三種品系雞對馬立克氏病病毒易感性差異的比較研究.pdf

1、馬立克氏病(Marek’ s Disease，MD)是由馬立克氏病病毒(Marek’ s Disease Virus,MDV)引起的雞群常見的具有高度傳染性的淋巴細胞增生性疾病。該病以胸腺法氏囊萎縮，外周神經(jīng)、各個臟器、肌肉、皮膚中單核細胞浸潤以及由于外周神經(jīng)腫瘤細胞的集聚而導致的半癱瘓或完全癱瘓為典型特征。MDV在淋巴細胞中復制，并潛伏感染CD4+T淋巴細胞。潛伏性感染的CD4+T淋巴細胞將病毒粒子攜帶到內(nèi)臟器官、外周神經(jīng)及羽毛囊上皮

2、中。感染MDV的雞羽毛囊上皮中有囊膜的病毒粒子可脫離細胞而存在，帶病毒的皮屑的脫落可對雞群和環(huán)境造成污染。根據(jù)雞群對MD致瘤的遺傳抗性，美國農(nóng)業(yè)部禽病與腫瘤學研究所已將白來航雞分為抗MD品系雞（63）和易感MD品系雞（72和15I5×71）。免疫同一MD疫苗后,MD遺傳抗性品系雞對MD超強毒力株有更強的抗性,表現(xiàn)為低死亡率。本研究成功建立了63和72品系雞動物模型，用于比較兩種品系雞對MDV感染產(chǎn)生的不同免疫反應。并進一步建立了15I5

3、×71品系雞動物模型，探究皮膚對MDV感染產(chǎn)生的免疫反應及其機理。本研究分為兩個部分：
　　第一部分：63和72品系雞對MDV免疫反應的比較。1日齡63和72品系雞，分別隨機分為兩組（實驗組和對照組），每組25只。12日齡時，腹腔注射rMd5-BAC（vvMDV），劑量為2000PFU/只，對照組不攻毒。攻毒后第21天，雞群出現(xiàn)明顯的免疫抑制癥狀，采集雞冠和脾臟組織，進行免疫組織化學分析、組織病理學分析、革蘭氏染色、反轉錄PCR以

4、及熒光定量PCR方法，來探究63和72品系雞對MDV感染產(chǎn)生的不同免疫反應。63和72品系雞有相同的主要組織相容性復合體（major histocompatibility complex，MHC）單倍型（B2/B2），其中，63品系雞為MD抗性品系雞，在感染MDV后，除表現(xiàn)典型的MD相關癥狀外，還出現(xiàn)了嚴重的雞冠和雞爪的壞疽現(xiàn)象。72品系雞為MD易感品系雞，雖未出現(xiàn)壞疽現(xiàn)象，但表現(xiàn)出雞冠蒼白、眼瞼擴張，且因暫時麻痹及其他并發(fā)癥而出現(xiàn)高死

5、亡率。免疫組化結果表明，兩種品系雞雞冠組織中均有大量的巨噬細胞和淋巴細胞浸潤，63品系雞壞疽雞冠組織中有大量CD8+T淋巴細胞，而72品系雞實驗組雞冠中卻未檢測到；組織病理學結果表明，63品系雞壞疽雞冠表皮侵蝕變薄，結締組織出現(xiàn)淋巴漿細胞浸潤，并伴隨異嗜性和組織性蜂窩織炎，72品系雞實驗組雞冠組織表皮輕度侵蝕，且出現(xiàn)嚴重的淋巴漿細胞性血管炎；革蘭氏染色結果表明，63品系雞雞冠壞疽組織中存在革蘭氏陽性菌，而72品系雞雞冠中未檢測到；熒光定

6、量PCR結果表明，63品系雞壞疽雞冠中，除了IL-8和iNOS，其他基因幾乎不表達，而72品系雞雞冠中，IL-6、IL-8、IL-12、IL-18、iNOS和IFN-γ的表達量均上調(diào)；反轉錄PCR結果表明，兩種品系雞的脾組織中，均有meq基因的轉錄，而雞冠組織中，只有72品系雞有meq基因的轉錄。MD抗性品系雞63和易感品系雞72，在感染MDV后表現(xiàn)出不同的免疫抑制癥狀。其中，63品系雞雖然為MD抗性品系雞，但自然狀態(tài)下，出現(xiàn)了壞疽現(xiàn)象

7、，且感染MDV后，壞疽加重。研究結果提示我們，人為篩選雞群某種特性（例如MD抗性）的同時，會對雞群的免疫力產(chǎn)生不利影響，使其對一些病原微生物或環(huán)境的抵抗力減弱。
　　第二部分：15I5×71品系雞皮膚組織對MDV的免疫反應及其機理。15I5×71品系雞對MD的易感性與72品系雞相似，1日齡15I5×71品系雞隨機分為兩組（實驗組和對照組），每組15只。12日齡時，腹腔注射rMd5-BAC（vvMDV），劑量為2000PFU/只，對

8、照組不攻毒。攻毒后第26天，雞群出現(xiàn)明顯的免疫抑制癥狀。通過采集皮膚組織，進行免疫組織化學分析、及熒光定量PCR分析，探究MDV感染導致15I5×71品系雞羽毛囊上皮的免疫反應、免疫抑制機理及免疫逃避機制。免疫組化結果表明，實驗組雞只羽毛囊上皮細胞中，病毒大量復制，輔助T細胞和巨噬細胞的數(shù)量增加，而細胞毒性T淋巴細胞大量缺失。熒光定量PCR結果表明，實驗組皮膚組織中大部分基因的表達量均上調(diào)，然而，幾個重要的免疫相關基因（如：CD107a

9、、ITGA6、TGF-β、IFN-β）的轉錄活性卻降低。盡管整體的基因表達水平表明，機體產(chǎn)生了有效的Th1型免疫反應,但在羽毛囊上皮細胞中，游離于細胞外的病毒粒子的復制不受拘束。由此推測，MDV對15I5×71品系雞產(chǎn)生免疫抑制的機制，是通過下調(diào)CD8的表達量，來抑制細胞毒T細胞的功能，并通過降低細胞粘附分子的表達，來阻止細胞毒性T細胞的遷移。MDV的感染導致細胞毒性T細胞的缺失或者其生物功能的缺乏，使機體缺少一個有效的細胞免疫反應。同