雞馬立克氏病二價活疫苗（CVI988-Rispens+HVT）生產(chǎn)工藝的優(yōu)化.pdf

1、在為提高雞胚的利用率,對雞胚成纖維細胞制備方法進行了優(yōu)化。用相同的制作方法、相同的培養(yǎng)條件培養(yǎng)細胞,比較SPF雞胚與普通雞胚的細胞總數(shù)與細胞生長狀況,結果表明,兩者無顯著差異；采用磁力攪拌法分散細胞,則每胚的細胞總數(shù)(有效的活細胞量)2.0-2.4億之間,是吸管吹打法和玻璃珠分散法的3-4倍,極大地提高了每胚的細胞數(shù)量。優(yōu)化的最佳結果為采用磁力攪拌分散法、0.25％胰酶、4mL/胚、400rpm消化6分鐘共消化4次、1％FBS Hank

2、’S液終止消化和5％FBSH10-M199細胞生長液,是制作雞胚成纖維細胞的最好方法。 優(yōu)本研究在種毒復蘇的溫度、F1代的接毒量、轉瓶接毒量、接毒方法等方面進行了平行性試驗,試驗表明CVI988種毒在60秒內用27℃至37℃的溫水迅速溶解,失毒率在6％之內；F1代的接毒量,CVI988與HVT分別以20萬、13萬PFU/方瓶最為適宜；轉瓶的接毒量,CVI988與HVT分別以1200萬、800萬PFU/轉瓶最為適宜；批量生產(chǎn)時,轉瓶

3、采用分步接毒的方法,舍毒細胞經(jīng)分別培養(yǎng)、收獲后,HVT:CVI988的比例按1:2配苗,效價符合《規(guī)程》的規(guī)定,同時CVI988與HVT的產(chǎn)量分別達到了5萬、10萬羽份/轉瓶；選擇含1％新生血清(FBS)的F10-M199作為病毒細胞維持液,既能保證含毒細胞的正常生長,又能大幅度地降低生產(chǎn)成本,適合工業(yè)化生產(chǎn)。 培養(yǎng)方法在含毒細胞的收獲與凍存過程中,胰酶與EDTA的配比、凍存液中二甲基亞砜的含量和凍存方法,是影響疫苗效價的最主要因