馬立克氏病病毒CVI988通用轉移載體的構建及表達IBDV VP2基因重組病毒的研制.pdf

1、以MDV疫苗作載體構建活病毒載體疫苗是近年來禽病毒基因工程研究中比較活躍的領域。多年的生產實踐證實了MDV疫苗作為活病毒載體的安全性、有效性。 傳染性法氏囊病IBD)是由雞傳染性法氏囊病毒(IBDV)引起的雞和火雞的一種高度接觸性傳染病。常規(guī)疫苗特別是中等毒力活疫苗免疫雞群是控制IBD的主要方法。然而疫苗造成的免疫抑制，使得雞群易發(fā)其他疫病以及雞群對其他疫苗的效果降低。為此，本研究選用CVI988疫苗作載體，插入IBDVVP2保

2、護性抗原基因，構建重組病毒，為重組馬立克氏病毒基因工程疫苗的深入研究奠定基礎。 1.MDVCVI988通用轉移載體的構建 根據(jù)Ⅰ型MDV強毒GA株基因序列，設計兩對引物，以病毒感染雞胚成纖維細胞中提取的病毒基因組總DNA為模板，用PCR方法擴增出CVI988/Rispens株的US10區(qū)及其側翼US1和sorf3序列，分別克隆入pGEM-Teasy載體中，陽性質粒分別命名為T-US10L，T-US10R，經測序表明，克隆

3、的基因片段與Ⅰ型MDV強毒GA株基因序列完全一致。然后將US10R片段插入pUC18載體中，構建成功pUC18-US10R質粒，再將US10L片段插入pUC18-US10R質粒中，構建成功pUC18-US10質粒。根據(jù)pcDNA3.1載體序列，設計1對引物，擴增跨幅為1.0kb，包含CMV啟動子和polyA的多克隆位點基因表達盒，克隆入pGEM-Teasy載體中，陽性質粒命名為T-MCS，進一步將此多克隆位點基因表達盒插入上述pUC18

4、-US10質粒，構建成功馬立克氏病病毒CVI988通用轉移載體質粒pUC18-US10-MCS。實驗結果表明本研究構建的pUC18-US10-MCS通用轉移載體質粒正確，擁有多個可利用的單一常用酶切位點，為構建馬立克氏病毒重組基因工程疫苗奠定了基礎。 2.表達IBDV-VP2基因的重組MDV的研制 利用實驗室已構建的pGEM-T-VP2質粒，酶切獲得VP2基因片段，克隆入馬立克氏病病毒CVI988通用轉移載體質粒pUC1