迅速，48-52小時(shí)天病變面積達(dá)到70％，病變形態(tài)一致，轉(zhuǎn)瓶單產(chǎn)6-7萬羽份(按每羽3500PFU計(jì)).用24孔細(xì)胞培養(yǎng)板培養(yǎng)CEF細(xì)胞，分別接種上述5種

3、毒種和Z4毒種，分別用MDV1型(H34，H19，2BN90)，MDV2型(Y5)，MDV3型(L78)特異性單抗和型共同單抗(T81)進(jìn)行IFA試驗(yàn)。IFA試驗(yàn)顯示，CEF適應(yīng)株毒種與MDV型共同單抗T81和1型單抗2BN90起反應(yīng)，證實(shí)為MDV1型，與MDV1型強(qiáng)毒單抗H34、H19和MDV2型、3型單抗結(jié)果為陰性，表明不含MDV1型強(qiáng)毒、MDV2型以及MDV3型病毒。
　　 ⑵免疫效力與免疫抑制試驗(yàn)。用1000PFU的CE

4、F適應(yīng)株45代毒種和30代毒種、MDV2+3型雙價(jià)疫苗毒種、MDV3型FC126毒種分別免疫1日齡SPF雛雞，7日齡分別用MDV強(qiáng)毒和超強(qiáng)毒攻擊，比較免疫原性，對(duì)強(qiáng)毒GA(1000PFU)攻擊的P1分別為87.4、91.4、82.7和62.1。對(duì)超強(qiáng)毒的P1分別為74.3、73.6、67.0和38.5。CEF適應(yīng)株45代毒種和30代毒種兩者免疫原性相當(dāng)，與2+3型雙價(jià)疫苗差異不顯著，顯著高于MDV3型FC126疫苗。用3000PFU的C

5、EF適應(yīng)株45代疫苗、MDV2+3型雙價(jià)疫苗以及MDV3型FC12分別免疫1日齡SPF雞和帶有母源抗體的伊莎雞、AA雞、狼山雞和烏骨雞各20～30羽，7日齡后用超強(qiáng)毒攻擊，比較其免疫效力，SPF雞的P1分別為86.1、82.9、45.8。CEF適應(yīng)株疫苗免疫普通雞的PI為65.1～75.8(平均值為69.2)，與MDV2+3型雙價(jià)疫苗(55.0～73.2平均值為61.7)差異不顯著，顯著高于3型FC126疫苗(23.3～56.5平均值為

6、40.0)。表明，CEF適應(yīng)株45代疫苗產(chǎn)生的免疫力對(duì)超強(qiáng)毒攻擊的保護(hù)，與MDV2、3型雙價(jià)疫苗差異不顯著，顯著高于MDV3型疫苗。CEF適應(yīng)株45代疫苗按每羽3000PFU免疫1日齡SPF雞，免疫后不同日齡采集全血，分離白細(xì)胞，分別接種于生長良好的細(xì)胞單層，靜置培養(yǎng)5天后計(jì)數(shù)PFU，測定病毒載量。結(jié)果表明：4日齡雞開始產(chǎn)生病毒血癥(3PFU/2×106WBC)，7至21日齡達(dá)到高峰(31.5～36PFU2×106WBC)，以后逐步下降

7、。分別用CEF適應(yīng)株35代、Z4、SB1和HVT疫苗按每羽30000PFU接種10只1日齡SPF雛雞，RB1B毒種每羽接種1000PFU，7天后每只雞滴鼻免疫新城疫(ND)La Sota株疫苗1羽份，3周后采血測ND HI，比較抗體水平，CEF適應(yīng)株35代試驗(yàn)組HI為7.2，對(duì)照組為7.5。結(jié)果表明，用CVI988/PispensCEF適應(yīng)株疫苗免疫雛雞，對(duì)其它疫苗的免疫無免疫抑制作用。
　　 ⑶毒力穩(wěn)定性與安全性。將30代毒種